基于上转发光免疫层析技术的常见食源性致病菌快速检测方法研究与评价

目的：研制针对4种常见食源性致病菌：甲型副伤寒沙门菌（ Salmonella paratyphi A）、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）、大肠埃希菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的基于上转发光免疫层析技术（ UPT－LF）的快速定量检测试纸,并对其检测性能进行评价。方法以上转发光纳米颗粒（ UCP－NPs）作为示踪物,基于双抗体夹心检测模型,研制针对上述4种靶标菌的UPT－LF试纸;以4种靶标菌的系列浓度标准菌悬液作为标准样品,评价试纸的敏感性、特异性、线性和精密性,并进行模拟染菌食品的检测,评价模拟样品阳性检出率。结果针对4种靶标菌的UPT－LF试纸均具有良好的线性,相关系数r为0．985～0．996;检测敏感性达105～106 CFU／ml,与其他近缘菌株无交叉反应;对乳制品、饮料、小食品、水产、肉类等细菌污染的食品检出率较高。结论该研究建立的对4种常见食源性致病菌进行快速检测的UPT－LF,简便快速,具有良好的敏感性、特异性和线性定量能力,操作性能可满足食品安全检测的要求。     

蓖麻毒素单抗制备及上转发光免疫层析定量检测方法研究

目的：建立一种可快速、精确地对蓖麻毒素（ RT）进行定量检测的上转发光免疫检测技术（ UPT-LF）,即RT-UPT-LF。方法采用杂交瘤细胞技术制备蓖麻毒素单克隆抗体并对效价进行评价;采用效价最高的4种单抗分别与上转发光纳米颗粒（ UCP-NP）共价偶联,分别作为检测带,进而两两配伍,确定最优的配伍组合条件建立RT-UPT-LF方法;对RT-UPT-LF的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果与结论所建立的RT-UPT-LF方法可在15 min内完成对蓖麻毒素的检测,灵敏度可达0．5 ng／ml,定量范围为0．5～1000 ng／ml,与其他高浓度毒素无非特异反应,该法为蓖麻毒素检测提供了一种新手段。     

葛根素对火药烟雾诱导支气管上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨葛根素对火药烟雾诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)凋亡的保护作用及其机制.方法 体外培养BEAS-2B细胞,随机分为对照组(不加任何干预)、烟熏组(火药烟雾4g,作用10min)、烟熏+葛根素组(12.5、25、50、100μg/ml).细胞接种12h后加入葛根素,继续培养至24h后烟雾作用10min,继续培养2h后进行检测.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测Annexin V-PI双染细胞及caspase-3阳性率.结果 与对照组相比,烟熏组BEAS-2B细胞活力明显下降(P＜0.01),不同浓度葛根素能够不同程度地对抗烟熏的作用,其最佳保护浓度为25μg/ml.与烟熏组相比,烟熏+葛根素组Hoechst染色细胞凋亡率、Annexin V-PI双染细胞凋亡率及caspase-3阳性率均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 火药烟雾可致体外BEAS-2B细胞凋亡,而葛根素对火药烟雾诱导的BEAS-2B气管上皮细胞凋亡具有一定防护作用.     

基于双抗体夹心ELISA建立人血浆肌钙蛋白Ⅰ的定量测定技术

目的 基于双抗体夹心ELISA技术建立人血浆肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)定量检测方法,便于基层医疗机构使用.方法 基于抗原、抗体筛选,包被抗体、酶标抗体用量优化,建立双抗体夹心ELISA检测cTnI的方法.测定cTnI标准抗原,利用Curve Expert软件建立定量公式,根据临床大型仪器实测结果校准定量公式,实现ELISA测定D值到血浆中cTnI浓度的直接定量.结果与结论 双抗体夹心ELISA测量cTnI的敏感性可达0.1 ng/ml,敏感性满足临床要求.小样本临床样品的评价实验显示,双抗体夹心ELISA定量结果与临床大型仪器测得的浓度差异无统计学意义(t=0.058,P＞0.05).所建立的双抗体夹心ELISA法可用于定量检测人血浆cTnI.