局部麻醉剂通过丝裂原活化蛋白激酶途径诱导人甲状腺癌细胞凋亡

目的探讨局部麻醉剂对人甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法检测人甲状腺癌细胞经0 mM、1 mM、2 mM、4 mM、8 mM和16 mM的利多卡因及0 mM、0.2 mM、0.4 mM、0.8 mM、1.6 mM和3.2 mM的布比卡因分别干预24 h和48 h后的细胞活力流式细胞仪检测经4 mM和8 mM的利多卡因和0.8 mM和1.6 mM的布比卡因干预48 h后癌细胞的凋亡及线粒体膜电位;Western Blot检测凋亡相关因子及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径相关蛋白的表达;分别采用SP600125(JNK抑制剂)、PD98059(MEK抑制剂)、SB203580(p38 MAPK抑制剂)联合利多卡因或布比卡因对细胞进行处理,Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果利多卡因和布比卡因干预24 h和48 h均可呈剂量依赖式抑制人甲状腺癌细胞的生长。利多卡因和布比卡因干预48 h可降低癌细胞线粒体膜电位,增加Caspase-3和Bax的表达,降低Bcl-2的表达激活p38和JNK,抑制ERK的活性。MAPK信号通路抑制剂可降低利多卡因和布比卡因诱导Caspase-3和Bax的表达,增加Bcl-2的表达。结论局部麻醉剂利多卡因和布比卡因可诱导人甲状腺癌细胞生存抑制和凋亡,其机制与MAPK通路激活有关。     

全麻下后腹腔镜手术中应用呼气末正压加高呼吸频率通气模式对呼吸功能的影响

目的探讨术中呼气末正压(positive expiratory end pressure,PEEP)通气及高呼吸频率(high respiratory rate,HRR)能否安全有效地用于全麻下的后腹腔镜手术。方法 36例ASAⅠ-Ⅱ级,择期全麻下行后腹腔镜手术患者,随机均分为3组:对照组(control组),呼气末正压组(PEEP组),呼气末正压加高呼吸频率组(PEEP+HRR组),每组12例。常规麻醉诱导,气管插管后行机械通气,麻醉维持用药相同。气腹前,三组通气参数均设定为潮气量(VT)7 ml/kg,呼吸频率(RR)12次/min,吸呼比(I∶E)=1∶2。气腹后,对照组(n=12)同气腹前常规正压通气;PEEP组(n=12)VT=7 ml/kg,RR=12次/min,PEEP=4 cm H2O;PEEP+HRR组(n=12)VT=7 ml/kg,RR=18次/min,PEEP=4 cm H2O。在气腹前、气腹后30 min(PI30min)、气腹后60 min(PI60 min)、放气腹后5 min(PD1 min)、拔管后5 min(EX 5 min)、拔管后0.5 h(EX30 min)6个时点记录呼气末CO2(ETCO2)、动脉血Pa CO2、p H并计算动脉与呼气末CO2差值(D(a-e)CO2)。结果 PEEP组和PEEP+HRR组在PI30 min、PI60 min、PD5 min和EX5 min的Pa CO2均明显低于对照组(P<0.01),PEEP+HRR组在上述各时点其Pa CO2低于PEEP组(P<0.05);PEEP组与PEEP+HRR组在气腹后至EX5 min,其D(a-e)CO2均明显低于对照组(P<0.01),PEEP+HRR组在气腹后至EX5 min各时点,其D(a-e)CO2低于PEEP组(P<0.05)。结论后腹腔镜术中使用PEEP可有效减少动脉血和呼吸末的CO2差值;增加呼吸频率可有效加快动脉血CO2分压的下降并改善术后的氧合指数。呼气末正压加高呼吸频率通气模式可有效降低术中高碳酸血症的程度,减少后腹腔镜术中CO2蓄积,促进术后早期呼吸功能恢复。     

七氟醚对神经发育期大鼠远期认知功能影响及机制探讨

目的:探讨七氟醚对神经发育期大鼠远期认知功能影响及机制.方法: 选择清洁级SD雄性大鼠96只,根据随机数字表法,分为空白组、七氟醚1组及七氟醚2组,空白组吸入空气,七氟醚1组吸入2. 8%七氟醚2 h,2组吸入2. 8%七氟醚4 h,30 d后3组均行水迷宫实验,对比3组大鼠的认知功能.实验结束后,用Western blot法检测大鼠的海马脑源性神经营养因子(BDNF)、突触后致密物质95(PSD-95)及突触蛋白-1水平.结果: 七氟醚1组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均明显高于空白组,穿越原平台位置次数、平台所在象限滞留时间均明显低于空白组,而七氟醚2组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均明显高于空白组及七氟醚1组,穿越原平台位置次数、平台所在象限滞留时间均明显低于空白组及七氟醚1组(P＜0. 05).七氟醚1组的BDNF、PSD-95、突触蛋白-1明显低于空白组;七氟醚2 组的BDNF、PSD-95、突触蛋白-1 明显低于空白组及七氟醚1 组(P＜0. 05).结论: 七氟醚可能通过降低BDNF、PSD-95、突触蛋白-1水平,抑制海马神经元突触可塑性来影响大鼠的远期认知功能,影响程度随麻醉时间延长而增加.     

甲磺酸罗哌卡因和盐酸布比卡因硬膜外术后镇痛效果及对应激反应的影响

盐酸罗哌卡因是一种长效酰胺类局麻药，因其具有较小的心脏毒性而广泛应用于硬膜外麻醉和术后镇痛。甲磺酸罗哌卡因是将盐酸罗哌卡因的盐酸根改为甲磺酸根后的一种国产新型酰胺类局麻药。本研究比较甲磺酸罗哌卡因与盐酸布比卡因硬膜外术后镇痛临床效果及对术后应激反应的影响。     

Bad蛋白对细胞凋亡的调控作用

Bad是Bcl-2家族中与Bcl-2和Bcl-xL相关的促凋亡基因。Bcl-2家族促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白通过竞争性相互作用来调控细胞凋亡。Bad在多种细胞中表达,近年研究表明Bad可通过细胞信号转导通路和与caspase家族成员的作用来参与细胞凋亡的全过程。其在脑缺血损伤和肿瘤方面的研究受到重视。     

脂氧素A4后处理对大鼠全脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 评价脂氧素A4时处理对大鼠全脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响.方法 雄性成年SD大鼠180只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和脂氧素A4后处理组(L组).I/R组和L组采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型.L组于再灌注即刻侧脑室注射脂氧素A4 100 ng(用生理盐水稀释至5ul),S组和I/R组侧脑室注射生理盐水5ul.分别于再灌注2、6、12、24和72 h时,处死6只大鼠,取脑组织,行HE染色,光镜下观察病理学结果,采用免疫组化法测定海马CA1区caspase-3表达.分别于再灌注2、6、12、24和72 h时,处死6只大鼠,取海马组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与S组比较,I/R组和L组再灌注各时点海马CA1区caspase-3表达上调,海马组织细胞凋亡率升高(P＜0.01);与I/R组比较,L组再灌注各时点海马CA1区caspase-3表达下调,海马组织细胞凋亡率降低(P＜0.01),病理学损伤减轻.结论脂氧素A4后处理减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤的机制与下调caspase-3表达,减少细胞凋亡有关.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元DNA修复中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元DNA修复中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠108只,采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为3组(n=36):假手术组(S组)仅暴露双侧颈总动脉和椎动脉;缺血再灌注组(IR组)侧脑室注射1%DMSO溶液5μl,30 min后行全脑缺血再灌注;p38 MAPK抑制剂SB203580干预组(SB组)侧脑室注射SB203580溶液5 μl(溶于1%DMSO溶液),30 min后行全脑缺血再灌注.分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h时各组处死6只大鼠,提取海马组织观察神经元病理学结果,计算神经元凋亡指数(AI),测定磷酸化的p38 MAPK蛋白及Ku70蛋白表达水平.结果 与S组比较,IR组和SB组各时点AI升高,p-p38 MAPK蛋白表达上调,p-Ku70蛋白表达下调(P(0.05或0.01),病理损伤明显;与IR组比较,SB组各时点AI降低,p-p38 MAPK蛋白表达下调,p-Ku70蛋白表达上调(P<0.01),病理损伤程度减轻.结论 p38 MAPK可能通过下调DNA修复酶Ku70蛋白的表达,使海马神经元DNA修复功能受损,导致神经元凋亡,参与全脑缺血再灌注损伤.     

ERK在脑缺血再灌注大鼠海马细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在脑缺血再灌注大鼠海马细胞凋亡中的作用.方法 健康雄性SD大鼠90只,体重280～320 g,随机分为3组(n=30):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和ERK磷酸化特异性抑制剂PD98059组(PD组).采用4血管法建立大鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注后2、6、12、24、48、72 h时,各取5只大鼠,断头取脑,光镜下观察海马CA1区和CA3区病理学结果 ,计算细胞凋亡指数(AI),采用免疫组化法检测磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化Bad(p-Bad)的表达.结果 与S组比较,IR组和PD组再灌注期间CAI区和CA3区AI升高,再灌注2、6、12 h时CA1区p-ERK表达降低,再灌注后CA1区和CA3区p-Bad表达降低(P＜0.05);与IR组比较,PD组再灌注后CA1医和CA3区AI升高,再灌注2、6、12、24 h时CA3区p-ERK表达降低,再灌注2、6 h时CA1区p-Bad表达降低,再灌注2、6、12h时CA3区p-Bad表达降低(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注可降低ERK活性,导致Bad蛋白去磷酸化,从而诱发大鼠海马细胞凋亡.     

SP600125-JNK抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元的保护作用

目的:探讨SP600125-JNK特异性抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护性作用及其作用机制.方法:雄性SD大鼠108只,体质量290～310 g,随机分成假手术组(SH组),缺血再灌注组(IR组),JNK抑制剂SP600125组(SP组),分别于缺血前30 min侧脑室注射10 mL/L DMSO,10mL/L DMSO及JNK抑制剂SP600125.每组根据再灌注时间分为2,6,12,24,48和72 h 6个亚组,每亚组6只动物.采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在预定时间点行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片,光镜下计数CA1区存活细胞,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞,免疫组化检测DNA修复蛋白X线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)的表达变化.结果:脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目SP组高于IR组(P＜0.01),凋亡细胞数目低于IR组(P＜0.01).SH组XRCC1表达量较强,IR组XRCC1的表达2 h即已开始下降,与SH组比较有统计学差异(P＜0.01).SP组XRCC1表达量的降低不明显,各时点与IR组比较均有统计学差异(P＜0.01).结论:在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中,SP600125-JNK特异性抑制剂对神经元起到了显著的保护性作用,其机制可能为抑制DNA修复蛋白下调的方式维护DNA修复功能,从而减少神经元的凋亡.     

大鼠全脑缺血-再灌注时细胞凋亡与信号转导通路磷酸化p38的表达及相互关系

目的探讨大鼠全脑缺血-再灌注后不同时点海马CA1区信号转导通路磷酸化激酶p38与细胞凋亡的相互关系。方法健康清洁雄性SD大鼠108只随机均分为缺血-再灌注组(IR组)、SB203580干预组(SB组)和假手术组(PO组)。采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血-再灌注模型。SB组于再灌注前30 min侧脑室注射p38抑制剂SB203580。IR组和PO组按照与SB组相同的侧脑室注射方法,于侧脑室注射相同体积的溶剂(即不含溶质SB203580)。三组均分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h处死大鼠,提取海马组织,石蜡包埋切片,HE染色观察神经元细胞形态;免疫组织化学方法检测磷酸化p38表达;TUNEL检测凋亡细胞。结果PO组神经元细胞形态完整,IR组神经元细胞形态不完整,SB组介于上两组之间。PO组凋亡指数低,IR组凋亡指数高,SB组在两组之间。PO组各时点磷酸化p38表达少;IR组多;SB组介于两组之间。结论大鼠全脑缺血-再灌注早期,海马CA1区p38信号转导通路的激活可引起神经元细胞凋亡,并且这一作用可以被p38特异性抑制剂SB203580抑制。