古细菌水通道蛋白AqpM四聚体在脂质双分子层的分子动力学模拟

目的通过古细菌水通道蛋白AqpM的分子动力学模拟,为其结构及功能研究奠定基础。方法将AqpM四聚体嵌入在二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)脂质双分子层,并加入水模型(TIP3P),使之模拟水通道蛋白与脂质和水分子在真实环境中的相互作用。结果模拟过程中RMSD值在最后2.35ns的变化较小,表明蛋白和脂质达到最终结构的平衡。结论成功进行了AqpM脂质平衡系统的分子动力学模拟,并对AqpM通道的结构作了进一步研究,这对了解水通道蛋白结构及其功能具有重要意义。     

粉尘螨变应原第6组分基因克隆及序列多态性分析

目的获得粉尘螨变应原第6组分(Der f 6)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank(AF125187)公布的Der f 6的CDS区序列设计引物,使用PrimeSTAR?HS DNA进行PCR扩增,将目的基因片段与pMD19-T simple连接,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨Der f 6编码基因,大小为839bp。对5个Der f 6克隆质粒测序并与参考序列GenBank No.AF 125187和GenBank No.EU085359比对,出现突变的cDNA序列合计36处,cDNA克隆中序列存在27处突变至少达到3个;推导的氨基酸序列有15处与上述27个位点一致。结论获得粉尘螨Der f 6编码基因并证明其序列具有多态性,为相关研究奠定了基础。     

腐食酪螨主要过敏原Tyr p 35基因克隆、表达及其产物的Western blot分析

目的克隆、表达腐食酪螨主要过敏原Tyr p 35的cDNA,检测其表达产物与血清IgE结合活性。方法根据Tyr p 35基因序列(GenBank Accession No.KX060612)设计引物,PCR扩增cDNA,构建原核表达载体pET-28a(+)-Try p 35,转化至E.coli BL21(DE3)plysS,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达,层析法纯化重组蛋白,Western blot法检测其与血清IgE的结合率。结果克隆Tyr p 35基因全长为1 461bp,编码486个氨基酸,为稳定的亲水性蛋白,含有醛/组氨醇脱氢酶活性位点。将测序正确的表达质粒pET28a(+)-Tyr p 35转化Competent cell BL21(DE3)T1R,经IPTG诱导表达目的蛋白,部分可溶性表达。Western blot检测rTyr p 35血清IgE结合率为82.35%(14/17)。结论成功克隆rTyr p 35基因,其表达产物为主要过敏原之一,纯化后仍具有血清IgE结合活性,为腐食酪螨过敏原标准化,诊断试剂以及脱敏治疗制品的研发奠定了基础。