蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂对促进远端视神经损伤后视网膜神经节细胞轴突再生的影响

背景:近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生,但其确切的机制仍不清楚。目的:探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortman-nin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计:随机对照动物实验。单位:广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料:实验于2000-01/2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组,手术模型组;实验对照组;霍乱毒素组;霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂组;霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组,每组5只。方法:取自体坐骨神经2cm,剥去近端的神经外膜,接于视神经断端(近侧端),明胶海绵封闭窗口,坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA/NaCl;霍乱毒素组:对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素(1000pg/眼);霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂组:手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89(60μmol/L),其余同霍乱毒素组;霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μLPI3-羟基激酶抑制剂wortmannin(1μmol/L),其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药,蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射,共4次。于取材前3d,将沾有30g/L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端,逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察,记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标:各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果:手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生(2.6±0.87,2.4±0.95),霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[(43.2±1.36),q=73.294及73.655,P<0.001)。霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂H-89组平均再生数与手术模型组及实验对照组比较无明显差别[(3.2±0.16),q=1.083及1.444,P>0.05];显著低于霍乱毒素组,差异有显著性(q=72.211,P<0.001)。霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数(9.6±1.85)均高于手术模型组及实验对照组(q=12.637及12.998,P<0.05);明显低于霍乱毒素组(q=60.657,P<0.001)。结论:蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。     

蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂对促进远端视神经损伤后视网膜神经节细胞轴突再生的影响

背景：近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生，但其确切的机制仍不清楚。目的：探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计；随机对照动物实验。单位：广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料：实验于2000-01／2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组，手术模型组；实验对照组；霍乱毒素组；霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂组；霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组，每组5只。方法：取自体坐骨神经2cm，剥去近端的神经外膜，接于视神经断端（近侧端），明胶海绵封闭窗口，坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA／NaCl；霍乱毒素组：对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素（1000pg／眼）；霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂组：手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89（60μmol／L），其余同霍乱毒素组；霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μL PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin（1μmol／L），其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药，蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射，共4次。于取材前3d，将沾有30g／L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端，逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察，记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标：各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果：手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生（2．6&;#177;0．87，2．4&;#177;0．95），霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[（432&;#177;1．36），q=73．294及73．655，P〈0．001）。霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂H-89组平均再生数与手术模型组及实验对照组比较无明显差别[（3．2&;#177;0．16），q=1．083及1．444，P〉0．05]；显著低于霍乱毒素组，差异有显著性（q=72．211，P〈0．001）。霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数（9．6&;#177;1．85）均高于手术模型组及实验对照组（q=12．637及12．998。P〈0．05）；明显低于霍乱毒素组（q=60．657，P〈0．001）。结论：蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。     

ALC1/CHD1L与OV6在肝癌细胞中的共存及其对干性相关转录因子表达的影响

目的探讨ALC1/CHD1L与OV6阳性肝癌细胞的关系及其对干性相关转录因子表达的影响。方法细胞免疫荧光标记方法观察肝癌Huh7及Hep G2细胞中ALC1/CHD1L和OV6的表达及定位;q RT-PCR检测ALC1/CHD1L sh RNA干扰后对肝癌Huh7及Hep G2细胞干性相关分子Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin表达的影响。结果细胞免疫荧光标记结果显示肝癌Huh7细胞和Hep G2细胞中均有ALC1/CHD1L与OV6的表达,两者共表达率为34.3%及48.34%;ALC1/CHD1L sh RNA干扰及q RT-PCR实验结果显示敲减Huh7及Hep G2细胞ALC1/CHD1L表达可引起Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin等干性相关分子表达下降,与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论肝癌Huh7及Hep G2 OV6阳性细胞中有ALC1/CHD1L表达;敲减ALC1/CHD1L表达可引起Huh7及Hep G2细胞干性相关分子Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin表达明显下调。     

不同性别肝大部切除小鼠的肝再生

背景:各种病因所致的肝硬化及肝癌发病率存在明显的性别差异.肝受损或手术后肝脏均可通过其自身强大的再生能力进行代偿,但肝再生过程中不同性别肝细胞的再生状况是否存在差异尚不清楚.目的:比较肝大部切除后不同性别小鼠肝脏再生能力是否存在差别.方法:采用不同性别成年昆明小鼠行肝脏大部切除,称量手术切除的肝组织,并于术后1,3,5,7,10,14 d取再生肝组织,称量后常规制作组织切片备用,取材前2 h腹膜下注射5一溴脱氧尿核苷50 mg/kg.观察比较不同性别小鼠再生肝组织的结构变化、细胞形态,以及术后各时间点肝再生率、肝组织5一溴脱氧尿核苷的标记指数.结果与结论:苏木精一伊红染色切片镜下结果显示,肝脏大部切除后各时间点不同性别小鼠肝组织结构无明显差别.不同性别小鼠肝大部切除后各时间点肝再生率及5一溴脱氧尿核苷标记指数差异均无显著性意义(P>0.05).提示肝大部切除后不同性别小鼠肝的再生能力无明显差别.     

Bcl-2在视网膜内的表达及意义

原癌基因Ｂｃｌ－２的表达产物Ｂｃｌ－２蛋白与细胞凋亡密切相关,其分布广泛。近年来研究证明发育及成年时期中枢神经系统Ｂｃｌ－２表达及分布不同。正常视网膜内Ｂｃｌ－２仅见于Ｍüｌｌｅｒ细胞突起内,当视网膜受损后Ｂｃｌ－２的表达增强,但不同类型的损伤诱导不同的细胞表达Ｂｃｌ－２。切断视神经后表达Ｂｃｌ－２的细胞为Ｍüｌｌｅｒ细胞,而视网膜缺血诱导节细胞、移位与无长突细胞表达Ｂｃｌ-２。正常及病理状态下视网膜内Ｂｃｌ－２的表达情况提示Ｂｃｌ－２不仅与视网膜神经元的分化发育、正常功能及自动平衡的维持有关,而且与视网膜神经元突起的生长及延缓受损细胞的死亡有关。     

四氯化碳致小鼠急性肝损伤的性别差异及其与雄激素受体表达的关系

目的比较CCl4对不同性别小鼠急性肝损伤的诱导作用及其对肝脏雄激素受体(AR)表达的影响。方法健康成年昆明小鼠70只,随机分为CCl4雄性组、CCl4雌性组、雄性对照组,雌性对照组。50%CCl4-粟米油溶液皮下注射,0.6ml/100g体重,1周2次,诱导小鼠急性肝损伤。造模第7天处死各组动物取材固定,常规HE染色比较不同组别小鼠肝组织病理变化;免疫组织化学法检测各组小鼠肝脏AR的表达,根据阳性细胞反应强度及百分比设定0级(阴性)及1-3级(阳性)标准,双盲计分法统计各组AR表达分值。结果实验组CCl4造模过程中雄性组小鼠死亡率为60%(15/25),明显高于雌性组(12%,3/25),对照组小鼠无死亡(0/10,0/10)。肝组织HE染色结果可见CCl4诱导的急性肝损伤主要部位为肝小叶周围的门管区及界板区,损伤部位肝细胞出现脂肪变,少数肝组织出现点状坏死。免疫组化显示雄性及雌性对照组小鼠肝细胞AR呈弱阳性表达,不同性别小鼠肝细胞AR表达差别无统计学意义;实验组各组别肝小叶周围受损肝细胞出现较强的AR表达,其中CCl4雄性组AR表达分值明显高于CCl4雌性组小鼠(P<0.01)。结论雄性小鼠对急性肝损伤的耐受性低于雌性小鼠,其中AR的高表达与CCl4诱导的急性肝损伤性别差异密切相关。     

基于雨课堂的混合式教学在生理学教学中的应用

为在课前高效督促学生预习,课中实施互动教学,课后精确分析教学效果,在生理学教学中,运用雨课堂构建了“课前-课堂-课后”高效、精准、互动、混合式教学和智慧课堂。问卷调查结果表明大部分学生喜欢或非常喜欢雨课堂支持的教学形式;有效促进了学生的平时学习,师生互动,精准掌握了学情,科学精准教学,提高了教学效率,改善了教学效果。     

大鼠视网膜缺血后Parvalbumin免疫反应神经元的变化

本文观察了大鼠视网膜缺血后Parvalbumin（PV）免疫反应神经元的变化。动物分为缺血10min组、15min组、30min组及60min组等4组．动物右眼为缺血眼，左眼做自身对照眼．结果表明PV免疫反应神经元主要位于内核层及节细胞层，其突起伸向内网层第1、5亚层，神经纤维层也可见PV免疫反应纤维。缺血10min后PV免疫反应神经元未出现变化，缺血15min后数量开始减少，内网层第5亚层PV免疫反应纤维消失、缺血30min、60min后PV免疫反应神经元比缺血15min后减少明显．表明缺血15min后即出现PV免疫反应神经元的变化，但各缺血时间点上其减少率低于其它类型的神经元，提示它对缺血有一定的耐受性。     

重视与加强专科学生的素质教育

在社会飞速发展的今天需要大批不同类型、不同层次的专业技术人员，医学专科生就是其中一支不可忽视的力量。医学专科教育的目的是要培养掌握一定医学科学知识和技能、面向基层的普及型医师和面向各级医技科室从事实际技术工作的医师、药师或技师等应用型专门人才，最主要是为县以下农村基层医疗卫生部门输送普及型、应用型的高级医学专门人才。当前新的医学模式把健康和疾病放在一个更加广阔的社会背景下来考虑，把立足点建立在人体的健康取决于生理。心理和社会的完整观念上，要求末来的医务工作者不仅要懂得生理疾病的治疗，还要懂得心理…     

NADPH黄递酶阳性神经元在出生后大鼠视网膜内的发育

本实验用NADPH黄递酶（NDP）组化方法观察了不同年龄的SD大鼠视网膜内NDP阳性神经元的发育情况。研究结果显示NDP神经元最早出现于P5（出生后第5天），数量较少，着色浅，随着年龄增长，NDP神经元数量明显增加，胞体位于内核层，突起伸向内网层，至P13～P15时，NDP神经元数量及突起分枝均达峰值，P23时NDP神经元密度下降，以周边视网膜较为明显，神经元突起分枝减少，突起主干可见串珠样膨大。视网膜内NDP神经元的密度及突起分枝的变化，提示NDP可能在视网膜内网层的突触形成过程中有一定作用。