人型支原体Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

我们从 10 3株临床株中筛选出 8株对 6种氟喹诺酮类药物呈不同程度交叉耐药的人型支原体 (Mh)株 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增喹诺酮耐药决定区 (QRDR)。报告如下。一、材料与方法1.标本收集 :2 0 0 1年 4～ 8月从性病门诊收集泌尿生殖道感染患者的分泌物标本 5 12份 ,按文献 [1]方法 ,共分离鉴定出 10 3株Mh。2 .抗菌药物 :粉剂诺氟沙星 (NFX)、氧氟沙星 (OFX)、左氧氟沙星 (LFX)、环丙沙星 (CFX)、加替沙星 (GFX)和司帕沙星 (SFX)由浙江医药股份有限公司新昌制药厂惠赠。3.药敏试验和模板DNA提取 :均按文献 [1]方法。耐药株的M…     

hDaXX与12型腺病毒E1B55KD癌蛋白在体内外的结合反应

目的：研究12型糖尿病(Adenovirus 12,Ad12)E1B 55KD癌蛋白（Ad12E1B 55KD）打破hDaxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白（promyelocytic leukemia protein,PML）在细胞核共定位的机制。方法：构建hDaxx原核细胞表达质粒pQE30/hDaxx，并在大肠杆菌（E.coli）BL21中诱导表达，用镍-氮基三乙酸（Ni-NTA）琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应，Western blot方法研究hDaxx与Ad12E1B55KD直接结合反应。结果：质粒qQE30/hDaxx在E.coli BL21中成功诱导表达了hDaxx,其N端有6个组氨酸分子附着（6His-hDaxx）.Wetern blot结果显示hDaxx在体内外与Ad12E1B 55KD发生直接结合反应。结论：表达并获得纯化的6His-hDaxx,hDaxx能在体内外与Ad12E1B55KD直接结合。     

中药牛至单体体外抗解脲脲原体与人型支原体作用

目的观察唇形科植物牛至(满坡香)单体抗解脲脲原体与人型支原体的作用,揭示牛至单体更广的抗病原微生物的范围,寻找新的抗解脲脲原体与人型支原体药物。方法采用直接液体培养基稀释方法,测定中药牛至单体对60株泌尿生殖道支原体的体外抗菌效应。结果迷迭香酸的半数最低抑菌浓度为1.024 mg/m l,咖啡酸的半数最低抑菌浓度为0.512 mg/m l,香荆芥酚的半数最低抑菌浓度为0.512 mg/m l,百里香酚的半数最低抑菌浓度为0.512 mg/m l。结论中药牛至单体具有较强抗血清型解脲脲原体或人型支原体的作用。     

SDC2基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用

目的:通过比较三种结直肠癌筛查的方法,为结直肠癌早期诊断寻找一种非侵入性、检测性能良好的新型筛查方法。方法:收集2017年3月至2019年3月在广州医科大学第六附属医院确诊结直肠癌的153例患者的病例资料,分析SDC2基因甲基化检测、粪便潜血试验(FOBT)、血清癌胚抗原(CEA)检测三种方法阳性检出情况。结果:153例结直肠癌患者中,SDC2基因甲基化检测阳性为114例,灰度区为9例,阴性30例,FOBT阳性78例,阴性75例,血清CEA检测阳性36例,阴性117例,SDC2基因甲基化检测阳性检出率明显高于FOBT、血清CEA检测,且SDC2阳性+灰度区检出率达到80.39%。按照结直肠癌病理和临床分期分析,原位癌、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌患者中SDC2基因甲基化检测阳性检出率显著高于FOBT、血清CEA检测,Ⅳ期结直肠癌患者中SDC2基因甲基化检测阳性检出率略低于FOBT。结论:SDC2甲基化检测诊断结直肠癌及癌前病变有高的准确性,有望在结直肠癌及癌前病变早期筛查中发挥重要的作用。     

人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性研究

目的 探讨人型支原体和解脲脲原体对氟喹诺酮类药物的敏感性，指导临床合理用药。方法 采用微量肉汤稀释法测定人型支原体和解脲脲原体对6种氟喹诺酮类药物的敏感性。结果 司帕沙星和加替沙星对人型支原体和解脲脲原体具有良好的抑菌活性，其MIC50分别为0．03125、0．25mg／L和0．25、0．50mg／L。左氧氟沙星和氧氟沙星对两种支原体的MIC50均分别为1．0、2．0mg/L。诺氟沙星对两种支原体的活性较差，MICl卯分别为16．0、32．0mg／L。环丙沙星对人型支原体的MIC50为2．0mg／L，而对解脲脲原体的MIC50则为8．0mg／L。结论 氟喹诺酮类药物新品种司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的抗Mh和抗Uu活性强于环丙沙星和氧氟沙星等老一代氟喹诺酮类药物，本结果可为选择氟喹诺酮类药物治疗泌尿生殖道支原体感染提供实验依据。     

SARS病毒S蛋白部分片段B-细胞表位的多参数预测

目的预测SARS病毒S蛋白(spike glycoprotein)部分片段(aa No.400～600 & aa No.1 100～1 195)的B-细胞表位.方法应用多种参数和方法进行综合分析,包括跨膜分析、保守区分析、同源性比较、Hopp ＆ Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β-转角、万氏法等综合预测方法.结果显示B-细胞识别的表位可能在436～456和1 136～1 146残基或其附近,这两个被预测的表位均含有β-转角和不规则卷曲结构.结论本研究为应用合成肽抗原制备抗SARS病毒S蛋白抗体、诊断非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome, SARS)提供了依据.     

12种抗菌药物体外抗表皮葡萄球菌的活性研究

用微量肉汤稀释法测定从慢性前列腺炎患者标本中分离的４９株表皮葡萄球菌的抗菌活性及β－内酰胺酶。结果显示：美满霉素、白霉素有较强的抗菌作用，ＭＩＣ５０分别为０．２５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０分别为２ｍｇ／Ｌ、８ｍｇ／Ｌ。环丙沙星、氧氟沙星抗菌作用次之，ＭＩＣ５０分别为０．５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０均为３２ｍｇ／Ｌ。氨苄青霉素、林可霉素、淋必治抗菌作用较弱，ＭＩＣ５０分别为４ｍｇ／Ｌ、８ｍｇ／Ｌ、１６ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０分别为３２ｍｇ／Ｌ、６４ｍｇ／Ｌ、３２ｍｇ／Ｌ。表皮葡萄球菌对交沙霉素、阿奇红霉素、头孢拉定、罗红霉素及菌必治有较高抵抗作用，耐药率分别达４２．８６％、５９．１８％、６３．２７％、６７．３５％及７５．５１％。４９株表皮葡萄球菌β－内酰胺酶阳性率为８１．６３％。研究表明表皮葡萄球菌的多重耐药性较多见，临床医师应根据药敏结果，选用有效的抗生素以控制表皮葡萄球菌的机会感染，防止耐药菌株产生     

GFP-HPVl8 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础.方法 用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-Cl载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定.结果 阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb、618 bp和243 bp附近的片段.DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确.结论 成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD.     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

问号状钩端螺旋体外膜蛋白Loa22的克隆、表达及对豚鼠的免疫保护作用研究

目的构建问号状钩体强毒赖型56601株外膜蛋白Loa22的重组质粒,表达Loa22蛋白,研究该蛋白对豚鼠的保护作用。方法以问号状赖型钩体56601株基因组为模板扩增目的基因,将Loa22基因克隆至原核表达载体PQE-31,构建PQE31-Loa22重组体,将其转入大肠杆菌M15中诱导表达目的蛋白。于0、2、4周将蛋白及对照PBS分别经豚鼠腹股沟、腋下免疫豚鼠。每次剂量为蛋白50μg/只,末次免疫后2周,用培养3d的56601株钩体从腹腔攻击各免疫组豚鼠(1ml/只)。连续观察15d,观察各免疫组豚鼠发病情况,并取各免疫组豚鼠的肺、肝、肾做病理切片。分析蛋白Loa22对豚鼠的免疫保护作用。结果成功扩增出Loa22基因,构建原核重组质粒PQE31-Loa22。重组质粒能在大肠杆菌M15中高效表达Loa22蛋白。用Loa22蛋白主动免疫的豚鼠用56601株钩体攻击,结果显示无发病现象,而免疫对照组的豚鼠中出现了食欲不振、活动减少等现象,病理切片有明显改变。结论成功构建了Loa22重组原核表达质粒,表达纯化的蛋白可以使豚鼠抵抗同型钩体的攻击,免疫保护作用为82%。