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目的:通过毕赤酵母(Pichia pastoris)表达制备重组人凝血酶原2(prothrombin-2),并利用锯鳞蝰(Echis carinatus)凝血酶原激活剂ecarin将其活化为凝血酶,分析凝血酶的活性。方法根据GenBank公布的人凝血酶原2和ecarin的cDNA序列,设计并优化合成凝血酶原2和ecarin基因。将凝血酶原2基因构建至表达载体pPICZαA中,转化并筛选重组凝血酶原2的糖基工程酵母菌,诱导工程酵母分泌表达凝血酶原2,培养上清中的目的蛋白经两步阳离子层析纯化制备,并利用酶切N-糖链和肽指纹图谱分析鉴定目的蛋白。将ecarin基因构建到表达载体pcDNA3.1(+),瞬转HEK 293T细胞,收集培养上清。将HEK 293T工程细胞培养上清与纯化的凝血酶原2反应,利用凝血酶发色底物S-2238,测反应产物的酶促活性;利用血浆纤维蛋白原测反应产物的血凝时间、分析血凝活性。结果酵母表达凝血酶原2的培养上清经纯化获得37×103的目的蛋白,去除N-糖链的蛋白相对分子质量降为35×103,与凝血酶原2理论分子量一致。经肽指纹图谱鉴定,纯化得到的蛋白为凝血酶原2。制备的凝血酶原2经HEK 293T细胞表达ecarin的培养上清处理后,可催化S-2238解离产生黄色的对硝基苯胺(pNA),且pNA产生的光密度值随着处理的凝血酶原2的增加而升高;经ecarin处理的凝血酶原2能促进血浆凝结,与凝血酶试剂的血凝时间接近,且血凝时间随着处理的凝血酶原2的量减少而延长。结论利用毕赤酵母制备了重组人凝血酶原2,被ecarin活化为具有活性的凝血酶,有望替代从血浆中提取的凝血酶原,用于战伤救治和临床研究。 相似文献
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目的用纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重组蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价,间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性,以初步评价其应用价值。方法通过SDS-PAGE确定ClpP1重组蛋白的主要表达形式,利用纯化包涵体方式对重组蛋白进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价;再分别以纯化蛋白为抗原,制备抗体为一抗,间接ELISA法检测临床诊断结核病患者血清中抗M.tb抗体和M.tb抗原。结果 SDSPAGE显示ClpP1重组蛋白主要以包涵体表达形式存在,将纯化蛋白免疫新西兰白兔4次,取血测抗体效价为1∶64 000;Western blot结果显示制备抗体可较好的与ClpP1蛋白特异性结合;间接ELISA法结果表明,以重组蛋白为抗原测患者血清中抗M.tb抗体和以制备抗体为一抗测血清中的M.tb抗原的2实验组分别与对照组相比均具有显著性差异。结论制备了具有免疫原性的M.tb ClpP1重组蛋白及效价较高的多克隆抗体,并得出ClpP1多克隆抗体具有较好的免疫反应性,为进一步研究ClpP1重组蛋白的特性及其应用奠定了基础。 相似文献
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目的 研究TIA患者DWI阳性病灶的意义,对发病后首次DWI检查阳性的TIA患者复查MRI或CT,比较病灶恢复与未恢复患者DWI阳性病灶的表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)、相对表观弥散系数(relative apparent diffusion coefficient,rADC),作为鉴别TIA和脑梗死的依据.方法 选择2009年8月到2011年6月包头市中心医院神经内科住院的TIA患者57例,发病24h内行MRI检查,根据检查结果将患者分为DWI阳性组和DWI阴性组;对于DWI阳性患者,7d内复查MRI或CT,将其分为TIA组和脑梗死组,分别比较两组的发病特点及DWI表现,并测量ADC值、rADC值,分析其意义.结果 TIA组ADC值(630.4 ±25.9)×10-3 mm2/s,脑梗死组ADC值(495.2±60.O)×10-3 mm2/s(t=6.669,P=0.000),TIA组rADC值82.1%±5.6%,脑梗死组rADC值62.6%±7.4%(t=7.013,P=0.000),两组间比较差异有统计学意义.结论 TIA组患者DWI病灶ADC值适度下降,而脑梗死组ADC值明显下降,发病早期可以通过比较ADC、rADC值鉴别TIA和脑梗死. 相似文献
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目的了解成都市未婚非医学类女大学生避孕现状,为改进女大学生生殖健康状态、普及安全避孕提供科学依据。方法采用横断面调查的方法对成都市2225名非医学类未婚女大学生进行问卷调查,并对结果进行统计分析。结果在避孕知识认知情况方面,能够认知科学避孕方式的占比33.0%,高年级或重点高校大学生认知率高于低年级或普通高校大学生,差异有统计学意义(P<0.05)。婚前性行为的认知及避孕相关态度和行为方面,高年级学生对于主动了解避孕知识的兴趣、婚前性行为接受度、性行为发生率及意外怀孕率都显著高于低年级学生,普通高校的性行为发生率显著高于重点高校,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成都市女大学生安全避孕及生殖健康状态不太乐观,学校、家庭及社会应该加强对大学生避孕知识的教育,普及生殖及避孕知识,降低意外怀孕率。 相似文献
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目的 分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测恶性肿瘤并发结核病患者的应用价值。方法 选取西安市胸科医院2016年1—12月期间收治确诊的恶性肿瘤并发结核病的患者102例、恶性肿瘤患者64例、单纯结核病患者80例。抽取研究对象外周血并分离出外周血单个核细胞(PBMC),分析T-SPOT.TB检测不同人群的结果。同时分析T-SPOT.TB检测恶性肿瘤并发结核病患者的敏感度和特异度,及其与抗酸染色和(或)病理检查结果的一致性。结果 T-SPOT.TB检测恶性肿瘤并发结核病组阳性率为85.29%(87/102),检测恶性肿瘤组的阳性率为26.56%(17/64),差异有统计学意义(χ 2=57.97,P<0.01);检测单纯结核病组的阳性率为91.25%(73/80),与恶性肿瘤并发结核病组比较,差异无统计学意义(χ 2=1.50,P=0.221);进一步比较A、B抗原反应点数,恶性肿瘤并发结核病组与单纯结核病组患者A抗原阳性斑点数的中位数(四分位数:Q1,Q3)分别为56.50(30.25,83.25)个和45.50(32.00,75.00)个;B抗原阳性斑点数的中位数(四分位数:Q1,Q3)分别为63.50(43.25,98.00)个和55.00(24.00,101.50)个,两组比较差异均未见统计学意义(Z值分别为-0.66和-0.30,P值分别为 0.539和0.796)。T-SPOT.TB 检测恶性肿瘤并发结核病患者的敏感度和特异度分别为85.29%(87/102)和73.44%(47/64);与抗酸染色和(或)病理检查比较,T-SPOT.TB检测的Kappa值为0.61。 结论 T-SPOT.TB检测对恶性肿瘤并发结核病患者有较好的检测效能,可用于辅助诊断。 相似文献
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3指标联合检测对肺结核诊断价值分析 总被引:7,自引:0,他引:7
对 46例肺结核患者进行血清结明(MycoDotTM)试验,腺苷脱氨酶(ADA)测定及 PPD皮试,并与肺癌患者进行对照,结果肺结核组 MycoDotTM试验,ADA及 PPD皮试阳性率分别为 69. 6%, 58. 7%及 34. 8%,均高于肿瘤组。 MycoDotTM试验联合 ADA,或联合PPD皮试其阳性率分别为78.3%、82.6%,3项指标联合检测阳性率为89.1%。提示血清MycoDotTM试验,ADA测定及PPD皮试操作简便,快速,不需任何仪器设备,联合检测可提高菌阴肺结核的诊断率。 相似文献
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本文统计从2005年8月至2006年8月共收治肺结核合并糖尿病患者中随机抽取124例分组观察疗效,其中正规治疗完成强化期应用胰岛素治疗64例,拒绝应用胰岛素口服降糖药物治疗60例。 相似文献
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