囊胚培养及移植的临床结局分析

体外受精-胚胎移植技术是辅助生殖治疗过程中治疗不孕症的主要方法,经过20多年的发展和改善,仍面临妊娠率低、多胎发生率高的问题,提高妊娠率和降低妊娠风险一直是医务人员追求的目标.由于囊胚期胚胎移植可以更好地选择胚胎的发育潜力,使可供移植的胚胎得到筛选,有利于胚胎着床,故囊胚培养和移植已成为许多生殖中心提高妊娠率、降低多胎发生率的重要手段之一.本研究回顾性分析囊胚期胚胎移植和卵裂期胚胎移植的临床结局,探讨单囊胚移植的应用前景.     

体外受精失败患者再助孕时行ICSI的临床价值分析

目的:探讨常规体外受精(IVF)失败后,再次助孕采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSl)技术进行受精的临床价值。方法:回顾性分析2007年1月~2009年7月由于常规体外受精(IVF)诊疗中卵子完全不受精或受精率≤30%,而在随后的助孕治疗中采取ICSI方法受精的39个病例(共48个周期,研究组)的ICSI治疗结局。对照组为同期因男方少弱畸形精子症或无精子症进行ICSI治疗的连续82个周期。结果:与前次IVF相比,经ICSI治疗后受精率从15.85%显著提高至81.77%(P<0.01);研究组患者平均年龄、不孕年限、成熟卵子数和正常受精率、冷冻率及临床妊娠率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但优质胚胎率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ICSI是常规WF周期受精失败后再助孕治疗的有效方法,能有效地克服受精障碍,提高受精率,明显改善妊娠结局。     

人卵泡抑素基因真核表达载体构建和体外表达

目的:体外构建携带人卵泡抑素基因(FS)cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞(BHK21)中的表达。方法:从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FScDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒。经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒。pEGFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白(GFP)的荧光表达。结果:成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FScDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_013409.1)同源性为100%;成功构建pEGFP-FS重组表达质粒,将其转染BHK21细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:本实验成功构建了人FS的pMD-FS重组克隆质粒和pEGFP-FS重组表达质粒,为进一步研究FS对哺乳动物卵泡发育的影响奠定了基础。     

玻璃化与程序化两种不同胚胎冻融方法的临床应用效果比较

目的探讨玻璃化与程序化冻融胚胎的临床应用价值。方法回顾分析广西壮族自治区人口和计划生育研究中心的609个胚胎冷冻周期,其中366个程序化胚胎冻融周期与243个玻璃化冻融周期,比较两种不同冻融方法的胚胎复苏率、胚胎移植率、胚胎种植率、临床妊娠率等指标。结果玻璃化冷冻法与程序化冷冻法比较,其胚胎复苏率（94.75%,74.13%）、解冻移植率（97.94%,87.98%）、种植率（28.88%,16.94%）和临床妊娠率（42.86%,30.75%）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论玻璃化冷冻法比程序化冷冻法更适于人类胚胎的冷冻保存。     

杜氏盐藻2种碳酸酐酶基因跨内含子DNA序列的克隆和鉴定

目的：克隆杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶(DCA1)和碳酸酐酶(CA1)基因跨内含子基因组DNA序列。方法：利用跨内含子PCR方法，从杜氏盐藻基因组中克隆DCA1和CA1基因跨内含子基因组DNA序列。结果：DCA1基因跨内含子长度为4407bp，含7个外显子，由此推定的氨基酸序列长度为555个氨基酸残基；而CA1基因跨内含子长度为4473bp，含8个外显子，其推定的氨基酸序列长度为498个氨基酸残基。这2种基因的所有外显子一内含子交接点处序列都遵守GT—AG规律。结论：首次克隆得到了杜氏盐藻DCA1和CA1基因跨内含子DNA序列。     

杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段的克隆与分析

目的：获得杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。方法：根据Dunaliella tertiolecta、衣藻、团藻等生物硝酸盐还原酶(nitrate reductase，NR)高度保守序列EGWWFKP、WNVMGMM设计一对简并引物，以含硝酸盐培养基培养的的盐藻cDNA为模板，进行PCR扩增，产物克隆至T载体后转化大肠杆菌JM109，经筛选后测序，将测序结果推导成氨基酸序列，并与Dunaliella tertiolecta、团藻、衣藻、小球藻等进行同源性分析。结果：在盐藻中所获得的cDNA片段，核苷酸长度为381bp，编码127个氨基酸。推导的氨基酸序列与下列物种的硝酸盐还原酶进行同源性比较：Dunaliellal teriolecta为88．2％同源，团藻为78％，衣藻为67％，小球藻为59％。结论：所克隆的序列为盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。     

中国人血管抑素基因的克隆及其序列分析

目的：克隆中国人血管抑素(angiostatin，ANG)基因全长并进行序列分析。方法：应用RT-PCR，将5例健康人肝脏组织ANG基因克隆到pSP71载体上，用Sanger法进行基因测序分析。结果：通过RT-PCR获得一个1141bp的扩增产物，测序发现与已报道的ANG比较，国人ANG上有3个碱基突变位点：分别为第825位C→T；第927位T→G和第1078位G→A。前两个碱基突变氨基酸未发生变化，第3个碱基突变结果使缬氨酸(Val342)改变成为蛋氨酸(Met342)。结论：克隆得到中国人ANG基因片段，其碱基和氨基酸的变化可能是人群中该基因的遗传多态现象。     

ICSI胚胎质量及临床结局的影响因素

目的探讨不同取精方式、女方年龄、获卵数等因素对卵胞浆内单精子注射（ICSI）后胚胎质量和临床结局的影响。方法对施行ICSI-ET的87个周期进行分析。分别对不同取精方式、女方年龄、获卵数进行分组研究,比较各组的受精率、优质胚胎率及临床妊娠率。结果（1）取精方式：手术抽吸精组与体外排精组的受精率、优质胚胎率及临床妊娠率,比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）女方年龄：年龄≤30岁组的获卵数及正常受精率好于3—35个组及i〉5个组,差异均有统计学意义（P〈0．001）;优质胚胎率和临床妊娠率、种植率,3组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）获卵数：获卵数≤5个组、获卵数6-15个组及≥16个组。种植率和临床妊娠率、优质胚胎率,3组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ICSI时不同取精方式、女方年龄及获卵数对胚胎质量和妊娠结局无明显影响。     

精子形态学、精子-透明质结合试验与体外受精率的相关性研究

目的探讨精子形态学、精子-透明质结合试验（hyaluronan binding assay,HBA）与体外受精率的相关性。方法对体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transportation,IVF-ET）中精子形态学155例和精子-透明质结合试验38例进行分析,分别观察女方MⅡ卵子1509个和327个,记录受精和未受精卵的数目,并分析精子正常形态率、精子-透明质结合试验结合率和受精率的相关性。结果精子正常形态率≤5%、6%～14%、≥15%对应的MⅡ卵子受精率分别为48.05%、72.25%、81.79%,各组间相比较,差异有显著性（P〈0.05）。精子-透明质结合试验的结合率≤40%、41%～69%、≥70%对应的MⅡ卵子受精率分别为55.17%、72.07%、75.31%,≤40%组和其它两组间相比较,差异有显著性（P〈0.05）,另两组间相比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论在体外受精过程中,精子正常形态率与卵子的受精率有明显的相关性,而精子-透明质结合试验的结合率与卵子受精率有一定程度的相关性,此两项参数可作为选择不同的辅助生殖技术[体外受精（in vitro fertilization,IVF）或胞浆内单精子显微注射术（intracytoplasmic sperm injec-tion,ICSI）]的依据。     

杜氏盐藻2种碳酸酐酶基因5'上游的克隆与序列分析

目的：克隆盐藻2种碳酸酐酶基因(DCA1、CA1)5’上游区序列，并对其进行测序和序列分析。方法：利用Dra Ⅰ、EcoR Ⅴ、PvuⅡ和StuⅠ4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA，并与衔接头连接，构建成盐藻步行基因组文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4；巢式PCR方法从盐藻步行基因组文库中扩增DCA1和CA1基因5’上游区序列，双脱氧末端终止法测序。结果：DCA1基因，在GWL1、GWL3中分别扩增出约1．3kb和4、5kb的特异带，而CA1基因，则在GW12、GWL4中分别扩增出1．7kb和2．5kb的特异带；序列分析结果表明，所得序列的3’端与已知DCA1、CA1基因cDNA5’端序列完全一致。该2序列均有多个与转录调控有关的保守序列(如TATA—box、CAAT—box)和富含GT的重复序列等许多相似之处。结论：采用基因组步行方法从已知cDNA周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的DCA1、CA1基因的5’上游区序列，可能是2种新的杜氏盐藻碳酸酐酶基因的启动子区序列。