真皮间充质干细胞生物学特性研究进展

1 前言 干细胞是具有高度增殖和自我更新能力,并可分化为多种不同靶细胞的细胞.在个体发育的过程中,干细胞经历了从全能干细胞(胚胎干细胞)到多能干细胞再到定向干细胞,最终分化为不同的成熟组织细胞的演变过程.近来,各个阶段干细胞的研究均取得了重要的进展.     

定向诱导的骨髓基质细胞移植后在大鼠缺血脑组织中的分布

目的探讨人骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）源神经细胞体内移植后的分布状况。方法采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离、纯化人MSCs。MSCs经bFGF预诱导24h及阿魏酸钠（Sodium Ferulate）诱导24h后用于移植。采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型．缺血2h后行再灌注，24h后经栓塞侧颈内动脉注入诱导后的MSCs（5×10^6/0．8ml）（n=61。2w后取脑组织行冰冻切片．通过检测人细胞核特异抗体MAB1281来鉴定移植的人MSCs。结果MSCs经阿魏酸钠诱导后．细胞逐渐圆缩并伸出突触．呈现神经细胞样形态。在移植大鼠脑内可检测到MAB1281呈阳性表达的人MSCs．且MSCs主要分布在缺血侧损伤灶的周围，明显高于对侧同部位及其它脑区。结论人MSCs源神经细胞移植后在大鼠脑内存活并主要聚集在脑内缺血灶的周围。     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化(英文)

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞(Mφ),细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P<0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P>0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P<0.05。②随着LPS浓度增加,...     

大胚龄人神经干细胞长期冻存后的复苏培养

目的探讨长期冻存后的大胚龄人胚神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的生长及其生物学特性。方法分别于冻存后6、12及24个月,快速解冻复苏胚龄为16～20周的胎脑细胞,采用无血清培养液悬浮培养,观察培养细胞的活性及成球时间,采用免疫细胞化学方法鉴定这些细胞球及其分化成熟后的细胞表面标志。结果培养传代的细胞透亮﹑成球时间短,与取自新鲜胎脑的神经干细胞无明显区别。细胞球Nestin染色阳性,成熟分化后神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及2＇,3＇-环腺苷酸-3＇-磷酸二酯酶（CNPase）抗原呈阳性。结论长期冻存后的人大胚龄神经干细胞仍具有较强增殖能力及多分化潜能。     

稀土化合物氯化镧影响神经干细胞增殖的探讨

目的初步探讨稀土化合物氯化镧（Lanthanum chloride，LaCl3）对体外培养的NSCs增殖状况的影响。方法采用成球悬浮法分离培养小鼠神经干细胞（mNSCs）；将生长状态良好的第3代mNSCs分为空白对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）组、LaCl3组，分别采用常规NSCs培养液、含10ng／ml TNF-α的NSCs培养液、含2.5μmol／L LaCl3的NSCs培养液培养NSCs 1-3天。采用神经球计数、神经球体积测量方法以及采用免疫荧光细胞化学方法检测与细胞增殖相关的指标（CyclinD1）来观察NSCs的增殖状况。结果神经球计数和神经球体积测量结果显示，TNF-α组和LaCl3组神经球数量分别为[（74.56&#177;2.6）个／瓶]和[（62.32&#177;2.8）个／瓶]，较空白对照组[（42.28&#177;3.5）个／瓶]明显增多，P〈0.05；神经球体积分别为[（0.82&#177;0.16）&#215;10^6（μm^3）]和[（0.66&#177;0.12）&#215;10^6（μm^3）]，较对照组[（0.26&#177;0.0.08）&#215;10^6（μm^3）]明显增大，P〈0.05。免疫细胞荧光检测细胞增殖结果显示，TNF-α组和LaCl3组中，Cyclin D1阳性细胞率分别为（68.6&#177;4.2）％和（51.2&#177;2.8）％，明显高于空白对照组的（35.6&#177;2.6）％，P〈0.01。结论一定浓度的Lacl3具有促进NSCs增殖的作用。     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用

背景：骨髓细胞移植是一种简单而有效的促进新生血管生长的治疗手段。同样新生血管的形成和血液循环的再建立，对于脑缺血区域受损而未死亡神经元的修复以及为植入的组织与细胞的成活和分化提供必要的环境条件均具有重要意义。而自体骨髓细胞移植是否会促进脑缺血区新生血管的形成进行血运重建目前尚不清楚。目的：探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响。设计：以实验动物为研究对象，随机对照的验证性研究。单位：一所大学医院的神经外科和泌尿外科研究所。材料：实验于2002-09／2003-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室，江西医学院泌尿外科研究所完成。选择雄性SD大鼠10只，体质量250～300g，清洁级。干预：复制局灶性脑缺血大鼠模型，经颈动脉注入自体骨髓细胞。动物随机分为实验组5只，经颈动脉注入自体骨髓细胞，对照组5只注入生理盐水。通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数。观察脑缺血区血管增生状况。主要观察指标：微血管密度。F8因子免疫组化染色。结果：自体骨髓细胞移植后大鼠在皮质缺血区的微血管密度为(159．15&;#177;40．4)血管数／mm^2，明显较对照组大鼠(81．70&;#177;32．18)血管数／mm^2多，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。骨髓细胞移植组皮质缺血区可见很多散在的单个内皮细胞。而相应的脑缺血对照组少见散在的单个内皮细胞。结论：经颈动脉注入的自体骨髓细胞能够促进脑缺血区新生血管的形成。     

小鼠胚胎干细胞在胎肾微环境中共培养后表达肾标志物

胚胎干（ES）细胞是一种多潜能细胞具有分化成为来自三个胚层各种细胞甚至包括生殖细胞的能力。最新的研究表明，胚胎于细胞在与胚胎脏器细胞共培养后可以定向分化为多种特定细胞表型，他们包括肝细胞、心肌细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞．并在某些情况下甚至可能形成成熟的器官组织结构。已有研究报道说明ES细胞通过在体外环境中直接形成拟胚体（EBs）可以分化成为肾细胞．并且最新的研究成果表明分离自这些EBs的细胞移植入体内后可以形成肾近端小管样结构并且未在其周同发现畸胎瘤形成。但是ES细胞是否可以通过和胎肾细胞相互作用继而获得定向分化并未见诸报道。在实验中我们发现．在与小鼠胎肾细胞共培养后．ES细胞分化成为了肾系细胞。处理后的ES细胞可以检测到与肾发育相关的特征基因．如WT-1、exm-2和Wnt-4基因的表达．我们也发现了终末分化的肾细胞标志物．如podocalyxin、Nephl和RSOR基因的表达。在实验前后，我们同样探寻了ES细胞多分化潜能标记分子的基因表达情况，结果显示共培养后分化的ES细胞Oct-4、Nanog和Klf-4基因表达明显减弱。综上，胎肾细胞微环境可能促使ES细胞定向分化为肾系细胞，提示胚胎器官细胞微环境在ES细胞转分化过程中可能扮演了重要作用。     

前列腺癌细胞的原代和传代培养的研究

目的探讨前列腺癌细胞的培养方法,以便建立前列腺癌细胞系,为前列腺癌的基础研究提供实验模型.方法前列腺腺癌组织来源于我院两例患者的手术标本,分别采用组织块培养法、消化培养法和裸鼠肿瘤移植动物模型法对癌组织细胞进行体外分离培养.培养细胞按恶性肿瘤连续细胞系建系标准进行各项指标检测.结果组织块培养法有一例已稳定传为13代,消化培养法有一例已稳定传为23代,裸鼠肿瘤移植动物模型法未见癌肿生长.结论组织块培养法和消化培养法均为前列腺癌细胞培养的可行方法.