乙型肝炎病毒准种研究的临床意义

0引言乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急性?慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化?肝细胞癌(HCC)的发生和发展密切相关[1].不同的HBV感染患者体内的HBV基因序列是不同的,也得到了人们的广泛的重视,这就是HBV不同的基因型(genotype)和血清型(serotyp e)[2].但是,针对HBV感染特定的患者来说,虽然个体病毒基因突变的研究得到了重视,但体内不同的HBV拷贝之间基因序列的关系究竟如何,多少年来相对受到忽视.研究表明,HBV感染个体的体内HBV不同病毒基因序列在统计学上高度一致,基因序列的同源性高达95%以上,但每株病毒的基因序列都不相同,这种…     

促肝细胞生长素治疗重型肝炎及慢性重度肝炎的临床研究

促肝细胞生长素是一种多肽物质,是临床治疗重型肝炎的有效新药,动物试验证实对实验性小鼠的肝损伤有保护肝细胞功能的作用[1].亦可用于治疗慢性病毒性肝炎[2,3],为进一步观察促肝细胞生长素的有效性及安全性,1999年11月至2000年12月全国42家医院进行了多中心的临床验证,现总结如下.     

磺酸左氧氟沙星对细胞内HBV S区及C区HBV RNA的影响

目的 研究磺酸左氧氟沙星对2．2．15细胞内HBVS区级C区的HBVRNA的影响。方法 用荧光PCR定量法分别检测细胞内HBVDNA、HBVS区有C区的HBVRNA含量；并用固相放射免疫法测细胞上清HBsAg、HBeAg的P／N值。结果 2．2．15细胞内HBVS区S区及C区的HBVRNA含量分别为0．4pg/ml和0．27pg/ml，细胞上清HBsAg及HBsAg及HBeAg分别为42．1和36．0。磺酸左氧氟沙星作用8天后，HBVRNA含量分别下降为0．2pg/ml和0．13pg/ml分别为85．7％有55．6％（P＜0．05），用药前2．2．15细胞内HBVDNA为2．97pg/ml，用药后降至0．44pg/ml（P＜0．05），抑制率为85．2％。结论 磺酸左氧氟沙星抗HBV的作用可能是通过影响HBV3．5kb及2．1kbRNA的稳定性及翻译表达来实现。     

乙型肝炎病毒囊膜中蛋白与白细胞介素18联合基因免疫的实验研究

构建ＨＢＶ囊膜中蛋白核酸疫苗表达载体并免疫小鼠 ,观察白细胞介素 18对基因免疫的辅助作用。构建质粒ｐＶＲ10 12 Ｍ、ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18,肌注法免疫 2 5只Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,3组小鼠分别注射 10 0 μｇｐＶＲ10 12 ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ和ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18质粒 ,每 2周 1次 ,共 3次。每次免疫 2周后眼眶采血 ,检测血清抗 ＨＢｓ ,第 3次免疫后 2周应用乳酸脱氢酶检测法验证特异性细胞杀伤率。结果表明 ,经注射上述质粒后 ,可观察到注射ｐＶＲ10 12 Ｍ组的小鼠随免疫次数的增加 ,抗 ＨＢｓ阳性…     

CCR5反义RNA重组表达载体的构建及鉴定

目的构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体以用于抗HIV-1的研究.方法用RT-PCR从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段,用基因重组技术将此目的基因以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.用PCR、内切酶分析及序列测定鉴定.重组载体用脂质体转染剂(lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,建立稳定表达重组假病毒颗粒的包装细胞系.结果从正常人PBMCs中获得的目的基因成功地构建了CCR5反义RNA重组表达载体,重组载体已在PA317细胞中得到整合.结论构建的CCR5正、反义RNA表达载体可有效地感染PA317细胞并在基因组中整合,为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1的作用奠定了基础.     

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

近年来的研究提出ＨＢＶ感染者体内存在有准种的假说 ,我们以前Ｃ/Ｃ基因为研究靶区域 ,应用多聚酶链反应(ＰＣＲ)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶序列 ,随机选择克隆测序 ,比较其结果 ,证明了ＨＢＶ准种的存在 ,并发现多种基因突变形式。试验用 4例患者诊断为病毒性肝炎 ,乙型、慢性 ,临床检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性。提取 2 0 0 μｌ血清中的ＨＢＶＤＮＡ ,用于多聚酶链反应 (ＰＣＲ)。以甘人宝等发表的ＨＢＶａｄｒ亚型序列为依据 ,设计引物序列。其上游引物为 :5′ＡＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＴＧＣＡＡＣＴＴＴＴ…     

趋化因子受体CCR5反义RNA在真核细胞中的表达

目的 构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究，方法 用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞（PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段，并以正、反两个方面定向插入到真核表达载体pLXSN上，重组载体用脂质体转染剂（lipofectAMINE)转染PA317包装细胞，抗-G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR（FQ-PCR）测定假病毒滴度，进一步感染NIH/3T3细胞。结果 CCR5正、反义RNA的真核表达载体。经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/3T3细胞，目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 从PBMCs中获得的趋化因子受体CCR5基因片段通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达，为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础。     

逆转录病毒载体介导乙型肝炎病毒反义基因的转录表达

为了探索在真核细胞内转录表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）反义核酸的方法，用基因重组技术将ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因（ＰｒｅＣ／Ｃ）和前Ｓ／Ｓ基因（ＰｒｅＳ／Ｓ）片段反向插入逆转录病毒载体质粒，再将重组体分别转染ＰＡ３１７包装细胞，进而获得能够介导ＨＢＶ反义基因向小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞转移表达的重组逆转录病毒。经分子杂交试验表明，含有ＨＢＶ反义基因的重组逆转录病毒序列已经整合到转染的ＰＡ３１７细胞染色体上；转导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞内有ＨＢＶ反义ＲＮＡ转录表达。结论：逆转录病毒载体包装细胞系统能够介导ＨＢＶ反义基因在真核细胞中转录表达，因而有可能利用反义技术和基因转移方法进行抗－ＨＢＶ基因治疗     

HBsAg中蛋白与IL-18联合核酸免疫HBsAg转基因小鼠的实验研究

对乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)转基因小鼠鼠系所进行的ＨＢＶ核酸疫苗免疫转基因小鼠的实验研究〔1,2〕 提示核酸疫苗有治疗潜力。本研究的目的是研究在白细胞介素 18(ＩＬ 18)的辅助作用下 ,ＨＢＶ表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫ＨＢｓＡｇ转基因小鼠的效果。材料与方法质粒构建 :引物设计 :上游引物 :5′ ＧＴＡＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＴＣＣ 3′ ;下游引物 :5′ ＧＴＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＣＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧ 3′。ＰＣＲ法扩增ＨＢｓＡｇ中蛋白基因序列 ,将ＰＣＲ产物亚克隆至ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体 (Ｐｒ…