小鼠前脑线粒体蛋白的增龄性变化

目的　探讨小鼠前脑不同发育阶段线粒体蛋白的表达变化。 方法　分别取妊娠12.5 d（E12.5）及17.5 d（E17.5）的胎鼠、出生2 d的新生鼠、出生3周的幼鼠和2月龄成年鼠的前脑组织,利用QRT-PCR和Western blotting检测小鼠前脑发育不同阶段中COX IV、HSP60、OGDH、PDHE1α的mRNA和蛋白表达水平。 结果　在E12.5 ~2 d的前脑组织中COX IV mRNA呈低水平表达,3周时表达量明显升高并达到顶峰;HSP60和PDHE1α mRNA在E17.5表达明显增高,OGDH mRNA则在2 d显著上升,三者表达水平均于2月达到顶峰。COX IV、HSP60、OGDH的蛋白水平从E12.5 ~3周无明显差异,但在2月时表达显著上升;PDHE1α蛋白随前脑发育其表达水平不断提高,并于2月达到高峰。此外,COX IV、HSP60、OGDH、PDHE1α mRNA与蛋白表达水平呈正相关。 结论　COX IV、HSP60、OGDH和PDHE1α可能参与了小鼠前脑发育过程且与年龄密切相关。     

大鼠骨髓基质细胞体外培养向神经干细胞的诱导分化

目的:已证实骨髓基质细胞可分化为中胚层组织细胞,实验予进一步探讨体外分离培养的骨髓基质细胞向神经干细胞分化的可能性,以及是否能继续定向分化为神经细胞及神经胶质细胞,为神经系统疾病细胞移植治疗提供种子细胞.方法:实验于2007-02/09在泸州医学院神经生物学研究室进行.①动物:选择5只普通级SD大鼠,由泸州医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物的处胃符合动物伦理学标准.②实验方法:大鼠戊巴比妥钠腹腔麻醉,取双侧胫骨和股骨,磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔.采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞,胰蛋白酶与EDTA联合消化,传至第4代,用含20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 μ g/L表皮生长因子、N2辅助因子的DMEM/F12培养液向神经干细胞诱导分化.③实验评估:观察原代、传代培养及诱导分化后的骨髓基质细胞生长情况和形态变化,采用SABC法进行免疫细胞化学榆测神经细胞特异性标志的表达.结果:①骨髓基质细胞形态观察:原代细胞接种l d后开始贴壁增殖,3 d后多数贴壁,贴壁细胞呈梭形或扁平形;10 d后90%细胞融合,以长梭形为主,突起粗大,形成网状、片状;传代后细胞贴壁速度加快,增殖能力更强,7 d左右达到融合.②诱导分化后细胞生长情况和形态变化:第4代骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化7 d,成球的细胞脱离瓶底,悬浮在细胞液中.将细胞离心弃上清,换成血清分化液后,细胞球逐渐贴壁,球周围很快发出突起,分化为星形胶质细胞样细胞、神经元样细胞及少突胶质细胞样细胞.③神经细胞特异性标志的表达:骨髓源性细胞球表达巢蛋白,呈棕黄色,为神经干细胞:从细胞球分化的细胞抗胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2及半乳糖脑苷脂均呈阳性.结论:骨髓基质细胞能在体外诱导分化出神经干细胞,且骨髓源性神经干细胞可进一步定向分化为神经细胞及神经胶质细胞.     

局灶性脑缺血对内源性神经干及前体细胞增殖、分化和迁移的影响

背景：正常成年动物中枢神经系统内存在能增殖、多向分化潜能的神经干细胞或神经前体细胞。在生理情况下，这些内源性神经干细胞或前体细胞处于静息状态。当脑缺血时，这些细胞将处于何种状态?目的：研究大鼠局灶性脑缺血时，内源性神经干细胞的分布、增殖、分化。设计：以大鼠为研究对象，随机对照的探索性研究。单位：一所医学院的神经生物学研究室、组织胚胎学教研室。材料：实验于2001—07／2002-07在泸州医学院神经生物学研究室完成。选择健康成年SD大鼠41只，雌雄不限，体质量250-300g。干预：阻塞大鼠大脑中动脉2h再灌流0．5，3，6，12h，1，2，3，5，10d制成局灶性脑缺血模型，阻塞线不能阻塞大脑中动脉为假手术组，正常大鼠为对照组。在各时间点处死动物，制成脑组织切片，用免疫组织化学单标和双标观察内源性神经干细胞或前体细胞的增殖、分布、分化。主要观察指标：内源性神经干／前体细胞的分布、分化。结果：在正常组和假手术组多数脑室室管膜细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性，脑实质内有零星散在增殖性细胞核抗原阳性细胞。再灌流3h，增殖性细胞核抗原阳性细胞出现在嘴侧脑室下层。再灌流12h以后，双侧侧脑室的一些脉络膜丛细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性。再灌流3-10d，视前区梗死区周边、纹状体、额顶皮质的增殖性细胞核抗原免疫反应阳性细胞显增加。再灌流3d，增殖性细胞核抗原阳性细胞开始出现于海马齿状回的颗粒下层，并随再灌流时间延长，增殖性细胞核抗原阳性细胞数量增多。免疫组化双标显示再灌流3d视前区有很少量的增殖性细胞核抗原／胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞，随后增多。再灌流10d内，未检查到增殖性细胞核抗原／神经丝双标阳性细胞。结论：脑缺血时诱导内源性神经干细胞增殖、分化，并向缺血纹状体和皮质迁移，此现象有助于阐明神经功能康复的机制。     

脑出血后大鼠神经干细胞增殖及迁徙途径的实验研究

目的探讨脑出血后大鼠神经干细胞增殖变化及迁徙途径。方法将75只SD大鼠随机分为脑出血组、假手术组和正常组,脑出血组采用自体血注入法复制脑出血模型。各实验大鼠腹腔注射溴脱氧核苷尿嘧啶(Brd U)标记神经干细胞,运用免疫组化染色观察神经干细胞增殖及迁徙分布情况。结果脑出血组侧脑室下区室管膜上皮的Brd U阳性细胞数比假手术组和正常组显著增加(P<0.05),Brd U阳性细胞沿胼胝体迁徙,最后散在分布于出血灶及周边区。结论脑出血后神经干细胞可增殖并沿胼胝体向出血灶及周边区迁徙,参与出血性脑损伤神经功能的修复。     

无创心脏血流动力学监测仪与超声心动图检测心功能指标的相关性分析

目的探讨CHMT3002心脏无创血流动力学监测仪评价临床患者心功能的可能性。方法选择上海市中山医院住院病人26例．其中心功能不全组11例,心功能1级对照组15例。在对每一例研究对象行超声心动图检查后立即行无创心脏血流动力学检测。采用线性相关分析及Bland-Altman一致性分析方法对两者进行相关性及一致性分析。结果两种仪器对LVEF、SV、SVI、CO、CI、EDV、LVET及PEP／LVET等指标的检测数值具有线性相关关系,而对PEP的检测数值无明显相关性。其中,两种方法在检测LVEF、LVET指标方面具有较好一致性,在SV、SVI、CO、CI、EDV方面的一致性一般．而对PEP、PEP／LVET检测的一致性则较差。结论CHMT3002心脏血流动力学监测仪的检测尚能较真实地反映患者心脏功能情况,但其并不能替代超声心动图对心功能的评价。     

Nrf2对体外三维皮肤光损伤模型的作用

目的探讨核转录相关因子E2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)对体外三维(threedimensional,3D)皮肤光损伤模型的保护作用,为光损伤发病机制及治疗途径提供实验依据。方法取儿童包皮分离、培养原代角质形成细胞(keratinocytes,KC)和成纤维细胞(fibroblasts,FBs)。以Ⅰ型胶原为基质混合包埋FBs,接种KC以构建正常体外3D皮肤模型。然后将3D皮肤模型分为3组:正常组、实验组和对照组。其中实验组在接种KC前,通过慢病毒转染方式使KC过表达Nrf2,再行3D皮肤模型的构建。除正常组外,实验组和对照组均予以UVA和UVB混合单剂量照射,照射后继续进行培养。24h后观察各组皮肤病理组织学改变、细胞凋亡情况及Nrf2,SOD,MDA等氧化应激相关指标的变化。结果正常3D皮肤呈乳白色皮肤类似物。组织病理学上表皮结构清晰,细胞排列整齐,核大圆深染;真皮为淡紫红色胶原基质,FBs散在分布;凋亡细胞少见。UV照射后,对照组表皮细胞排列紊乱、部分肿胀坏死,核浓缩,真皮胶原降解和FBs减少;凋亡细胞明显增加(P0.05);Nrf2,SOD,GSH和CAT表达水平显著降低(P0.05),而MDA和ROS水平明显升高(P0.05)。但经过表达Nrf2后,实验组细胞整齐清晰,核无明显浓缩,KC轻度肿胀,FBs轻微减少,凋亡细胞显著减少(P0.05);Nrf2,SOD,GSH和CAT水平升高(P0.05),MDA和ROS降低(P0.05)。结论体外构建的3D皮肤光损伤模型接近人皮肤光损伤,可作为一理想的光损伤模型进行推广;KC过表达Nrf2可减轻UV对体外3D皮肤的损伤。     

人参皂苷Rbl对大鼠局灶性脑缺血白质重塑的影响

目的　探讨人参皂苷Rbl(Ginsenoside Rb1,GSRb1)对大鼠局灶性脑缺血白质重塑的影响。 方法　大鼠随机分为假手术组、溶媒处理组和人参皂苷Rbl处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R）损伤模型,用LFB染色观察大鼠胼胝体和内囊的髓鞘变化,用免疫组化染色法检测缺血侧胼胝体GFAP和APP的表达以评估星形胶质细胞和轴突的改变。 结果　缺血2 h再灌72 h后,溶媒处理组胼胝体和内囊有明显的髓鞘紊乱、脱失,胼胝体GFAP和APP表达显著增加。与溶媒处理组相比,GSRb1处理组髓鞘脱失有明显改善 (P<0. 01, P<0. 05)且胼胝体GFAP和APP表达显著减少(P<0. 05)。 结论　GSRb1可能促进大鼠局灶性脑缺血后脑白质重塑。     

甲状腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞分化为少突胶质细胞的影响

背景:如何为脱髓鞘疾病的细胞替代治疗提供丰富的少突胶质细胞来源是急需解决的问题.目的:实验拟采用表皮生长因子及碱性成纤维细胞因子诱导骨髓间充质干细胞向神经干细胞方向分化,撤退细胞因子后,用甲状腺激素诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-08/12在泸州医学院神经生物学研究室完成.材料:普通级SD大鼠5只用于骨髓间充质干细胞的培养.方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,传至第4代,用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、N2辅助因子、甲状腺激素T3的DMEM/F12诱导液诱导向神经干细胞分化.诱导后4 d,更换成含胎牛血清、甲状腺激素T3的DMEM/F12分化液,诱导向少突胶质细胞分化.主要观察指标:骨髓间充质干细胞生长情况和形态变化,采用SABC法进行免疫细胞化学检测神经细胞特异性标志的表达.结果:原代细胞接种3 d后多数贴壁,传代后细胞贴壁速度加快,增殖能力更强.诱导液处理第4天,圆形细胞聚集成簇.换成分化液后,细胞伸出树枝状细长突起,交织成网,形成少突胶质细胞样细胞.骨髓源性细胞簇表达巢蛋白阳性,示神经干细胞;从细胞簇分化的细胞,多数细胞表达半乳糖脑苷脂,部分细胞表达髓鞘碱性蛋白,示少突胶质细胞,少数细胞表达微管相关蛋白2阳性,示神经元.结论:甲状腺激素在体外可诱导骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞分化.     

面部瘢痕的治疗体会

随着人们生活水平的不断提高，美容意识日益增强，当各种原因造成的瘢痕影响容貌时，常给患者造成沉重的心理负担，影响身心健康。我科自１９９６年以来，共治疗各种面部瘢痕６４３例，根据瘢痕类型的不同，采用相应的治疗方法，获得了良好的临床效果。１临床资料本组６４３例，其中男性１９７例，女性４４６例，年龄最大６７岁，最小４岁，主要集中在２０～３０岁。病因：烧伤后瘢痕１５８例，外伤性瘢痕２４６例，感染、痤疮后瘢痕１２９例，手术后瘢痕１０２例，原因不明８例。２治疗方法２．１皮肤磨削术：共１３８例，用于痤疮瘢痕及微…     

移植GDNF基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用

目的:探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的神经干细胞(NSCs)是否比单纯NSCs移植对脑卒中有更好的神经保护.方法:用GDNF重组质粒转染NSCs,构建过表达GDNF的NSCs(GDNF/NSCs).插线法制备大鼠脑缺血卒中模型,再灌注3d,脑立体定位分别移植NSCs、 GDNF/NSCs以及生理盐水到同侧侧脑室,实验分为GDNF/NSCs组、NSCs组和对照组.再灌注第1、 2、 3、 5和7周处死大鼠,用改良的神经功能缺失评分和H-E染色分别评估大鼠神经功能和脑梗死体积;免疫组织化学显色观察移植的NSCs数量与分布和突触蛋白Syn、 PSD-95在脑组织的表达.结果:再灌注2、 3周,GDNF/NSCs组较NSCs组神经功能恢复更好.在各时间点GDNF/NSCs和NSCs组大鼠脑缺血体积较对照组显著减小;GDNF/NSCs组的NSCs细胞数量较NSCs组显著增多.再灌注2和3周,GDNF/NSCs组Syn免疫阳性产物比NSCs组显著增加;各时间点GDNF/NSCs组的PSD-95免疫阳性产物比NSCs组显著增加.结论:GDNF基因修饰的NSCs比NSCs对大鼠脑卒中有更好的神经保护作用.