环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究

目的 用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫.方法 提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA.根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的原理,设计4条隐孢子虫特异引物,利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以正常牛粪DNA为阴性对照.LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性,对LAMP产物进行电泳分析,观察其特征条带的情况.结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后时不再呈绿色,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色.隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物.结论 LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测牛粪中的隐孢子虫.     

日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的克隆

目的比较日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的差异。方法提取东方田鼠、SD大鼠、C57BL/6小鼠和KM鼠肝脏DNA,根据东方田鼠特异性DNA序列片段(GenBank登录号:AF277394)设计引物,PCR方法扩增以上4种鼠的基因组特异性DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定特异条带,纯化后的PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,进行DNA序列分析。结果 PCR扩增东方田鼠、SD大鼠DNA分别得到520bp左右的特异扩增片段,同源性为99%。C57BL/6小鼠和KM鼠没有扩增出此特异片段。结论日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠之间特异性DNA序列有高度的同源性。     

环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究

目的 用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫.方法 提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA.根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的原理,设计4条隐孢子虫特异引物,利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以正常牛粪DNA为阴性对照.LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性,对LAMP产物进行电泳分析,观察其特征条带的情况.结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后时不再呈绿色,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色.隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物.结论 LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测牛粪中的隐孢子虫.     

舌形虫和舌形虫病的流行和诊治

舌形虫病是一种危害人体健康的人兽共患寄生虫病，过去被认为是罕见的寄生虫病，但近年来报道的病例明显增多，引起了医学界的重视。随着生活水平的提高，人们的饮食方式也有所改变，尤其是喜食一些生的和半生的动物食品，不良的进食习惯与民间的风俗旧习可能是造成该病传播的重要原因。     

上海养殖场奶牛感染隐孢子虫的调查

目的 对上海地区养殖场奶牛的隐孢子虫感染状况进行调查分析. 方法 采集上海市奉贤区、金山区和青浦区5个养殖场的奶牛粪便,过滤沉淀,应用商品化试剂盒提取DNA,基于隐孢子虫18S rRNA基因进行巢式PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定,对阳性PCR产物进行测序,鉴定虫种,并统计相应的感染率和构成比. 结果 共采集奶牛粪便样本204份,其中奉贤123份,金山43份和青浦38份,共发现36个隐孢子虫阳性样本,阳性率为17.65％ （36/204）;经测序鉴定,奶牛感染的主要虫种为安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni）,占94.44％ （34/36）,少量为牛隐孢子虫（Cryptosporidium bovis）,占5.56％ （2/36）. 结论 安氏隐孢子虫是该地区奶牛感染的主要隐孢子虫虫种,存在潜在的公共卫生危害.     

东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫童虫cDNA文库及新基因分析

目的获得日本血吸虫病新的候选疫苗分子。方法用对日本血吸虫具有天然抗性的东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫肝期童虫cDNA文库，阳性克隆转入E．coliBM25．8环化成质粒，抽提质粒DNA，EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定，插入片段进行核苷酸序列测序，并进行生物信息学分析。结果共获得12个不同的基因，插入片段长度为300～1100bp，其中2个具有完整的开放阅读框，为日本血吸虫新基因，命名为sj—sMf1和sj—sMf2，分别编码93个和61个氨基酸。前者含有cAMP磷酸化位点和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点各1个，后者含有1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和2个蛋白激酶c磷酸化位点。结论用东方田鼠血清作为探针筛选到2个日本血吸虫新基因。     

东方田鼠免疫抑制模型对日本血吸虫感染性的研究

目的 建立东方田鼠免疫抑制模型,初步探讨淋巴细胞在东方田鼠抗血吸虫病机制中的作用.方法 成年健康的东方田鼠40只,分成4组(每组10只):免疫抑制+血吸虫感染组、免疫抑制组、血吸虫感染组和空白对照组.免疫抑制剂每周注射3次,连续使用6周,建立东方田鼠免疫抑制的动物模型,用脾淋巴细胞转化试验和ELISA抗体检测进行免疫抑制模型的初步鉴定.在尾蚴攻击感染各组动物后42 d,麻醉处死各组动物后进行解剖,灌注冲虫,收集虫体和肝脏虫卵镜检.结果 免疫抑制模型淋巴细胞增殖受到显著抑制;免疫抑制组血吸虫抗体水平显著低于未抑制组和空白对照组;免疫抑制和未抑制的东方田鼠均未检出成虫和虫卵.结论 成功建立东方田鼠免疫抑制模型.淋巴细胞在东方田鼠抗血吸虫病机制中可能不发挥直接作用.     

日本血吸虫不同发育阶段抗原对人早期胚胎滋养细胞的影响

目的探讨日本血吸虫不同发育阶段抗原对原代培养的人早孕期滋养细胞的分泌功能的影响,为疫区育龄妇女及孕产妇的临床寄生虫防治提供科学依据。方法收集6~10孕周行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛组织;分离、培养滋养细胞;液态芯片ProcartaPlex法检测给予25μg/ml虫卵排泌抗原(ex/secretory antigen,ES)、可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)和可溶性虫体抗原(soluble worm antigen,SWA)18 h后滋养细胞培养上清中细胞因子的分泌水平。结果 ES可以明显促进人早孕期滋养细胞分泌IL-6和IL-8,其浓度为(155.58±20.07)pg/ml(t=8.472,P0.05)和(12.78±2.35)ng/m1(t=8.006,P0.05),而SEA仅明显促进滋养细胞分泌IL-8,其浓度为(14.18±2.24)ng/ml(t=7.413,P0.05)。SEA可以促进滋养细胞分泌趋化因子单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1),其浓度为(212.2±14.57)pg/ml(t=15.640,P均0.05)。ES和SWA均可以明显促进滋养细胞分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),其浓度为(78.56±5.71)pg/ml和(66.61±5.55)pg/ml(t=8.892,6.538,P均0.05)。SEA和SWA均促进滋养细胞分泌组织抑制基质金属蛋白酶-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1),分泌量为(1 925.93±143.22)pg/ml和(1 749.83±53.91)pg/ml(t=4.417,4.402,P均0.05)。结论本研究采用日本血吸虫不同虫期的抗原作用人早孕原代滋养细胞,发现ES和SEA促进滋养细胞分泌炎症因子;SWA明显促进TGF-β1和TIMP-1分泌。这些结果表明日本血吸虫不同时期的抗原影响人早孕期的滋养细胞功能,为加大疫区育龄妇女妊娠期间的监测提供新的线索。     

全国囊虫病、包虫病血清流行病学调查质量评价

目的　对全国囊虫病、包虫病血清流行病学调查质量进行评价。　方法　用相同试剂盒 ,按统一的操作规范 ,对各地检测出全部阳性血清和随机抽取的部分阴性血清进行复测 ,并采用符合率和Kappa统计量评价两次检测结果的一致性。　结果　囊虫病、包虫病两次检测结果阳性符合率分别为 5 8.5 4%和 91.12 % ,阴性符合率分别为 98.83 %和96.5 8% ,总符合率分别为 98.85 %和 97.47%。Kappa值分别为 0 .713 9和 0 .93 62。囊虫病二次检测重现性好 ,包虫病二次检测重现性极好。Kappa统计量分析回代结果一致性都具有极显著性意义 (P <0 .0 1)。　 结论　本次囊虫病和包虫病血清流行病学调查质量控制较为理想。     

环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究

目的 用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫.方法 提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA.根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的原理,设计4条隐孢子虫特异引物,利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以正常牛粪DNA为阴性对照.LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性,对LAMP产物进行电泳分析,观察其特征条带的情况.结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后时不再呈绿色,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色.隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物.结论 LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测牛粪中的隐孢子虫.