百令提取液对环孢素A导致肾小管损伤的防治作用

目的：从细胞水平观察百令提取液对环他素A(CsA)肾毒性的影响。方法：体外培养肾小管上皮细胞，通过^3H-TdR掺入、MTT比色法、PI染色法和细胞LDH释放等观察百令提取液对CsA引起的肾小管上皮细胞毒性的防治作用。结果：^3H-TdR掺入和MTT比色法显示在一定的剂量范围百令提取液可明显促进培养的肾小管上皮细胞增生，5mg／L以上的CsA抑制细胞增殖；细胞周期的石研究显示15mg／L以上的CsA使小管上皮细胞细胞周期5且滞在G2期；此外，更大剂量的CsA(25mg／L)对细胞有直接的毒性作用，使培养上清LDH值升高。百令提取液能部分逆转CsA引起的细胞增殖受抑和细胞周期阻滞，但足对CsA导致的细胞培养上清LDH的升高没有明显的影响。结论：本研究证实了百令提取液可以促进体外培养的肾小管上皮细胞增生，对CsA的肾小管细胞毒性具有一定的拈抗作用。     

血管紧张素Ⅱ的致炎作用及机制

血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是肾素 血管紧张素系统(ｒｅｎｉｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｓｙｓｔｅｍ ,ＲＡＳ)的主要活性物质 ,其生物学功能主要体现在调节血管张力、血流及促进细胞生长、增生等方面。随着近年来研究工作的深入 ,发现ＡｎｇⅡ还具有另一重要功能———致炎作用     

大黄酸对葡萄糖转运蛋白1基因转染系膜细胞功能的影响

目的通过观察大黄酸对葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞(MCGT1)功能的影响,探讨大黄酸治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型,3H-脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞胶原Ⅳ、FN和GFAT的表达.结果MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741±60.5)dpm*μgprot-1比(92.2±9)dpm*μgprot-1],同时表现出细胞大小、RNA/DNA和蛋白/DNA明显增加的细胞肥大表型,细胞外基质合成增加,MCGT1的3H-脯氨酸掺入量明显高于MCLacZ[(7.0±0.4)dpm*cell-1比(4.6±0.6)dpm*cell-1],GFAT活性明显增强(约增加1.8倍).大黄酸能够减少MCGT1的糖摄取[(560±64)dpm*μgprot-1比(741±60.5)dpm*μgprot-1),纠正MCGT1的肥大状态,并抑制MCGT1细胞外基质的合成和表达,降低MCGT1的GFAT活性.结论GLUT1的过度表达会明显改变系膜细胞的功能,大黄酸能逆转GLUT1基因转染所致系膜细胞功能的改变.     

葡萄糖转运蛋白对大鼠肾小球系膜细胞己糖胺通路的影响

目的探讨己糖胺通路(HBP)在葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞功能改变中的作用.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定HBP限速酶--谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞GFAT基因的表达.结果 MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741.0±60.5)dpm/μg蛋白质 vs (92.2±9.0)dpm/μg 蛋白质,P＜0.01],动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的3.7倍,而两者Km值无明显差别.MCGT1的GFAT活性明显高于MCLacZ[(3.25±0.25)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·10 vs (1.15±0.16)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·     

马兜铃酸Ⅰ致肾小管上皮细胞DNA损伤的逆转性实验

目的:研究探讨马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)对猪肾小管上皮细胞(LLC -PK1细胞)DNA损伤和细胞周期阻滞是否具有可逆性。　方法:采用LLC- PK1细胞为实验对象,选择不同浓度的AAⅠ(80, 320,和1 280ng/ml)体外刺激LLC- PK1细胞24h,然后去除含有AAⅠ的培养基,换不含AAⅠ的培养基继续培养细胞24和48h。同时设不加AAⅠ的细胞为对照组。采用单细胞凝胶电泳(又称彗星实验)检测经不同剂量AAⅠ处理的LLC- PK1细胞不同时间点DNA损伤情况,流式细胞仪技术检测它们对LLC -PK1细胞周期的影响。　结果:AAⅠ(80ng/ml)组细胞彗星实验为阴性,但AAⅠ(320和1 280ng/ml)导致细胞DNA损伤,出现明显的彗星拖尾现象,且细胞在G2 /M期的比例也明显增加,均呈剂量依赖性(P<0. 01 )。用不含AAⅠ的培养基继续培养细胞24和48h后,AAⅠ( 320ng/ml)组彗星拖尾现象明显减轻至消失,G2 /M期细胞的比例与同时间对照组比较无明显差异(P>0 .05 )。而AAⅠ(1280ng/ml)组彗星拖尾现象无明显改善(P<0. 01),G2 /M期细胞的比例仍明显高于同时间正常对照组(P<0 .05)。　结论:AAⅠ可导致LLC- PK1细胞DNA损伤,使细胞周期阻滞在G2 /M期。低剂量AAⅠ造成的DNA损伤可完全恢复,细胞进入正常的细胞周期,但高剂量所致DNA损伤不可逆转。     

大黄酸对低剂量链脲佐菌素肥胖糖尿病大鼠糖尿病肾病的影响

用低剂量链脲佐菌素(25mg/kg体重)加高糖、高脂饲料喂养大鼠诱导肥胖糖尿病模型,用大黄酸(100mg·kg-1·d-1)进行预防性干预或治疗性干预,均显示大黄酸能降低低剂量链脲佐菌素肥胖糖尿病大鼠尿蛋白水平、抑制肾小球肥大、TGF-β1mRNA的高表达及改善肾脏病变。     

牛磺酸对大鼠被动型Heymann肾炎的疗效观察

牛磺酸 (Ｔａｕｒｉｎｅ ,Ｔａｕ)是广泛分布于动物组织细胞内的含硫 β 氨基酸。近年研究发现其具有膜稳定作用、抗脂质过氧化损伤和免疫调节等广泛生物效应。至于牛磺酸对肾小球疾病的保护作用 ,目前国内尚未见报道。本研究以大鼠被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎 (ｐａｓｓｉｖｅＨｅｙｍａｎｎｎｅｐｈｒｉｔｉｓ ,ＰＨＮ)为对象 ,初步观察了牛磺酸的治疗效果。一、材料与方法1.ＰＨＮ模型制备 :参照Ｌｏｔｏｎ等[1] 方法提取鉴定致Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎的大鼠近曲小管刷状缘微绒毛 (ｂｒｕｓｈｂｏｒｄｅｒｍｅｍｂｒａｎｅ,ＢＢＭ) ,免疫新西兰…     

高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠模型及其肾病特点

目的：制备发病过程类似人类2型糖尿病的动物模型，并观察其肾脏病变特点。方法：用高糖高脂饲料喂养Wistar大鼠诱发胰岛素抵抗，然后用亚致病剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射，诱发高血糖症。结果：高糖高脂饮食后1个月，大鼠发生高胰岛素血症、胰岛素抵抗和高脂血症。注射STZ后，大鼠血糖升高，平均279mg/dl，血胰岛素降至常规饲料喂养大鼠的水平。其肾脏改变特点，临床上表现为持续蛋白尿；病理改变为肾小球体积增大、髓袢腔扩张、系膜增生和硬化、基底膜增厚、内皮细胞泡沫样变、出入球动脉透明样变以及间质血管损伤等。结论：Wistar大鼠用高糖、高脂饮食结合小剂量STZ注射可成功制备2型糖尿病模型，并具有典型糖尿病肾病病变特点，是研究2型糖尿病及其慢性血管并发症的理想动物模型。     

葡萄糖转运蛋白1基因转染对系膜细胞功能的影响

目的通过建立葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的基因转染系统,观察GLUT1的过度表达对系膜细胞功能的影响。方法利用逆转录病毒载体建立CLUT1基因转染的大鼠系膜细胞(MCGT1),以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照。用2-脱氧-3H-萄萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型,3H-脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白(FN)的合成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞胶原Ⅳ、FN的表达。结果MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741．0±60．5)dpm·μgprot-1比(92．2±9．0)dpm·μgprot-1,P＜0．01]。动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的3．7倍,而两者Km值无明显差别。在相同的葡萄糖浓度下,MCGT1的乳酸生成增多,表现出细胞体积增大、RNA/DNA和蛋白质/DNA比值增高等细胞肥大表型。与对照相比,MCGT1的胶原和FN合成与表达明显增加。结论GLUT1的过度表达使系膜细胞具有糖尿病肾病(DN)的细胞表型。GLUT1的功能状态直接影响系膜细胞的糖代谢及功能变化。     

百令及其提取液对大鼠环孢素A肾毒性的防治作用

目的 :观察百令及其提取液对环孢素A(CsA)肾毒性的防治作用。　 方法 :以 2 5mg/ (kg·d)剂量的CsA皮下注射制作大鼠CsA肾毒模型 ,同时以 1 5g/ (kg·d)剂量的百令或相当剂量的提取液喂饲以预防肾毒性 ,分别于治疗 1周、2周和 4周时作有关指标的测定。　 结果 :本实验成功地制作出了大鼠CsA肾毒模型 ,模拟出了CsA肾中毒的典型功能学和形态学改变。百令及其提取液能明显改善CsA肾中毒大鼠的肾小管损害 ,防止尿量增多、减少尿N 乙酰 β 氨基葡萄糖苷酶和尿钠的排泄、改善尿低渗透压状态 ,也防止CsA用药后引起的血清肌酐升高。它们明显降低血胆固醇水平 ,但对血三酰甘油有升高作用。组织形态学证实 ,百令及其提取液能减少肾小管上皮细胞空泡变性和细胞坏死 ,减少间质炎细胞浸润及间质纤维化 ,降低小血管的透明样变性的发生率 ;同时也抑制转化生长因子 β在小血管的表达 ,减少纤维连接蛋白在球囊壁和血管的沉积。　 结论 :百令及其提取液能有效地防治CsA肾毒性