四种基因多态性联合分析与脑梗死的关系研究

对肾素-血管紧张素转换酶基因（ACE）插入／缺失、载脂蛋白E基因（ApoE）、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C／T和纤维蛋白原β基因（Fgp）148C／T的多态性与吸烟等因素与脑梗死的关系进行联合分析。     

血友病甲患儿及其家系凝血因子Ⅷ基因内含子重复序列多态性研究

目的 探索一种更简便,更特异的方法,用于血友病甲的基因诊断及其家系的遗传咨询。方法 应用聚合酶链反应（PCR）和双链异源泳动分析（HMA）对我国10个血友病甲患儿及其家系成员中FⅧ基因内13内含子二核苷酸重复序列（CA）n多态性和等位基因进行分析。结果 10个家系中,男性20例,女性10例,共40条X染色体,经PCR扩增、琼脂糖溻泳均可显示出140-150bpDNA条带,男性呈现单一的DNA条带,女性则根据等位基因的不同,出现两条DNA条带（杂合子）或者一条DNA条带（纯合了）。结论 二核苷酸重复序列广泛分布于中国人群FⅧ基因中,重复序列的多态性作为第二代遗传标志,结合等位基因分析和HMA杂交电泳泳动分析,可明确鉴别出血友病甲基因的携带者,可用于血友病甲的基因诊断和遗传咨询。     

血小板膜糖蛋白I bα基因多态性与脑梗死关系的研究

目的:探讨血小板膜糖蛋白I bα基因HPA2多态性与脑梗死之间的关系。方法:选取按年龄、性别、有无高血压及糖尿病病史相匹配的病例组及对照组各100例,PCR扩增GPI bα基因长为588bp的片段,产物经限制性内切酶Hinl I消化后确定其基因型。结果:在总病例组、大动脉粥样硬化型脑梗死组及小动脉闭塞型脑梗死组(TOAST分型)与相应对照组之间GP I bαHPA2基因型频率的分布差异无显著性;大动脉粥样硬化型中杂合突变型比例(16.1%) 要高于小动脉闭塞型中杂合突变型比例(10.1%),但差异无显著意义。结论:GP I bαHPA2基因杂合突变型可能并非脑梗死的危险因素。     

腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头瘤病毒18型E6E7基因构建及其转化作用的鉴定

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）的E6E7基因在细胞恶性转化中所起的作用。方法：将人乳头瘤病毒（HPV）的E6E7基因克隆至腺病毒伴随病毒表达载体中，通过包装的重组病毒感染，将E6E7基因导入并整合到永生293细胞的基因组中。结果：本研究成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒并感染了永生293细胞，PCR／Southern杂交分析表明E6E7基因在转化细胞293TL中确有表达，转化细胞293TC和293TL具有明显的转化表型，和亲本293细胞相比，生长速度快，接触抑制消失，集落形成率提高20倍，且集落明显增大，形成时间短。结论：成功地构建了HPV18 E6E7 AAV病毒，HPV18 E6E7基因引起永生化人上皮细胞293的恶性转化。此病毒可用于感染正常上皮细胞，研究其致癌机制。     

人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮恶性转化的研究

提要研究病毒和促癌物在食管癌形成的作用，用人胚食管上度培养和HPV18E6E7AAV感染。培养细胞分二组，SHEEC1组培养基中加入TPA(5ng/mL)4周。对照组SHEE未加TPA。细胞转化的形态，细胞周期,软琼脂培养和裸鼠致瘤性等指标皆证明SHEEC1已恶性转化。E6E7基因在FISH和PCR检测，两组细胞核皆呈阳性。结论：人胚食管上皮可用HPV18E6E7和TPA在体外协同诱导细胞恶性转化。人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮恶性转化的研究@沈忠英$汕头大学医学院肿瘤病理研究室@蔡维佳$汕头大学医学院肿瘤病理研究室@沈健$汕头大…     

人类免疫缺陷病毒I型包膜糖蛋白gp41的基因重组表达

目的 基因重组表达（ＨＩＶ－１ ｇｐ４１）抗原,并研制一种快速,简便,灵敏性高,特异性强的国产ＨＩＶ－１免疫检测试剂。方法 选用ＨＩＶ－１型ＢＨ１０毒株的包膜糖蛋白ｇｐ４１的部分基因（６９７７－７４９７）,重组在ＰＢＶ２２１表达载体上。表达产物通过１５％ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离纯化,根据ＲＦ值,切下含特异蛋白的胶带,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法转移在硝酸纤维素膜上;     

人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表达

目的为获得足够量的膜糖蛋白,以便于对不同ＨＩＶ分离株膜糖蛋白的结构与功能进行进一步的研究。方法从人免疫缺陷病毒１（ＨＩＶ－１）ＨＸＢ２分离株原病毒基因组的重组质粒ｐＨＸＢ２中克隆了两段膜糖蛋白基因（ＥＮＶ）片段。以酵母穿梭诱导表达质粒ｐＹＥＳ２为载体,构建了两个相应的重组表达质粒ｐＹＥＮＶ１和ｐＹＥＮＶ２;进一步利用大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因（β－ｌａｃＺ）构建了ＨＩＶ－１膜外糖蛋白ＤＮＡ片段与β－ｌａｃＺ基因的融合表达质粒。将此３种质粒分别转化单细胞真核生物酿酒酵母ＢＪ１９９１,得到的转化子经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果克隆的基因片段在酿酒酵母中产生了分子质量为５０×１０３的特异性诱导蛋白;对含此融合表达质粒的酵母转化子半乳糖诱导后表达产物的免疫检测表明,与对照菌株相比,融合表达产物具有和ＨＩＶ－１阳性血清抗体反应的抗原性。结论可通过β－半乳糖苷酶活性的测定直接指示抗原片段的表达;为表达的膜糖蛋白片段的进一步分离纯化打下了一定基础     

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展

随着分子生物学领域的飞速发展,重组病毒载体成为当今病毒基因工程研究的热点之一,现有的病毒疫苗载体也存在各自的优缺点,安全有效性都有待进一步证实,应用较广泛的腺病毒虽然有表达水平高、容量大等优点,但是其在成人中感染率极高,现有的宿主免疫会局限载体的复制并降低其免疫原性.     

多瘤病毒基因载量与出血性膀胱炎发生相关性的研究

目的研究多瘤病毒的基因载量与异基因造血干细胞移植出血性膀胱炎发生的关系。预防移植后出血性膀胱炎的发生。方法收集40例健康人和40例异基因造血干细胞移植及20例合并出血性膀胱炎患者的血液和尿液，合成多瘤病毒BKV、JCV和SV40基因引物，应用传统的PCR和EvaGreen染料荧光定量PCR法，分别检测血液和尿液多瘤病毒BKV、JCV和SV40DNA。结果40例健康人和40例异基因造血干细胞移植患者血液中BKV、JCV和SV40基因均为阴性；尿液中正常健康人BKV基因的检出率为15％（6／40），JCV基因的检出率为10％（4／40）。异基因造血干细胞移植患者BKV检出率为100％（40／40），JCV基因的检出率为12％（5／40），SV40基因均为阴性。20例出血性膀胱炎患者尿液中BKV基因载量均高于正常人和无出血性膀胱炎的异基因造血干细胞移植患者。结论正常健康人的泌尿系潜伏存在病毒BKV和JCV基因，异基因造血干细胞移植患者出血性膀胱炎的发生与BKV多瘤病毒DNA的载量有关。     

Malignant Transformation of Human Embryonic Liver Cells Induced by Hepatitis B Virus and Aflatoxin B_1

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a worldwide distribut ed disease accounting for 473 000 newly developed cases ofHCC annually in the world and 235 000 cases in China[1]. Epidemiological and laboratory investigations havedemonstrated that hepatitis…