纳米脂质体槲皮素诱导人食管癌癌干样细胞凋亡的研究

目的检测纳米脂质体槲皮素对人食管癌癌干样细胞凋亡的诱导作用，并探讨其机制。方法以氯仿-DMSO预溶的脂质体槲皮素经负压旋转蒸发、超声破碎及80nm过滤制备纳米脂质体槲皮素。将其作用于人食管癌细胞系Eca109／9706细胞的生长抑制率（MTT法），及作用后食管癌细胞中羟自由基（OH^-）、NO、PTEN、NF-κB及Caspase-3的表达（免疫组化法）及凋亡率（采用TUNEL法）。检测Eca109／9706细胞中CD133、MDR1的髟双免疫酶标及单、双荧光标记的复合率。结果纳米脂质体槲皮素处理的Eca109／9706细胞的生长抑制率、OH^-、NO、PTEN、NF-KB及Caspase-3表达和凋亡率均显著高于对照组（P〈0.01）。Eca109／9706细胞的的单免疫荧光／单免疫酶标率各为80％及70％，双免疫荧光／双免疫酶标的复合率为30％-43％。结论纳米脂质体槲皮素可诱导Eca109／9706细胞产生氧化应激反应并激活PTEN、NF-κB的转导途径，最终通过Caspase-3诱导细胞凋亡；CD^＋133、MDR1^＋可作为癌干样细胞的标志。     

板层状鱼鳞病患者外周血白细胞生长、分化相关基因的表达

目的:探讨板层状鱼鳞病(LI)患者外周血白细胞有关生长、分化的基因的表达情况.方法:LI患者与健康人各8例,分离外周血白细胞,采用原位杂交和RNA斑点印迹方法,检测c-fos、ras、c-myc、EGFR、iNOS 基因的表达;应用免疫细胞化学染色和蛋白质斑点印迹方法,检测MAPK、CyelinD1、Filaggrin、Involucrin及K10蛋白的表达.结果:LI组外周血白细胞c-fos、ras、c-myc、EGFR、iNOS基因和MAPK、Filaggrin、Involucrin、K10蛋白的表达较健康对照组降低(P<0.01),而CyelinD1的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:LI患者外周血白细胞有关生长、分化的基因多旱现表达下调.     

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后,随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本,应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核;ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质;３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。     

电针及生物活性物质对大鼠多形核细胞杀菌功能的影响

用改良的四氮唑硝基蓝（ＮＢＴ）还原法观察了电针以及生物活性物质（ＢＡＳ）包括５－羟色胺（５－ＨＴ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）、生长抑素（ＳＯＭ）和Ｐ物质（ＳＰ）对大鼠多形核白细胞（ＰＭＮ）杀菌功能的影响。结果表明：电针及ＢＡＳ均能增强大鼠ＰＭＮ的杀菌功能（Ｐ＜０．０１）；ＢＡＳ对大鼠ＰＭＮ的杀菌功能具有双向调节效应。纳洛酮可阻抑电针对ＰＭＮ杀菌功能的提高（Ｐ＞０．０５）；可被ＢＡＳ所翻转。电针的镇痛效应和ＮＢＴ阳性细胞提高效应之间存在着明显的正相关（Ｐ＜０．０１）。     

EGCG对A431细胞NF-κB表达的表观遗传修饰效应及对光动力的影响

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人表皮细胞癌A431细胞内核转录因子（NF-κB）表达的表观遗传修饰效应,探讨联合5-氨基酮戊酸介导光动力疗法（ALA-PDT）的增敏作用。方法:低氧诱导培养A431细胞,用MTT比色法检测不同浓度EGCG对A431细胞增殖的影响,MS(methylation specific)-PCR检测p16INK4ɑ基因甲基化变化,免疫印迹检测NF-κBp65,DNMT1,HDAC1,CyclinD1,HIF-1α,VEGF,p16INK4ɑ表达,并用免疫细胞化学染色观察A431细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）;用流式细胞仪检测EGCG联合ALA-PDT诱导的A431细胞凋亡。结果:EGCG具有抑制A431细胞增殖并诱导凋亡的作用,抑制效应呈浓度依赖性;p16INK4ɑ基因甲基化水平减低显著;免疫印迹显示NF-κBp65,DNMT1,HDAC1,CyclinD1,HIF-1α,VEGF表达下调,p16INK4ɑ表达上调;E-cadherin表达上调显著,呈浓度依赖性。EGCG联合ALA-PDT治疗组促凋亡作用显著。结论:EGCG对A431细胞具有抑制增殖、血管生成、侵袭的作用,通过影响NF-κB表观遗传修饰诱导细胞凋亡。EGCG联合ALA-PDT的促凋亡作用,增强了A431细胞对ALA-PDT的敏感性。     

槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用

目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

目的 探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38、Caspase-3表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为3组①对照组只加DMEM(Sigma)培养液(含体积分数10%胎牛血清)培养48 h.②Br组终浓度为2×10-5 mol/L 8-Br-cAMP的培养液培养48 h.③Q组终浓度为43 μmol/L槲皮素的培养液培养48 h.对以上3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率.以免疫组化方法观察3组细胞的P38 MAPK-IR和Caspase-3-IR反应性.结果Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组;Br组及Q组细胞的P38 MAPK-IR高于对照组;Br组及Q组细胞的Caspase-3-IR亦高于对照组.P38 MAPK-IR与Caspase-3-IR呈正相关.P均<0.05.结论P38 MAPK及Caspase-3参与了8-Br-cAMP及槲皮素诱导的Eca-109细胞的凋亡.     

人食管癌组织中DNA聚合酶β与XRCCl表达的相关性

目的 :观察XRCC1及DNA聚合酶 β(POLB)在人食管癌、癌旁及相邻的正常组织内的表达。方法 :应用免疫组化方法对 17例食管癌患者的癌组织、癌旁组织及相邻的正常组织中POLB和XRCC1的免疫反应性 (IR)进行定位及表达水平的比较。结果 :POLB IR和XRCC1 IR在癌组织、癌旁组织及正常组织中依次减弱 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1) ,2者在上述组织中定位相似 ,且表达呈显著正相关 (P <0 .0 1)。结论 :POLB和XRCC1在癌旁组织表达的相对提高可能为癌变的早期事件 ;2者表达的定位近似 ,提示 2者在形态和功能上密切相关。     

人食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变特点分析

目的：探讨人食管癌DNA聚合酶beta(polβ)基因突变的特点。方法：对75例人食管癌组织及4例正常对照组织中提取总RNA,进行RT→PCR,对PCR产物克隆后以Sanger‘s法测序。结果：人食管癌标本的polβ基因突变率36％(27／75)。突变形式包括：①A：G转换,突变频率为66．7％(18／27),375位的A→G(Ⅱe→Val)、466位G→A(Gly→Glu)、660位A→G(Arg→Gly)、670位A→G(Glu→Gly)、740位A→G(Lys未改变);②T：C转换,突变频率18．5％(5／27),454位T→C(Phe→Ser)、665位T→C(Gly未改变);③G：T颠换,突变频率18．5％(5／27),462位G→T((Ylu→提前终止于116aa);④A：T颠换,突变频率18．5%(5／27),613位A→T(Lys→Ⅱe)、737位A→T(Pro未改变);⑤G：C颠换,突变频率7．4％(2／27),648位G→C(Gly→Arg);⑥177-234位的58bp缺失,移码及提前终止,突变频率为37％(10／27)。结论：人食管癌组织polβ基因突变具有以下特点：①标本突变率达36％(27／75);②有以A：G转换和G：T颠换为热点等多种突变形式;③2种提前终止可产生2种截短的polβ蛋白,1种具有116氨基酸长度;另一种58bp的缺失者仅有26氨基酸长度。     

纳米脂质体槲皮素对Eca-9706细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的：探讨纳米脂质体槲皮素（nLQ）诱导人食管癌Eca-9706细胞逆转化及凋亡的效应及其机制。方法：采用旋转蒸发法制备以氯仿和DMSO为溶剂的脂质体槲皮素,将其超声波破碎并经80nm滤膜过滤制成nLQ,不同浓度（10、20、40、80和100μmol/L）作用于Eca-9706细胞,用MTT法检测各组Eca-9706细胞的生长抑制率。分别取Eca-9706细胞,分为nLQ组（加40μmol/LnLQ）和对照组。TUNEL法检测2组细胞凋亡率;免疫细胞化学/免疫印迹法检测2组处理48h后Eca-9706细胞CyclinD1、PTEN、c-Met、VEGF、组蛋白去乙酰化酶（HDAC）1及NF-κB表达的变化。结果：各组Eca-9706细胞生长抑制率（F分别为128.041、142.683和231.054,P〈0.001）和2组细胞凋亡率（t=94.770,P〈0.001）比较,差异均有统计学意义。PTEN免疫反应性和印记信号增强（t分别为5.352和4.308,P均〈0.05）,Cyclin D1、c-Met、VEGF、HDAC1和NF-κB的免疫反应性减弱（t分别为4.006、9.184、13.853、4.698和3.575,P均〈0.05）,其印迹信号亦减弱（t分别为3.827、6.399、7.868、4.695和3.406,P均〈0.05）;以上各细胞蛋白的免疫细胞和免疫印迹信号之间呈正相关（rs分别为0.952、0.915、0.927、0.842、0.879和0.855,P均〈0.05）。结论：nLQ可抑制Eca-9706细胞生长及增殖,逆转Eca-9706细胞PTEN的低表达和c-Met及VEGF的高表达,并通过抑制HDAC1和NF-κB及激活PTEN表达的HDAC抑制信号途径而诱导细胞凋亡。