利用穿梭质粒快速构建含乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg …

目的 应用新型杆状病毒表达系统快速构建含有ＨＢｓＡｇ基因的重组杆状病毒，高效表达ＨＢｓＡｇ，为ＨＢＶ诊断试剂、疫苗及治疗研究提供依据。方法 构建含有ＨＢｓＡｇ基因的供体质粒ｐＦＢ－ＢＳ，转化Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达试剂盒中的ＤＨ１０Ｂａｃ致敏菌，利用其含有的细菌Ｔｎ７转座繁忙将ＨＢｓＡｇ基因重组至穿梭质粒Ｂａｃｍｉｄ上，快速筛选出含有ＨＢｓＡｇ基因的重组杆状病毒。结果 此重组病毒能在昆虫细     

戊型肝炎病毒新潜在中和性表位的发现

目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白是否存在除主要免疫优势中和表位aa459～606以外的其他中和表位.方法 通过对几株单克隆抗体及其表位的性质进行分析,对比位于主要免疫优势表位区aM59～606和位于该表位N端序列aa394～458区域的数个表位的中和活性.结果 发现位于aa423～437的表位对应的单抗具有潜在中和活性,不同于已知的HEV中和性表位(aa459～606),该表位是一个线性非免疫优势表位.结论 HEV ORF2 aa423～437为新的潜在的线性非免疫优势中和表位,该发现丰富了对HEV衣壳结构的认识,为HEV预防与治疗提供了新的针对靶点.     

江苏省农村散发性戊型肝炎流行病学特征分析

目的了解江苏省农村散发性戊型肝炎的流行病学特征。方法通过建立覆盖市、镇、村三级医疗卫生服务机构的疑似肝炎主动监测网络，系统全面地监测戊型肝炎病例的发病情况。结果主动监测网络的敏感性明显高于网络报告系统，能更加准确、全面地掌握戊肝的发病规律。结果显示戊型肝炎病例占疑似急性肝炎病例的26.7％，男性戊肝发病率高于女性（P〈0.01）；发病随着年龄增长而上升，多见35岁以上人群；全年均有发病，冬春季节较高；戊型肝炎病毒株HEV1、4型并存，但以HEV4型为主（92.5％）。结论疑似肝炎主动监测系统数据显示目前戊肝发病率有被低估的风险。     

热休克蛋白90与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白P239相互作用的初步研究

目的 对前期研究中所筛选出的能够与戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)重组衣壳蛋白颗粒P239存在特异性的相互作用的蛋白进行分析验证.方法 使用pull-down、MALDI-TOF-MS、免疫共沉淀技术及免疫荧光技术对与P239有潜在相互作用的蛋白进行鉴定和进一步分析.结果 MALDI-TOF-MS及免疫共沉淀技术,均表明该蛋白为热休克蛋白90(HSP90)并与P239相互作用.随后,对P239进入细胞的过程中胞内HSP90蛋白量及其分布的变化做了初步研究.发现虽然HSP90在蛋白总量上并没有发生明显的变化,但其定位却伴随着P239在胞内的迁移发生了由细胞膜向细胞核核周的转移.结论 HSP90可能参与了P239入胞后的转运并介导了HEV入胞后向效应细胞器的转运,为研究HEV的感染机制及对HEV的预防和控制提供了有益的线索.     

中国4株丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆与序列分析

从我国四川、广西、河南的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＡｇ）或抗体（ａｎｔｉ－ＨＤ）阳性的ＨＢｓＡｇ携带者中，筛选出４株ＨＤＶＲＮＡ阳性标本，经逆转录和聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，获得包含ＨＤＶ抗原编码区的ＣＤＮＡ片段，并对其进行克隆与序列测定。经计算机分析比较表明：四川、广西株与美国－１株同源性最高，分别为９９．３％、９９．０％；而河南－１、河南－２株与台湾株的同源性较高。分别为９４．３％、９２．１％，上述４株与日本－１、秘鲁－１的同源性在６６．１％－７７．８％之间。推导的ＨＤＡｇ的氨基酸序列的同源性为：四川、广西株与美国株分别为９９．５％、９６．４％；河南－１、河南－２株与台湾株分别为８９．７％、８９．３％，故我国至少存在基因型Ｉ型的两种亚型，其中四川、广西株为ＩＡ型；河南２株皆为ＩＢ型。同时，实验结果还证实了ＨＤＶ毒株的异质性呈地区分布特征。     

中国丁型肝炎病毒抗原编码区基因异质性与乙型肝炎 …

为了研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）的协同作用，阐明在我国不同地区与民族中ＨＤＶ感染率与ＨＢＶ亚型的关系，我们经筛选获得西藏、内蒙、河南、四川等地藏、蒙、汉族共８份血清，ＨＢｓＡｇ和ＨＤＶ ＲＮＡ皆为阳性。ＨＢｓＡｇ亚型经反相间接血凝法测定，经逆转录－聚合酶链反应获得ＨＤＶ的ｃＤＮＡ片段，将其克隆到载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ（－）或ｐＧＥＭ－Ｔ上，进行序列分析，确定其基因亚型。经比较研     

DNA免疫引起小鼠产生抗丙型肝炎病毒核壳区体液应答的初步研究

采用ｐｃＤＮＡ３与ｐＭＴ两种基因表达裁体，构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区（Ｃ区）或全结构基因区（核心区、包膜区）的质粒。经纯化后直接对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠进行骨骼肌或尾部皮内注射，２～６ｗ后采血，用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠抗核壳区的体液应答。结果表明：ＤＮＡ免疫可引起小鼠产生抗ＨＣＶ核壳区的体液应答，加强免疫２次后可使特异性抗体平均滴度达到１８００以上。提示ＤＮＡ免疫可作为丙型肝炎病毒感染的潜在防御手段。     

丙型肝炎病毒核壳蛋白在转基因小鼠中的表达及与Fas抗原关系的初步研究

将中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）分离株的５’－非编码区和结构基因（５ＵＴＲ＋Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２）区基因插入到ｐｃＤＮＡ３载体中构成表达质粒，通过显微注射法将此质粒注射入Ｆ１代杂交鼠（Ｃ５７ＢＬ／６ＸＩＣＲ）受精卵，并植入假孕母鼠输卵管中，经筛选获得整合有目的基因的转基因小鼠系。免疫组化研究表明，ＨＣＶ核壳蛋白在转基因小鼠各组织中皆有表达，多呈核型染色，心肌细胞中可见浆型。核壳蛋白在各组织中的表达水平；心＞肺＞肾＞肝，同时在转基因小鼠心、肾、肝中检出Ｆａｓ抗原的表达，其表达水平与核壳蛋白的表达呈正相关关系。提示ＨＣＶ核壳蛋白的表达可引起Ｆａｓ抗原的表达。     

4型戊型肝炎病毒重组衣壳研究及感染模型初探

目的 表达4型戊型肝炎病毒(HEV)开放式阅读框ORF2重组衣壳蛋白并初步建立用于4型HEV早期感染过程研究的细胞模型.方法 从猪胆汁中调取4型HEV ORF2的肽段(aa368-606)基因,并且利用大肠杆菌系统得到重组D66蛋白.结果 重组D66蛋白在水相中以二聚体为基本单位自组装成分子半径约为13 nm的颗粒.该颗粒与HEV感染的急性期、恢复期患者的血清均有较强的反应性.将D66颗粒与细胞共孵育,发现该颗粒可以与肝实质细胞系HepG2的细胞结合并进入细胞内,这种结合可被恢复期及急性期HEV患者血清所阻断.结论 这些结果表明重组D66蛋白颗粒,可以一定程度上模拟4型HEV的表面位点,并且可以特异性吸附并进入细胞,为进一步研究4型HEV感染的分子机制提供基础和平台.