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目的 探讨慢性脑低灌注大鼠海马活性调节的细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associated protein,Arc)的低表达与其认知功能障碍的相关性。方法 大鼠慢性脑低灌注模型使用持久性双颈总动脉结扎术(2-vessel occlusion,2-VO); 大鼠随机分成假手术组和2-VO组,每组各6只。术后第8周行Morris水迷宫评价其认知功能; 实时定量聚合酶链式反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法检测大鼠海马Arc mRNA及蛋白表达水平。结果(1)2-VO组大鼠第2~5 d的逃逸潜伏期比假手术组明显延长(P<0.01)及其在原平台区域游泳时间明显比假手术组短(P<0.01);(2)2-VO组大鼠海马Arc mRNA水平及免疫反应条带相对灰度值分别比假手术组明显降低(P均<0.01);(3)空间探索实验中2-VO大鼠在原平台区域游泳时间与海马Arc免疫反应条带相对灰度值呈正相关(r=0.7085,P<0.05)。结论 慢性脑低灌注大鼠的认知功能障碍可能与海马Arc的低表达相关。 相似文献
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携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒对C型尼曼-皮克病小鼠行为学的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察携带cdc2~小干扰RNA(cdc2-siRNA)的重组腺相关病毒(rAAV)小脑注射对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠行为学的影响。方法2周龄npc^-/-小鼠经小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV,动态测量小鼠体重,并进行衣架悬挂实验及足印实验评估小鼠4~8周的运动能力。结果(1)cdc2-siRNA组小鼠体重减轻明显延缓;(2)衣架悬挂实验显示cdc2-siRNA组小鼠运动缺陷明显改善;(3)足印实验显示cdc2-siRNA组相对步距[(75.1±8.6)%]与对照病毒组及非手术组相比明显增加。结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV改善了npc^-/-小鼠的行为学,有可能为NPC的治疗提供新的有效途径。 相似文献
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目的:应用经颅多普勒(transcranialDoppler,TCD)对颈性眩晕患者血流动力学进行分型,寻找各型血流动力学差异的依据。方法:2003-11/2004-07武汉大学中南医院诊断为颈性眩晕的住院患者91例,采用TCD检测其血流动力学。所有患者进行血压、眼底镜、血脂、血糖、血流变学、颈椎X射线、MRI及磁共振血管造影(magneticresonanceangiography,MRA检查。)结果:颈性眩晕血流动力学可分为4型:高流型(27%)、正流型(22%)、低流型(48%)、血流信号消失型(2%)。高流型存在的依据为较严重的颈椎生理弯曲异常、椎间失稳、寰椎椎动脉沟环、局部横突孔狭窄和椎间盘突出等;正流型示颈椎及椎基底动脉轻度异常;低流型存在的依据为椎基底动脉硬化、高脂血症、高黏血症、颈椎间隙变窄、钩椎关节增生等;血流信号消失型与椎动脉缺如或闭塞有关。结论:颈性眩晕血流动力学TCD分型,有利于理解颈性眩晕发病机制、推测病因及指导临床治疗实践,但尚应结合眼底镜检查、血黏度、血脂及影像学结果来制定更合理的治疗方案。 相似文献
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目的 使用多体素氢质子磁共振波谱(1 H-MRS)观察小脑顶核电刺激(FNS)治疗非痴呆型血管性认知障碍(VCIND)后脑代谢物的改变.方法 将51例VCIND患者随机分为观察组(25例)和对照组(26例).2组均予以常规药物治疗,且观察组给予FNS治疗.采用简易精神状态量表(MMSE)及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评定2组VCIND患者治疗前后认知功能,并使用1 H-MRS检查双侧额叶、海马、后扣带回、丘脑及角回代谢物.结果 观察组FNS治疗后MMSE及MoCA评分较治疗前和对照组提高,差异有统计学意义(P<0.05).观察组治疗后双侧额叶、海马、后扣带回、丘脑及角回的N-乙酰天冬氨酸与肌酸比值较治疗前和对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,2组均未发生不良反应事件.结论 FNS可改善VCIND患者的认知功能,可能成为治疗VCIND的一种新型、安全的非药物性方法.多体素1H-MRS可成为观察FNS治疗VCIND效果的一种有效手段. 相似文献
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目的 评估经小脑注射携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV)对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠神经元细胞骨架损伤是否具有保护作用.方法 将携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒(rAAV) 注射入 2周龄npc-/-小鼠的小脑,采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察该病毒对 npc-/-小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用.结果 (1)携带cdc2-siRNA的rAAV明显减少npc-/-小鼠轴突球状体的数量;(2)携带cdc2-siRNA的rAAV有效抑制磷酸化的神经丝(由SMI31识别)及磷酸化的Tau蛋白(由PHF-1识别)的表达. 结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损害具有保护作用. 相似文献
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背景:细胞分裂周期2(cell division cycle 2,cdc2)在神经变性疾病如阿尔茨海默病的神经元变性过程中扮演了重要角色.以腺相关病毒为载体对cdc2基因进行沉默,可能对神经变性疾病的神经元起保护作用.目的:包装携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV).设计、时间及地点:空白对照实验,于2007-10/2008-08在武汉同济医院神经科实验室完成.材料:Helper Free腺相关病毒系统(pAAV-MCS-EGFP、p-RC、p-Helper)及AAV-293细胞为Stratagene公司产品.方法:应用分子生物学方法构建生成pAAV-MCS-U6-cdc2-slRNA-EGFP表达质粒;用磷酸钙法将该质粒和p-RC、p-Helper质粒共转染AAV-293细胞,包装生成携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP).病毒感染AAV-293细胞后行Western Blot检测cdc2-siRNA对细胞内cdc2基因的沉默效果,并用斑点杂交方法测定该病毒的滴度.主要观察指标:pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP质粒中插入片段U6-cdc2-siRNA的测序;3质粒pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP、p-RC、p-Helper共转染AAV-293细胞; rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP感染AAV-293细胞后cdc2的表达.结果:①DNA测序证明U6-cdc2-siRNA已成功构建到表达质粒pAAV-MCS-EGFP中.②AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白,共转染成功.③包装得到的重组腺相关病毒(rAAV-U6-cdC2-siRNA-EGFP)感染AAV-293细胞后能显著下调AAV-293细胞cdc2基因的表达量.④rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP的滴度为1×1012v.g/mL.结论:携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装获得成功.它具有沉默cdc2基因表达的功能. 相似文献
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目的探讨S100β和髓鞘碱性蛋白(MBP)与血管性认知损害(VCI)的关系。方法①分组:将67例VCI患者分为轻度VCI组,25例;中度VCI组,23例;重度VCI组,19例;对照组为正常健康者30名。②用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组对象血清的S100β蛋白和MBP含量。③认知功能评价:运用简易智能状态量表(MMSE)及临床记忆量表(CMS)评估认知功能。结果轻、中、重度VCI组的血清S100β浓度分别为(0.42±0.08)、(0.59±0.06)及(0.64±0.06)μg/L,对照组为(0.39±0.11)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,中、重度VCI组血清S100β含量与MMSE总分及记忆商值皆呈显著性负相关(r=-0.55,r=-0.57;r=-0.63,r=-0.65,),而轻度VCI组血清S100β含量与MMSE总分及记忆商值无显著相关性。轻、中、重度VCI组的血清MBP浓度为(3.94±0.68)、(3.44±0.76)及(5.21±0.96)μg/L,对照组为(1.75±0.47)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,重度VCI组血清MBP含量与MMSE总分及记忆商值均呈显著性负相关(r=-0.67,r=-0.61),轻、中度VCI组血清MBP含量与MMSE评分和记忆商值均呈显著性负相关(r=-0.62,r=-0.58;r=-0.63,r=-0.57)。结论血清S100β和MBP浓度有可能作为观察中、重度血管性认知(包括记忆和脱髓鞘变化)损害的生化指标。 相似文献
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背景:腺相关病毒作为一种主要的基因工程载体,已被广泛应用。但腺相关病毒是缺陷性病毒,需要包装细胞提供E1蛋白。腺相关病毒293细胞作为重要的腺相关病毒特异性包装细胞,能反式产生E1,但腺相关病毒293细胞娇嫩,培养困难,生物学特性易发生改变。因此,有必要建立一种腺相关病毒293细胞的培养方案以满足基因工程的需要。目的:建立一种体外培养腺相关病毒293细胞的方法。设计:开放性实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科。材料:腺相关病毒293细胞株购于Stratagene公司。高糖型DMEM粉(Gibco公司),AAV Helper-Free系统三质粒(Stratagene公司)。方法:实验于2006-10/2007-04在武汉同济医院神经内科实验室完成。在体外将腺相关病毒293细胞复苏,用高糖型DMEM生长培养基培养,当细胞单层融合度达到50%时传代和冻存,并倒置显微镜下观察细胞的生长状态,记录生长曲线。荧光倒置显微镜下观察,根据腺相关病毒293细胞在共转染腺相关病毒系统三质粒后以及被腺相关病毒上清感染后能否激发出绿色荧光,鉴定其包装腺相关病毒的生物学特性。主要观察指标:①腺相关病毒293细胞形态学观察。②生长曲线。③腺相关病毒包装。结果:①倒置显微镜下显示,腺相关病毒293细胞贴壁生长良好,呈现不规则的多角形,胞浆透亮,胞核隐约可见。②生长曲线显示,细胞传代后第1天为生长适应期,2~5d为生长活跃期,6d后细胞进入生长平台期。③荧光倒置显微镜下观察到,腺相关病毒293细胞激发绿色荧光,共转染腺相关病毒系统三质粒成功。腺相关病毒293细胞被腺相关病毒上清感染后激发出绿色荧光,腺相关病毒包装成功。结论:本实验的培养方法简单有用,培养的腺相关病毒293细胞可保持良好的腺相关病毒包装功能。 相似文献