钙离子载体体外诱导外周血造血干细胞定向分化为成熟树突状细胞的研究

目的以实体瘤患者外周血造血干细胞为来源，探讨体外诱导更成熟、功能更强的树突状细胞(DC)的方法。方法以血细胞分离机分离经动员的外周血造血干细胞(PBSC)，加入rhGM-CSF、rhIL-4和ma培养9d后分两组，其中一组洗去含细胞因子的培养液，并给予钙离子载体(CI)A23187处理24h，而另一组仍维持原培养液培养24h；对所获得的两组细胞分别进行细胞形态学、细胞表面抗原及刺激同种异体混合淋巴细胞反应(allo-MLR)能力的分析。结果两组细胞在倒置显微镜和扫描电镜下均显示典型的树突状细胞形态，流式细胞仪分析均高表达CD1α、HLA-DR、CD80和CD40分子；但给予A23187进一步处理24h的细胞比无A23187处理的细胞表达更丰富的CD86和CD83分子及具有更强的刺激allo-MLR的能力。结论组合细胞因子培养获得的PBSC来源的DC，经CI进一步诱导后可获得更成熟及功能更强的DC。     

组合性细胞因子与钙离子载体诱导急性髓系白血病细胞向树突状细胞分化中的作用

目的:探讨钙离子载体能否诱导急性髓系白血病细胞分化为树突状细胞及其抗肿瘤免疫。方法:选择2004-01/09解放军广州军区广州总医院血液科住院的初诊或复发的急性髓系白血病患者7例。分离急性髓系白血病患者的急性髓系白血病细胞,在体外给予钙离子载体100μg/L培养3～5d(钙离子载体组),或1000U/mL重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、1000U/mL白细胞介素4和500U/mL肿瘤坏死因子α培养7～10d(组合细胞因子组)。通过细胞形态的观察及细胞免疫表型的检测鉴定树突状细胞,用同种异体混合淋巴细胞实验及细胞毒实验检测树突状细胞的功能。结果:①形态学观察和免疫表型变化:钙离子载体组及组合细胞因子组诱导急性髓系白血病细胞均可获得具有典型树突状细胞形态及免疫表型的成熟树突状细胞,但钙离子载体组诱导的树突状细胞表面CD80,CD86,CD83,CD40,CD54等分子的表达较组合细胞因子组明显增高。②混合淋巴细胞反应和胞毒性T淋巴细胞活性:钙离子载体组所诱导的急性髓系白血病细胞刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力及激发细胞毒性T淋巴细胞的活力比组合细胞因子组强。结论:钙离子载体能高效诱导急性髓系白血病细胞分化成树突状细胞,比组合细胞因子诱导分化的树突状细胞功能更强。     

钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

目的研究钙离子载体(CI)能否诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)，并初步探讨其信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC，在体外用CI(A23187)或人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和CI培养40h，或rhGM-CSF和白细胞介素4(IL-4)培养7d，部分PBMC预先用W-7或CsA或K35926处理30min后，再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83等分子的表达，MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果健康献血者的PBMC经CI培养40h，或rhGM—CSF与CI培养40h，或rhGM-CSF与IL-4培养7d，均可获得DC的典型形态和表面分子的表达，包括CD14表达下调、共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用；CI诱导的DC其CD14分子的下调及CD83分子的上调更明显，刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强；rhGM-CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM—CSF及CI处理的PBMC，其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力，均受到W-7或CsA或KT5926不同程度的抑制；而rhGM-CSF及IL-4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。结论CI可快速诱导PBMC向DC分化，其分化过程可能受控于Ca^2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节。     

细胞因子诱导的免疫细胞治疗苯中毒再生障碍性贫血的临床研究

目的评价细胞因子诱导的免疫细胞治疗苯中毒致再生障碍性贫血的临床疗效及安全性,并探讨其可能机制。方法我院2001年3月至2007年2月所收治的25例确诊苯中毒致再生障碍性贫血患者,经院伦理委员会批准和患者知情同意后,接受了此项治疗。抽取患者外周血40~50 ml,分离单个核细胞,经白细胞介素-2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)混合培养6 d,收集形成的新免疫细胞并清除杂质后,静脉回输给患者,每周一次,平均16次;观察其近期临床疗效、免疫学活性及不良反应等。并随访追踪观察。结果(1)25例患者经治疗后,基本治愈16例,缓解4例,明显进步4例,无效1例,有效率达96%,未出现严重不良反应,随访最长7年6个月,无复发和死亡病例。(2)单因素相关分析显示,治疗前,患者骨髓的巨核细胞数、骨髓增生程度和外周血WBC值高低与外周血中T辅助细胞(CD4+)比例正相关,而骨髓非造血细胞比例与CD4+比例负相关(P均<0.05);Hb含量与T抑制细胞(CD8+)负相关(P<0.05);治疗后,上述相关关系均消失(P>0.05)。(3)多因素逐步回归分析可见,治疗前,骨髓的增生程度、外周血WBC和PLT数与CD4+比例正...     

特异性免疫细胞治疗原发性再生障碍性贫血的初步探讨

目的 探讨特异性免疫细胞治疗原发性再生障碍性贫血的临床疗效.方法 抽取患者外周血30～50 ml,分离单个核细胞经白细胞介素2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子混合培养48 h,收集形成的新免疫细胞,静脉回输给患者,每周1～2次,治疗前后分别检测患者外周血细胞计数、骨髓细胞学检查和活检以及外周血T细胞亚群CD4和CD8含量.结果 19例患者经免疫细胞治疗后,6例患者外周血细胞计数、骨髓细胞学检查和活检结果全部恢复正常,在治疗前外周血T细胞亚群CD4,CD8比例倒置者,经治疗后恢复正常比例,随访6～28个月,外周血细胞数均在正常范围内,无一例复发;2例缓解,4例进步,3例死亡,其余患者病情均有不同程度改善,表现为输血间隔时间延长,出血症状明显好转,感染减轻.治疗过程中除个别患者出现轻度发热外,无心肝肺肾等重要脏器功能的损伤.结论 特异性免疫细胞对原发性再生障碍性贫血患者的骨髓造血功能有明显改善作用,临床应用安全.     

以树突状细胞为主的免疫细胞治疗重型再生障碍性贫血的尝试

目的探讨钙离子载体(calciumionophore,CI)诱导外周血单个核细胞分化后获得的以树突状细胞为主的免疫细胞对重型再障骨髓造血功能的改善作用。方法分离重型再障患者外周血单个核细胞,体外经IL-2,GM-CSF及CI混合培养48h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞的表面标志;收集形成的新免疫细胞,清除杂质后与患者静脉回输,对比治疗前后患者外周血细胞计数、骨髓活检情况以及外周血T淋巴细胞CD4/CD8比例的改变。结果3例重型再障患者的外周血单个核细胞经体外细胞因子及钙离子载体混合培养后,均分化成以树突状细胞为主的新型免疫细胞,经这种免疫细胞治疗后患者的外周血细胞数、骨髓活检结果及T细胞亚群CD4/CD8比例均恢复正常,治疗期间定期检测患者的心、肝、肾功能均未发现异常。结论钙离子载体诱导的以树突状细胞为主的免疫细胞对重型再障患者的骨髓造血功能有明显改善作用。     

外周血PBMC来源的树突状细胞的快速无血清培养方法及细胞信号转导机制

目的 探讨体外无血清条件下诱导人外周血单核细胞(PBMC)迅速生成树突状细胞(DC)的方法．并初步探讨钙离子载体(CI)诱导分化的信号转导途径与肿瘤坏死因子(TNF)-α所诱导的是否相同。方法 分离健康献血者的PBMC．给予无血清培养基及50ng／ml的rhGM-CSF过夜培养后，再分别给予100ng／ml的A23187或50ng／ml的TNF-α，或预先加入0．5μg／ml的环胞菌素A(CsA)30min后，再加入A23187、TNF-α，共培养40h。于相差显微镜下观察细胞形态的变化，流式细胞仪检测细胞的表面标志，MTT比色法检测不同方法处理的PBMC刺激同种异体T细胞的增殖作用。结果 健康献血者的PBMC在无血清条件下，给予rhGM-CSF及CI或TNF-α培养40h，均可获得DC的典型形态．包括CD14表达下调、CD83及共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体T细胞增殖的作用；上述由CI诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均可被CsA所抑制。而TNF-α所诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均不受CsA影响。结论 健康献血者的PBMCs在体外无血清条件下．司以被rhGM-CSF及CI或TNF-α迅速诱导成DC，但CI与TNF-α诱导PBMC分化为DC的细胞信号转导途径不同。     

组合性细胞因子与钙离子载体诱导急性髓系白血病细胞向树突状细胞分化中的作用

目的：探讨钙离子载体能否诱导急性髓系白血病细胞分化为树突状细胞及其抗肿瘤免疫。方法：选择2004-01／09解放军广州军区广州总医院血液科住院的初诊或复发的急性髓系白血病患者7例。分离急性髓系白血病患者的急性髓系白血病细胞，在体外给予钙离子载体100μg/L培养3-5d（钙离子载体组），或1000U／mL重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、1000U／mL白细胞介素4和500U／mL肿瘤坏死因子α培养7-10d（组合细胞因子组）。通过细胞形态的观察及细胞免疫表型的检测鉴定树突状细胞，用同种异体混合淋巴细胞实验及细胞毒实验检测树突状细胞的功能。结果：①形态学观察和免疫表型变化：钙离子载体组及组合细胞因子组诱导急性髓系白血病细胞均可获得具有典型树突状细胞形态及免疫表型的成熟树突状细胞，但钙离子载体组诱导的树突状细胞表面CD80，CD86，CD83，CD40，CD54等分子的表达较组合细胞因子组明显增高。②混合淋巴细胞反应和胞毒性T淋巴细胞活性：钙离子载体组所诱导的急性髓系白血病细胞刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力及激发细胞毒性T淋巴细胞的活力比组合细胞因子组强。结论：钙离子载体能高效诱导急性髓系白血病细胞分化成树突状细胞，比组合细胞因子诱导分化的树突状细胞功能更强。     

体外光化学疗法的应用进展

近二十年来体外光化学疗法(ECP)在国外已得到广泛开展，主要应用于皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、移植排斥反应、移植物抗宿主病、硬皮病(SSc)及其他自身免疫性疾病，少数还报道可以作为恶性肿瘤的辅助治疗手段。本文主要就近年来国外ECP疗法的应用现状及进展作一综述。     

光敏剂photofrinⅡ预激活联合化疗药物对K562细胞杀伤作用的研究

目的:通过体外研究探讨光敏剂photofrinⅡ预激活后对人白血病K562细胞株的杀伤作用及其与化疗药物配伍能否产生协同或拮抗效应.方法:以K562细胞株为研究对象,采用MTT法检测photofrinⅡ预激活后对K562细胞株的抑制作用,同时检测photofrinⅡ预激活后分别与顺铂(DDP)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)联合应用对K562细胞的杀伤作用,Burgi法分析联合用药效果.结果:photofrinⅡ预激活后能明显抑制K562细胞株的增殖,并且这种作用呈剂量依赖性,但其抑瘤作用较后激活组降低.photofrinⅡ预激活后分别与DDP、5-FU、ADM联合,增加了化疗药物的抑瘤作用.结论:photofrinⅡ预激活后能够抑制K562细胞株的增殖,与DDP、5-FU、ADM联合使用具有相加作用.