表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗的免疫学特性

目的测定表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法50只BALB/c小鼠随机分为5组(每组10只),将表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF分别免疫小鼠3次,每次间隔2周,同时设卡介苗(BCG)免疫组、空载体质粒免疫组和生理盐水对照组。最后一次免疫结束后,每组取5只小鼠血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测特异性抗体的滴度,并分离小鼠的脾淋巴细胞,并在体外用结核分枝杆菌(MTB)培养滤液蛋白(cu lture filtrate prote in,CFP)刺激,测定脾淋巴细胞增殖指数和γ干扰素(IFN-γ)水平。用1 m l含1×105克隆形成单位(CFU)的MTB毒株H37Rv经尾静脉感染其余每组5只BALB/c小鼠,4周后计数脾脏细菌负荷数。结果质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫小鼠血清的特异性抗体滴度分别为1∶1 000和1∶1 500。其脾淋巴细胞刺激指数分别为2.2和2.4,而生理盐水对照组和空载体质粒免疫组的刺激指数只有0.9和1.1;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFN-γ分别为(5.48±0.38)ng/m l和(5.76±0.51)ng/m l,显著高于生理盐水对照组和空载体质粒免疫组(P<0.05),但与BCG免疫组的(5.55±0.31)ng/m l比较差异无统计学意义。结核毒株攻击后,与空载体质粒免疫组相比,质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫的BALB/c小鼠其抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,3组脾脏细菌负荷对数值(lg,CFU/g)分别为6.08±0.25、4.63±0.11、4.50±0.32,但不及BCG免疫组的4.09±0.27。结论表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗在小鼠体内诱导的IFN-γ水平与BCG相当,其保护力有待进一步提高。     

乙型肝炎病毒S基因经显微注射导入SMMC-7721细胞核内的表达

目的探讨细胞核显微注射导入外源基因的方法,观察HBV-S基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721后的表达及其稳定性.方法将含有HBV-S片段的质粒pCR3.1-S线性化,通过显微注射仪直接注入培养的SMMC-7721细胞核内,G418筛选后,经EIA和免疫荧光法分别检测细胞培养上清和细胞内HBsAg的表达.结果每注射100～150个细胞可筛选出一个阳性克隆,3个阳性克隆经扩大培养后,其中1个克隆的培养上清经EIA法检测HBsAg阳性,免疫荧光显示细胞膜及细胞质均有HBsAg表达,并持续6 mo以上.结论HBV-S基因经显微注射导入SMMC-7721细胞后获得持续稳定的表达.     

高脂膳食对小鼠生化及病理形态的影响

目的高脂膳食对机体血液、组织匀浆中各种生化指标的影响,尤其是对胆固醇等脂质代谢的影响,为研究高胆固醇引起的心血管等疾病建立模型。方法将C57BL/6 j小鼠63只随机分为2组。普食组(用普通饲料饲喂)12只,雌雄各6只,高脂组(用高脂饲料饲喂)51只,雌26只、雄25只。单笼饲喂,饲喂期为67 d。观察动物体重、摄食量、比较血液以及肝、肾组织匀浆中有关脂类代谢和抗氧化方面的生化指标以及组织病理学观察。结果高脂组血液中胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)均显著高于普食组(P0.05);高脂组肝、肾脏组织匀浆中T-AOC、CuZn-SOD、SOD、AKP、NOS、MDA的水平与普食组相比均无统计学差异;与普食组相比,雄性小鼠摄食量差异显著(P0.05)、体重差异不显著;病理观察可见高脂组中肝细胞空泡变性。结论通过高脂膳食成功的建立了高胆固醇血症模型,该模型有可能在胆固醇浓度升高引起的脂质代谢异常、动脉粥样硬化、冠心病和其他代谢性疾病的研究中发挥作用。     

美国实验动物医学发展简史——对中国实验动物医学发展的思考

美国实验动物医学的发展起始于上世纪50年代,目前可能代表着世界上该领域的最高水平.本文对其发展史作了简的地回顾,包括生物医学领域对实验动物兽医的需求,实验动物科学领域早期的兽医实践,实验动物医学会的诞生,实验动物医学领域的培训、教育和考核等的沿革,以及相关法律法规对实验动物医学发展的影响等.笔者依据自身的工作实践和中国国情对中国实验动物医学领域的发展进行了一些思考,期盼实验动物相关法律法规能更加完善、在兽医教育中适度增加实验动物医学相关内容、加强实验动物医学领军人才的培养、加强实验动物医学界多渠道的交流、增加相关领域科研投入和支持等.中国要站在西方发达国家的肩膀上,借鉴其成功的经验,发展有中国特色的实验动物医学事业.     

我国实验动物福利发展战略与十二五生命科技发展需求及对策的探讨

实验动物福利越来越受到社会各方面的重视.欧美等发达国家已经建立起了一套比较完善的实验动物福利法规体系,而我国还没有专门的实验动物福利立法,与国外发达国家相比存在较大差距,但是不断出现的与实验动物福利有关的经贸技术壁垒以及十二五发展的需要使得实验动物福利成为我国目前亟待解决的战略问题.     

高尿酸血症与卒中的研究进展

卒中是发展中国家致残的常见病因,也是第三大死因。传统的卒中危险因素,如高血压、高血脂、糖尿病、心房颤动等在基础医学与临床治疗领域已得到深入研究并达成共识。然而,中国每年仍有150万～200万新发卒中病例。2011年美国心脏协会（AHA）报告显示,美国每年有61万新发与18．5万复发卒中病例。在普通人群中,     

注核方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响

目的 :探讨胞质内直接注核法和电融合法对大鼠 -小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响。方法 :采用血清饥饿法同步化处理的 SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞 ,常规超排 KM小鼠获得卵母细胞 ,采用盲吸法去核 ,分别采用直接注核法和电融合法构建重组胚胎 ,6- DMAP+ CCB+乙醇激活重组胚 ,CZB培养液中培养。结果 :电场强度 ( V/cm)和脉冲 ( ms)为 :1 5 0 0 /30 ;1 5 0 0 /40 ;1 80 0 /30 ;1 80 0 /40时 ,融合率为 :81 .5 % ;83.3% ;77.6% ;82 .0 %。直接注核法和电融合法构建重组胚的卵裂率分别为 33.1 %和 2 8.9% ,桑椹胚发育率为 1 7.8%和 1 5 .5 %。结论 :电场强度为 1 5 0 0～ 1 80 0 V/cm,脉冲为 30 ms或 40 ms时 ,都能获得较高的融合率 ;直接注核法构建的核移植重组胚胎的卵裂率要比电融合法略高 ,但统计学分析差异不显著     

皮肌炎——附八例分析及一例剖检

皮肌炎是皮肤与横纹肌的变性及发炎性疾病,是胶元疾病之一,比较少见,国内报告一共只有6例。(1)(2)(3)(4)(21)我们与天津保定二地共见到8例,其中1例作了尸检。急性皮肌炎是急性发作,有高热,白血球往往增高,有全身毒血症,严重皮肤肌肉症状,病程往往短于一年;慢性皮肌炎往往有红斑,皮肤萎缩,干燥、鳞屑,色素沉着等皮肤异色症表现,肌肉症状进行缓慢,中毒症状不明显,病程往往超过一年。8例的皮疹在面部明显,皮疹的边缘不明显,开始时,发红肿胀,稍久有灰褐色色素沉着,第5、7例有典型的皮肤异色症改变,掌指关节背面有皮肤萎缩与毛细血管扩张的片斑,(见图3、4,)。第5、6例均有毳毛增生与毛孔性角化丘疹或片斑,特别是第6例类面毳毛丛生,有长达一厘米者。毛孔角     

骨肉瘤与活化B淋巴细胞融合疫苗的抗肿瘤效应

目的　建立骨肉瘤与活化 B淋巴细胞融合的肿瘤疫苗 ,探讨其生物学与抗肿瘤特性 .方法　以 50 0 g· L-1 聚乙二醇为融合剂 ,将 C3 h小鼠来源的 HGRPT基因缺陷型 LM9骨肉瘤细胞与脂多糖活化的小鼠 B淋巴细胞进行融合 .经HAT选择性培养基筛选后 ,再观察该融合瘤株的体内外生长特性 ,对小鼠的致瘤性以及抗肿瘤活性 .结果　该融合瘤株体外生长缓慢 ,对 C3 h小鼠无致瘤性 ,杂交瘤细胞细胞表达B7(70 .6% ) H- 2 Kb (53.4% ) ,融合疫苗保护的小鼠可获 1 0 0 %无瘤生存 (8/ 8)而 LM9和射线照射后的 L M9对照组小鼠全部死亡 (0 / 8) ,皮下接种融合疫苗治疗的荷瘤小鼠可获得80 %无瘤生存 .结论　活化 B淋巴细胞融合骨肉瘤细胞可能改变其生物学特性 ,对小鼠有较好的预防和治疗作用 ,说明了细胞融合方法构建的肿瘤疫苗具有潜在的应用价值     

柯萨奇B病毒性心肌炎病原学检测及单克隆抗体的应用

应用自备的柯萨奇 B病毒单克隆抗体 ( CVB-Mc Ab) ,建立斑点免疫结合试验( DIBA) ,并与病毒分离及酶联免疫吸附试验 ( ELISA)检测特异性 Ig M法作比较 ,对 2 2例临床诊断为病毒性心肌炎的患儿进行病原学检测。结果 :病毒分离阳性 4例 ( CVB51例 ,CVB63例 )。CVB抗原检测阳性 8例 ( 2例 CVB3 及 CVB5抗原均阳性 ,2例 CVB6抗原阳性 ,但此 4例病毒分离均呈阴性 ;另 4例抗原检测与病毒分离基本一致 ,但有交叉 )。提示 :应用CVB-Mc Ab行病毒抗原检测其灵敏度较病毒分离法高 ( 8/ 4) ,但存在交叉反应