一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立

目的用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV－1药物筛选方法,并判断这种方法在筛选抗HIV－1药物中的应用前景。方法把JLTRG细胞和H9／HTLV－ⅢB细胞按照不同比例共培养24,48,72和96h。在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度,同时用流式细胞仪测定绿色荧光的表达,并确定培养体系中最佳细胞比例和培养时间。通过选出的最佳条件结合药物半衰期检测恩夫韦肽（T20）和依非韦伦（EFV）的有效性及药物半数抑制量（IC50）。采用HIV－1P24抗原荧光定量PCR法检测病毒载量,并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之间的相关性。结果实验结果显示,JLTRG细胞与H9／HTLV—ⅢB细胞按照10：1的细胞数量比例共培养72h为最佳培养比例和时间。以T20和EFV对共培养体系进行验证,结果显示随着T20和EFV浓度的改变,共培养体系中JLTRG细胞感染HIV－1的程度不同,其IC50分别为10nmol／L和5nmol／L。T20和EFV药物浓度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关（r=－1,－0．986和－1,－l,P〈0．01）;平均荧光强度与病毒载量呈正相关（r=0．986和l,P〈0．01）。结论本研究建立的新型抗HIV一1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点,可为抗HIV－1药物的筛选提供新的选择。     

白蛋白吸附再循环系统联合特异性胆红素吸附治疗重型肝炎

目的 观察白蛋白吸附再循环系统(PARS)联合血浆特异性胆红素吸附治疗重型肝炎的临床疗效及安全性,并将其与分子吸附再循环系统(MARS)进行比较.方法 28例重型肝炎患者在内科综合治疗基础上行人工肝治疗,13例作为治疗组,行PARS联合血浆灌流特异性胆红素吸附治疗,15例行MARS治疗;根据病情,每例患者治疗1～4次.各组患者分别于治疗前、后取血样,检测肝功能、血凝常规、肾功能和内毒素等,同时观察临床表现、分析疗效及安全性.结果 治疗组与MARS两组人工肝治疗,总有效率为分别为69.3%、66.7%,治疗前后胆红素下降比率分别为35.4%、 32.3%;两组之间差异均无统计学意义(P＞0.05),但治疗组总体费用较MARS明显降低;两组治疗前后临床症状与体征改善,血流动力学稳定,不良反应少;其中治疗组治疗前后血红细胞、血红蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、血小板等安全性指标均无明显变化(P＞0.05).结论 白蛋白吸附再循环系统联合特异性胆红素吸附治疗重型肝炎安全性高,疗效与MARS相似,治疗费用较MARS明显降低,值得进一步推广.     

慢性肝功能衰竭时MSCs胞膜CXCR4的表达及其影响因素的研究

背景 骨髓间充质干细胞(MSCs)在细胞疗法治疗多种损伤性疾病方面具有广阔的应用前景,SDF-1与其受体CXCR4结合后形成的SDF-1/CXCR4轴是促进MSCs向损伤组织的归巢的重要生物学轴。研究发现,正常情况下只有少量MSCs胞膜表达CXCR4,严重肝脏损伤环境是否会通过提高MSCs的CXCR4表达而促进MSCs向肝脏归巢,参与肝脏再生目前未见报道 目的 探讨慢性肝功能衰竭患者体液环境对人骨髓间充质干细胞（MSCs）胞膜CXCR4表达的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-01/2008-10在苏州大学附属第一医院感染病科完成。 材料：骨髓及正常人血浆标本来自健康志愿者,患者血浆取自我科一例慢性肝功能衰竭（CLF）住院病人常规检查后剩余标本,患者对实验知情同意。 方法 分离培养MSCs,分别用慢性肝功能衰竭患者血浆、LPS、IL-6和TNF-干预MSCs,正常人血浆和培养基作为对照,流式细胞技术检测各组MSCs胞膜CXCR4的表达。 结果 慢性肝功能衰竭患者血浆、LPS及IL-6干预组MSCs胞膜CXCR4表达分别为28.03±0.45%、14.17±0.47%和17.07±0.40%,正常培养MSCs胞膜CXCR4表达为9.20±0.46%,前三组与对照组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;TNF-干预组和正常人血浆处理组MSCs胞膜CXCR4表达分别为9.17±0.31%和8.77±0.45%,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 结果 慢性肝功能衰竭患者血浆、LPS及IL-6干预组MSCs胞膜CXCR4表达分别为28.03±0.45%、14.17±0.47%和17.07±0.40%,正常培养MSCs胞膜CXCR4表达为9.20±0.46%,前三组与对照组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;TNF-干预组和正常人血浆处理组MSCs胞膜CXCR4表达分别为9.17±0.31%和8.77±0.45%,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 慢性肝功能衰竭时,机体内MSCs胞膜CXCR4的表达明显增高,LPS及IL-6可能是其中的重要影响因素。     

乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测

目的 为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法 采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果 采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×10~(10),活性超过95％。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。结论 采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。     

肝脏干细胞--肝病的细胞治疗

干细胞分为全能干细胞与定向干细胞。肝组织中有肝脏定向干细胞存在,骨髓来源的干细胞亦参与了肝组织的重建。肝脏定向于细胞既有较强的增殖能力,分化方向又较单一,且移植后不易形成肿瘤,有望在不久的将来用于肝病的细胞治疗。     

发热待查114例分析

目的探讨发热待查病例的临床特点。方法回顾性分析114例发热待查住院病例的临床资料。结果 114例发热待查患者中,最终明确诊断101例,确诊率为88.6%。病因包括：感染56例（49.1%）,其中肺部细菌感染占30.4%（17/56）,结核病占14.3%（8/56）;结缔组织疾病25例（21.9%）,其中成人Still病占44.0%（11/25）,系统性红斑狼疮（SLE）占24.0%（6/25）;肿瘤12例（10.5%）,其中淋巴瘤占58.3%（7/12）;其他8例（7.1%）,其中药物热占50.0%（4/8）,坏死性淋巴结炎占25.0%（2/8）;原因仍未明确13例（11.4%）。结论大部分发热待查患者经仔细的临床检查和分析可明确诊断,发热待查病因以感染、结缔组织疾病及肿瘤为主,疾病类型与热程等有关。     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其表面标记检测

本文拟建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究。给SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-AAF)，剂量分别为5、10、15、20mg／kg，连续给药6d，第7天行三分之二肝切除术，术后继续给药1周，并于术后每隔3d取肝组织行常规组织学观察、细胞增殖试验及免疫组化染色。经免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞，再经免疫细胞化学及RT-PCR对其进行鉴定。结果显示，10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，卵圆细胞表达特异性抗原OV6、肝细胞标记白蛋白、胆管细胞标记CK19、甲胎蛋白以及连接蛋白43，同时还表达造血干细胞标记C-kit。实验表明，2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得较理想的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞，前体细胞。     

乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测

目的为构建生物人工肝进行肝细胞的准备.方法采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测.结果采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×1010,活性超过95%.在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右.而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24 h后即丧失.球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高.结论采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求.聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝.     

重组人生长激素治疗肝硬化低蛋白血症疗效分析

我们从 1 999年 1 0月起试用重组人生长激素治疗肝硬化低蛋白血症患者 3 0例 ,效果良好 ,现报告如下。对象与方法一、对象血清白蛋白含量低于 3 5 ｇ/Ｌ的肝硬化患者 5 0例 ,随机分成治疗组 (ＧＨ组 ) 3 0例和对照组 2 0例。其中治疗组男 2 2例 ,女 8例 ,年龄 2 5～ 64岁 ,平均(4 8 1± 1 0 1 )岁 ;对照组男 1 5例 ,女 5例 ,年龄 2 5～ 65岁 ,平均 (4 8 0± 1 0 2 )岁。两组患者在性别、年龄、Ｃｈｉｌｄ分级和血清白蛋白水平分布上均无显著性差异。二、方法ＧＨ治疗组患者给予重组人生长激素 (由安科生物工程股份有限公司提供 ) 4Ｕ皮下…