大鼠胰岛B细胞长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达及其相关性研究

目的探讨大鼠胰岛B细胞在衰老进程中长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达的相关性。方法2005年10月至2006年10月,在汕头大学医学院第二附属医院将11只18月龄健康雄性SD大鼠随机分为热量限制(CR)组6只和正常喂养对照组5只,饲养6个月后取胰尾组织,应用免疫组化染色分别检测胰岛中SIRT1、FOXO1和胰岛素表达及分布,衰老相关β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色以反映胰岛B细胞衰老情况。结果SIRT1与FOXO1均可表达于胰岛细胞胞浆、胞核中;β-Gal和胰岛素表达于细胞浆中;与对照组大鼠相比,CR组大鼠胰岛SIRT1表达量较多(P<0.05),衰老相关β-Gal染色强度较弱(P<0.01),胰岛素表达量较低(P<0.05),但FOXO1表达量差异无显著性意义(P>0.05),伴随着SIRT1表达增加,FOXO1胞核阳性率明显降低(P<0.01)。结论热量限制诱导了大鼠胰岛B细胞SIRT1蛋白高表达;SIRT1可能通过抑制FOXO1活性而调控胰岛B细胞的衰老,有利于2型糖尿病的防治。     

限制饮食对老年早期大鼠生存状态和旷场行为的影响

目的 研究热量限制对老年早期大鼠的生存状态和行为学的影响.方法 选用18月龄的健康雄性SD大鼠,根据进食情况分为2组,一组为CR组(n=29)给予对照组进食量60%的食量饲养,对照组为ad libitum(AL)组(n=31)自由进食,观察6个月,在此期间,记录大鼠的生存状况,每周测定大鼠体质量;6个月后,进行旷场实验观察自发活动能力.结果 CR组给予60%的饮食控制后,体质量维持在低于对照组约20%左右(P<0.01).CR组的生存率为89.66%显著高于AL组67.74%(P=0.039);在旷场实验中测定的CR组大鼠自发活动路程为(201.06±78.35)m,显著长于AL组[(147.38±36.89)m,P=0.021],而CR组的自发活动速度为(78.10±34.38)mm/s也显著高于AL组[(48.96±14.87)mm/s,P=0.021],并且CR组大鼠具有在中央区域的活动距离长(P=0.048)和在周边区域活动速度快(P=0.012)的特点.结论 对老年早期的大鼠给予6个月的热量限制可以提高大鼠的生存率以及旷场活动能力,反映了大鼠的健康状况改善.     

白藜芦醇对PC12生长周期停滞的研究

目的 研究白藜芦醇对PC12的细胞周期停滞调节的作用.方法 应用5μmol/L,10μnol/L,20μmol/L和50μmol/L不同浓度的白藜芦醇作用于PC12,用MTT和流式细胞术观察PC12细胞周期的变化.结果 随着白藜芦醇浓度增加细胞存活率降低,流式细胞术检测发现10μmol/LRSV使细胞G0/G1期明显延长(P=0.023).而50μmol/LRSV细胞凋亡增加(P＜0.005).结论 低浓度的RS、,能够诱导PC12细胞周期停滞而高浓度的RSV诱导细胞凋亡.     

D-半乳糖致亚急性衰老大鼠的海马衰老信号的改变

目的:研究D-半乳糖(D-Galactose,D-gal)对大鼠海马细胞衰老相关信号的影响。方法:取6月龄雄性SD大鼠30只,平均分成两组,每组15只,D-gal组利用进行D-gal连续腹腔注射(120mg/kg.day),对照组注射同体积的PBS共10周。利用Western blot和免疫组织化学观察SirT1和FoxO3a的表达变化。结果:Western blot和免疫组化结果显示,SirT1在D-gal组表达明显降低(分别为p=0.02,p=0.018);FoxO3a的免疫组化检测发现,D-gal组的海马锥体细胞FoxO3a在胞核的分布明显高于对照组(p=0.002);而相对胞浆的分布却显著降低(p=0.005)。结论:短期给予D-gal能够导致大鼠海马衰老信号的改变。     

大鼠Sirt1基因原核表达质粒的构建及融合蛋白表达

目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。     

白藜芦醇对PC12细胞衰老相关信号的调节作用研究

目的:利用白藜芦醇(Resteratrol,RSV)模拟热量限制研究对PC12细胞衰老相关信号的影响。方法:分别利用5μmol,10μmol,20μmol和50μmol的RSV观察对PC12形态学的影响,利用RT-PCR法观察SirT1,FoxO3a和p27KIP1的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SirT1在RSV10μmol/L组明显升高(p=0.02),p27KIP1在20μmol/L和50μmol/L RSV组明显升高(p<0.001),FoxO3a差别无显著统计学意义(p=0.09)。结论:一定浓度的白藜芦醇能够抑制PC12生长,可能与衰老相关信号的改变有关。     

低硒饮食对发育期大鼠脑氧化代谢及CREB表达的影响

目的:探讨低硒饮食对发育期大鼠大脑皮层和海马的脂质过氧化物和转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法:生化分析方法测定低硒喂养的第三代21日龄大鼠不同脑区丙二醛(MalondialdehydeMDA)含量的变化,用免疫组织化学和Westernblot免疫印迹的方法测定CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的含量。结果:低硒饮食组较对照组大鼠大脑皮层和海马MDA含量增加,CREB和p-CREB含量下降。结论:低硒膳食能够引起发育期大鼠大脑皮层和海马的氧化代谢产物堆积。CREB表达减少,提示低硒能够引起大脑皮层和海马神经元功能下降,低硒可能是导致学习记忆能力降低的潜在因素之一。     

实验性缺氧缺血性脑病的~1H-MRS及病理学研究

目的:探讨早期新生猪缺氧缺血性脑病(HIE)的1H-MRS波峰变化规律及其与病理学改变的关系。方法:选取40只7日龄健康新生猪,随机分为:正常对照组(n=5只)、假手术组(n=5只)及缺氧缺血组(n=30只)。1.5T磁共振1H MRS测定脑内代谢产物。观察每组新生猪脑组织的病理变化情况。结果:①造模后0~24h,NAA峰明显下降,Lac峰呈典型的双峰状显著升高,NAA/Cho、Lac/NAA、Lac/Cr、Lac/Cho和Lac/(Cr Cho)比值逐渐降低,HI后3h,NAA/Cr、NAA/(Cr Cho)比值升高,然后逐渐降低,Glx峰和mI峰无明显变化。②造模后0~24h随着时间延长脑水肿逐渐加重,24h出现坏死灶。结论:①NAA/Cho、Lac/NAA、Lac/Cr、Lac/Cho和Lac/(Cr Cho)是定量反映脑缺氧缺血生化改变的最敏感指标;②早期缺氧缺血后脑NAA、Lac与病理学的变化一致。     

硒-谷胱甘肽过氧化物酶在脑抗氧化损伤中的研究进展

硒是人体必需的微量元素之一,硒半胱氨酸是谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心,脑内的谷胱甘肽过氧化物酶通过多种途径,不同机制清除脑内的氧代谢产物,谷胱甘肽过氧化物酶减少和活性降低可能与脑智力发育障碍、大脑缺血缺氧损伤、神经变性疾病及重金属中毒的发生有关,因此提高脑内谷胱甘肽过氧化物酶的浓度可能能够防止脑细胞受到氧化损伤,保护大脑功能。     

晒-谷胱甘肽过氧化物酶在脑抗氧化损伤中的研究进展

硒是人体必需的微量元素之一，硒半胱氨酸是谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心，脑内的谷胱甘肽过氧化物酶通过多种途径，不同机制清除脑内的氧代谢产物，谷胱甘肽过氧化物酶减少和活性降低可能与脑智力发育障碍、大脑缺血缺氧损伤、神经变性疾病及重金属中毒的发生有关，因此提高脑内谷胱甘肽过氧化物酶的浓度可能能够防止脑细胞受到氧化损伤，保护大脑功能。