IL-27基因多态性及血清水平与艾滋病相关性研究

目的探讨白细胞介素-27(IL-27)基因多态性与艾滋病易感性的关系。方法选取艾滋病患者和健康对照者各100例作为研究对象,运用多重单碱基延伸(SNaPshot SNP)技术检测IL-27基因rs17855750、rs181206、rs40837单核苷酸多态性,用SHEsis软件分析IL-27基因的连锁不平衡及单倍型频率,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-27血清水平,用X~2检验和t检验进行统计学分析。结果艾滋病组和对照组IL-27基因rs17855750、rs181206、rs40837的基因型和等位基因的分布频率差异均无统计学意义(P0.05)。对照组和艾滋病组的单倍型分布频率提示,rs17855750、rs18126、rs40837这三个位点的AAG单倍型是艾滋病的一个保护因子[比值比(OR)=0.572,95%可信区间(CI):0.330~0.990,P0.05]。携带rs181206A等位基因的艾滋病患者,其血清IL-27水平低于不携带者(P0.05)。结论 AAG单倍型可降低艾滋病的易感性,rs181206A等位基因携带可能与艾滋病危险性有关。     

蛇毒神经生长因子对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及肝纤维化相关蛋白质表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质表达差异的影响,进一步为蛇毒NGF抗肝纤维化提供依据。方法实验分为对照组(单纯HSC-T6培养)和实验组(NGF进行干预)。应用MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响;双向电泳技术观察HSC-T6细胞蛋白质表达变化;质谱鉴定差异表达的蛋白。结果 MTT结果显示NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(5 mg.L-1NGF时抑制率为48.2%±1.9%,P<0.01);流式细胞仪也有同样的发现,NGF(5 mg.L-1)干预组的凋亡率21.15%±3.31%明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05);比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中与对照组相比在NGF作用组表达上调22个,下调25个;质谱鉴定出9个蛋白质,其中4个表达上调,5个表达下调。结论蛇毒NGF能抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖,诱导其凋亡,并且影响HSC-T6细胞蛋白质的表达。     

基于iTRAQ技术分析联合用药作用大鼠肝星状细胞后差异表达的蛋白

目的 筛选联合用药作用大鼠肝星状细胞(HSC-T6)后差异表达的蛋白质,以探讨联合用药抑制肝星状细胞增殖的机制。方法 以牛磺酸、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和三羟基异黄酮三者组成的联合用药作用HSC-T6后,提取细胞总蛋白,运用同位素标记的iTRAQ技术结合高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)的定量蛋白质组学方法,分析和鉴定差异表达的蛋白质,运用生物信息学分析差异表达的蛋白质功能。结果 质谱共分析鉴定到727种蛋白质。3次实验分别鉴定到的差异表达蛋白质数量分别为85,102,94个,在3次重复均鉴定到的差异表达蛋白为52个,其中上调蛋白24个,下调蛋白28个。生物信息学分析表明,差异表达的蛋白参与翻译后修饰、转录、重组和信号传导等过程,在这些蛋白质中既有与肝纤维化发生、发展直接相关的蛋白质如基质金属蛋白酶抑制剂1、层黏连蛋白、前纤维蛋白2等,也有在蛋白质的相互作用中处于功能网络交叉点的蛋白质如细胞周期素依赖性激酶4、肝癌衍生生长因子、谷氨酸脱氢酶 1和丝氨酸/精氨酸剪接因子9等。结论 联合用药抑制肝星状细胞增殖的作用,可能是通过调控多种蛋白质的表达来实现,所获得的差异表达蛋白可能在肝纤维化发生发展和药物抗肝纤维化作用过程中扮演重要角色。     

可口革囊星虫多糖的提取及含量测定

目的建立可口革囊星虫中多糖的提取及其含量测定方法。方法用水提法提取可口革囊星虫多糖,用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,检测波长为490 nm。结果葡萄糖进样质量浓度在10.0～70.7μg/mL范围内与吸光度线性关系良好,r=0.998 8;可口革囊星虫中多糖含量为15.85%,方法平均回收率为94.61%,RSD=1.87%(n=6)。结论所建立的方法简便、准确、重现性好,可用于可口革囊星虫多糖含量的测定。     

姜黄素通过抑制HDGF/β-catenin复合物降低胶质瘤细胞的侵袭性

目的探讨姜黄素对胶质瘤细胞的侵袭、迁徙能力的影响及相关机制。方法四甲基偶氮唑蓝实验筛选合适的姜黄素药物 浓度;Transwell小室、Boyden小室及划痕实验检测姜黄素对胶质瘤细胞侵袭、迁移能力的影响;蛋白免疫印迹实验和蛋白质免 疫共沉淀实验检测相关蛋白质表达水平变化及相关蛋白质之间相互作用。结果终浓度为20 μmol/L的姜黄素培养基培养48 h 作为实验组处理因素;姜黄素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力（P<0.05）;机制分析显示,与空白对照组相比,姜黄素处 理组HDGF、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug蛋白表达水平下降,E-cadherin蛋白表达水平升高;在姜黄素处理过的胶质瘤细胞 中干扰和过表达HDGF可分别协同抑制和逆转上皮细胞-间充质转化(EMT)信号;姜黄素可以明显降低HDGF与β-catenin的结 合量。结论姜黄素通过抑制HDGF/β-catenin复合物,降低了EMT信号,从而抑制了胶质瘤细胞侵袭、迁移能力。     

lncRNA RP5-940J5.9表达水平与肝细胞癌患者预后相关性研究

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP5-940J5.9在肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR检测lncRNA RP5-940J5.9在肿瘤组织中的表达水平;采用卡方检验分析lncRNA RP5-940J5.9表达与肝癌临床生理病理特征的关系;采用kapl...     

HIV感染不同疾病进程IL-27和T淋巴细胞亚群的检测

目的通过检测HIV感染者不同疾病进程IL-27水平、T淋巴细胞亚群,探讨它们之间的关系,寻找疾病进程IL-27、CD4~+T和CD8~+T细胞的变化规律。方法选取HIV感染者100例作为研究对象,其中长期不进展者(LTNP)16例,疾病典型进展者(TP)84例。采用酶联免疫吸附试验测定IL-27血清水平,用流式细胞仪对CD4~+T和CD8~+T细胞进行计数,并计算CD4~+T和CD8~+T的比值。80例健康者作为对照组。结果 TP组和LTNP组的IL-27水平、CD4~+T淋巴细胞数、CD4~+T/CD8~+T比值均明显低于健康组(P均0.01),与LTNP组相比,TP组的IL-27水平、CD4~+T淋巴细胞数、CD4~+T/CD8~+T比值均明显降低(P均0.01)。LTNP组CD8~+T淋巴细胞数均明显高于健康组和TP组(P均0.01),而健康组和TP组相比,差异无统计学意义(P0.05)。IL-27与CD4~+T和CD8~+T均呈正相关(r=0.709,0.427;P均0.01)。结论 IL-27、CD4~+T和CD8~+T细胞能反映HIV感染者免疫受损状况和疾病进展情况,IL-27有望成为新的靶点分子与CD4~+T和CD8~+T共同作为HIV感染和疾病进程的监测指标。     

mir-3168靶向抑制TP53促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞恶性转化与顺铂耐药

目的：探讨mir-3168对AGS与AGS/DDP胃癌细胞恶性转化与顺铂耐药影响，并验证其靶基因。方法：qPCR检测胃癌顺铂敏感细胞AGS与胃癌顺铂耐药细胞AGS/DDP细胞中mir-3168表达，合成mir-3168 mimic、inhibitor与阴性对照，分别转染AGS与AGS/DDP胃癌细胞，qPCR检测mir-3168与TP53mRNA表达，梯度浓度顺铂处理与非处理下采用CCK8检测细胞活力，流式检测细胞凋亡，Transwell检测细胞侵袭，Western blot检测TP53蛋白表达，数据库预测mir-3168与TP53结合位点，根据结合位点采用双荧光素酶实验验证mir-3168与TP53结合。结果：相对胃癌顺铂敏感细胞AGS,mir-3168在胃癌顺铂耐药细胞AGS/DDP细胞中的表达水平明显提高；mir-3168 mimic促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞顺铂抵抗、增殖与侵袭，抑制AGS与AGS/DDP胃癌细胞凋亡；mir-3168 inhibitor抑制AGS与AGS/DDP胃癌细胞顺铂抵抗、增殖与侵袭，促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞凋亡；mir-3168 mi...     

经HIV包膜蛋白gp120刺激的T细胞外泌体促进巨噬细胞M2极化

目的：本研究旨在探讨经HIV膜蛋白gp120处理后人T淋巴细胞系（H9）外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测gp120处理后人T淋巴细胞H9活力；采用ELISA法检测H9细胞上清液中炎症因子水平；通过电镜和Western blot实验鉴定外泌体特征；PHK67染色观察外泌体进入巨噬细胞情况；最后通过ELISA和免疫荧光检测巨噬细胞极化标记物，分析gp120处理后T细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响。结果：HIV gp120蛋白抑制人T淋巴细胞H9增殖并促进炎症因子释放。成功提取人T淋巴细胞H9外泌体，电镜下为中间凹陷的膜结构，高表达标记蛋白CD9、CD63、CD81。PHK67染色结果显示H9细胞外泌体可进入巨噬细胞。经gp120处理的H9细胞外泌体可促进巨噬细胞向M2型极化。结论：HIV膜蛋白gp120处理人T淋巴细胞H9分泌的外泌体能够促进巨噬细胞M2极化，可能是gp120在免疫调节中的新机制。     

广西壮族人群白细胞介素-27基因rs17855750G/T、rs40837A/G多态性分布特点

目的 分析广西壮族人群白细胞介素(IL)-27基因rs17855750 G/T、rs40837 A/G多态性分布特点,对比其基因型和等位基因频率与不同国家(地区)间种族的分布差异.方法 采用单碱基延伸的PCR技术对168例广西壮族人群IL-27基因rs17855750 G/T、rs40837 A/G进行多态性检测,对比国际人类基因组计划(HapMap)公布的中国北京人、日本人、非洲人和意大利人的单核苷酸多态性(SNP)分型数据,分析5个人群rs17855750 G/T、rs40837 A/G位点的基因型和等位基因频率差异.结果 在广西壮族人群中IL-27基因rs17855750 G/T位点TT基因型最常见,约为70.2％,T等位基因频率最高,约为50.3％,rs40837 A/G多态性位点AA基因型最常见,约为35.7％,A等位基因频率最高,约为52.1％,IL-27基因rs17855750 G/T、rs40837 A/G多态性位点基因型及等位基因频率男女性别间比较差异无统计学意义(P＞0.05),IL-27 rs17855750 G/T与北京人比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与日本人、意大利人和非洲人比较差异有统计学意义(P＜0.01);IL-27 rs40837 A/G与北京人比较差异有统计学意义(P＜0.05),且与日本人、非洲人和意大利人比较差异也有统计学意义(P＜0.01).结论 IL-27基因rs17855750 G/T、IL-27 rs40837 A/G位点基因型和等位基因在广西壮族人群中的分布频率与其他国家(地区)人群相比存在差异,这种差异可能是导致某些疾病在不同人群发病率和临床表现存在差异的原因之一.