旱獭葡萄膜炎病例调查

我所1935年由内蒙海拉尔引进蒙古旱獭(MarmotaSibirica Radde)70只,做为乙型肝炎动物模型。除实验利用及病亡外,现剩41只。1989年1月发现有31只发生眼内葡萄膜炎。一、检查方法及发病率;1989年3月20日至4月13日,对这批旱獭进行系统的眼科检查,包括眼外常规检查、眼底检查及裂隙灯眼前段及玻璃体检查。     

抑制HIF-1α表达的siRNA序列长效shRNA抑制载体的构建

目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体.方法:依据NCBI数据库获得HIF-1α mR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rational siRNA...     

靶向survivin基因小干扰RNA设计及鉴定

目的:利用生物信息学技术预测设计特异抑制survivin蛋白表达的siRNA序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70,并观察对survivin蛋白表达的沉默效果。方法:依据NCBI数据库获得的survivin mRNA序列,利用Whitehouse,Sidirect和Rational SiRNA Design软件预测设计siRNA干扰序列,并利用BLAST分析干扰序列与人类全基因组的同源性;转染食管癌细胞KYSE-70,Western blot法鉴定蛋白表达。结果:初步预测出3条含21个核苷酸的survivin干扰序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70后survivin蛋白表达明显下降。结论:运用生物信息学技术可快速便捷预测出抑制survivin表达的siRNA序列,为研究survivin在食管癌发生发展中的作用奠定了基础。     

凋亡相关基因p53，Fas蛋白在早期食管癌及癌前病变中的表达与PDT疗效的关系

目的:探讨凋亡相关基因p53,Fas蛋白在早期食管癌及癌前病变中的表达与PDT疗效的关系。方法:采用免疫组织化学法检测30例PDT治疗前后的早期食管癌及51例癌前病变中凋亡相关p53和Fas蛋白的表达,并分析与PDT疗效的关系。结果:p53蛋白表达与PDT早期食管癌疗效无相关性(P>0·05),p53     

实验大,小鼠中淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒抗体调查

用酶联免疫吸附试验技术（ＥＬＩＳＡ），分别对河南医科大学实验动物中心开放饲养的昆明小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ小鼠、ＮＩＨ小鼠、Ｃ５７ＢＬ小鼠、ＤＢＡ小鼠以及Ｗｉｓｔａｒ大鼠、ＳＤ大鼠共７个品系的实验动物进行了淋巴细胞性脉络脑膜炎病毒（ＬＣＭＶ）抗体的检测。７０只被检动物血清中ＬＣＭＶ抗体均为阴性。结果证实，该中心所饲养的七个品系的实验大、小鼠均未受到ＬＣＭ病毒的感染。     

生存研究样本量设计表及其使用方法

目的 :本文就两样本生存研究所需样本量用广义渐近正态法设计出 15 30个方案 ,制成设计表供临床使用。方法 :利用C语言编制程序 ,按通用格式打印设计表。结果 :常用方案查表可得。这些与两样本生存率检验相匹配 ,具有还原性 ,摆脱了比例危险的假设 ,在常见临床条件下观测功效符合预定功效。结论 :这些设计表适用于两样本癌症临床研究的设计 ,尤其便于临床医师或有关研究人员使用     

光敏剂PpIX亚细胞分布方式对食管癌细胞光动力学效应的影响

目的: 探讨不同来源的光敏剂PpIX在食管癌细胞中的亚细胞分布与光动力学效应的关系.方法: KYSE-450、KYSE-70和Het-1A细胞分别用ALA和外源性PpIX以及MitoTrackerGreen处理, 相差荧光显微镜观察不同来源的PpIX在细胞内的定位. 利用JC-1-流式细胞方法检测ALA-PDT和PpIX-PDT后细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的改变. 利用电镜观察ALAPDT和PpIX-PDT后细胞线粒体的超微结构,观察PpIX的不同细胞分布形式对线粒体损伤的形态学改变. MTS法测定PDT处理后的细胞存活率.结果: 由ALA产生的内源性光敏剂PpIX荧光主要分布在线粒体, 与MitoTracker Green显示的线粒体荧光分布在相同的区域, 而外源性PpIX荧光信号则弥漫性分布于整个细胞质.KYSE-450、KYSE-70和Het-1A细胞经ALAPDT12 h后, 膜电位受损细胞分别达到22%、52%和33%, 而外源性PpIX-PDT别12 h后线粒体受损细胞率仅分别为15%、14%和18%. 电镜观察结果显示, ALA-PDT后仅1 h一些线粒体即已出现受损状态, 可见线粒体内嵴不明显, 出现空泡和膨胀. 但外源性PpIX-PDT后1h细胞内大部分线粒体仍保持完整结构. ALAPDT的细胞杀伤效果明显好于外源性PpIXPDT.结论: 光敏剂的不同亚细胞定位影响了食管癌细胞PDT的功效, PDT造成的线粒体的损伤在肿瘤细胞杀伤过程中起非常重要的作用, 提示以线粒体为靶点的光敏剂是未来光敏剂研制的重点.     

稳定转染pEGFP-4.1 N乳癌细胞系的筛选与鉴定

目的:建立真核表达载体pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌MDA-MB-231细胞系,观察4.1N在MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法:真核表达载体pEGFP-4.1N转化到大肠杆菌中进行扩增,酶切鉴定插入片段后进行测序.脂质体法将重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,经G418筛选抗性克隆,利用倒置荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的定位,并用Western blot检测融合蛋白的表达.结果:真核表达载体pEGFP-4.1N的酶切片段经琼脂糖电泳和测序鉴定结果正确.G418筛选14 d后获得pEGFP-4.1 N稳定转染的MDA-MB-231抗性克隆.荧光显微镜下观察到融合蛋白在MDA-MB-231阳性克隆的细胞质中表达.核内不表达.Western blot亦检测到4.1N融合蛋白的表达.结论:成功建立了pEGFP-4.1N稳定转染的乳痛细胞系MDA-MB-231阳性克隆.     

蛋白4.1家族在不同乳腺癌细胞株中的表达与定位

背景与目的:目前,已在多种人类肿瘤中发现蛋白4.1家族成员表达异常.本研究旨在通过检测蛋白4.1家族成员(4.1R/B/G/N)在3株转移能力不同的人乳腺癌细胞株MCF-7、T-47D和MDA-MB-231中的表达和定位,探讨蛋白4.1家族成员与乳腺癌细胞转移能力之间的关系.方法:采用Western blot检测蛋白4.1家族成员在MCF-7、T-47D和MDA-MB-231细胞中的表达;免疫荧光标记对蛋白4.1家族成员在3株细胞中的表达进行定位.结果:4.1R/B/G在3种细胞系中均有表达,在T-47D细胞中的表达量均明显高于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.05):但在高转移性的MDA-MB-231细胞中它们的表达水平转而下降.4.1N在T-47D细胞中的表达量明显低于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.01),而在MDA-MB-231细胞中的表达则几乎检测不到,提示4.1N表达下调或缺失与乳腺癌细胞转移能力密切相关.4.1R/B/G/N在MCF-7和T-47D细胞中均主要定位于细胞膜及胞间连接处,同时4.1B在细胞核中也有表达;而在高转移的MDA-MB-231细胞中蛋白4.1家族成员均定位于细胞质中,提示蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变可能是乳腺癌细胞转移过程中的重要事件.结论:4.1N表达缺失和蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变与乳腺癌细胞MDA-MB-231的高转移性密切相关.     

HIF-1α在食管上皮细胞中的诱导表达及对光动力疗法的影响

目的:探讨食管上皮Het1A细胞经诱导表达HIF1α后对光动力学效应的影响。方法:HIF1α的稳定高表达采用氯化钴(CoCl2)化学诱导法,并应用光敏剂5ALA处理细胞,光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)光照射采用波长>600nm的红光光源,细胞存活活性以MTS法测定,应用Westernblot测定HIF1α蛋白质水平,RNA干扰采用脂质体转染法,并利用TdT流式细胞法测定细胞凋亡率。结果:Het1A细胞经100μmol/L的CoCl2孵育4h后可诱导HIF1α蛋白的高表达;PDT后高表达HIF1α的细胞具有较高的细胞存活活性,且细胞凋亡率由未诱导时的16%降低至4%;不同浓度CoCl2诱导的HIF1α蛋白质水平与PDT后细胞存活活性相一致;siRNA转染阻断HIF1α的诱导表达,细胞又恢复了对PDT的应答能力。结论:HIF1α在Het1A细胞中的高表达使PDT效果下降;HIF1α部分通过抑制PDT引起的细胞凋亡而抵御PDT效应。提示HIF1α可作为治疗靶基因,降低肿瘤组织HIF1α表达水平可能有助于改善PDT临床疗效。