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1.
2.
目的鉴定人核因子κB(NF-κB)p65核定位信号(NLS)缺失突变质粒即pc DNA3.1(+)-NF-κBp65ΔNLS(简称NF-κBp65ΔNLS)的表达功能,以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。方法培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株,分为对照组、转染pc DNA3.1(+)组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化;应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。结果成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调(10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22,P0.01),NF-κBp65蛋白表达水平明显升高(1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04,P0.01),且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内,在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。结论通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒,可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平,并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内;同时,细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力,提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。 相似文献
3.
4.
重症监护室并发症的预防 总被引:1,自引:1,他引:1
随着现代重症监护医学的发展和重症监护室(ICU)的建立,危重病的诊治水平不断提高。然而,许多用于抢救患者的医疗措施(如深静脉置管和人工气道建立等)均具有一定的危险性,使用不当可导致严重的并发症,如中心静脉导管相关性血行感染(CRBSI)、呼吸机相关性肺炎(VAP)和静脉血栓栓塞症(VTE),增加患者的住院费用和病死率。 相似文献
5.
6.
7.
目的调查住院肺血栓栓塞症(pulmonary thromboembolism,PTE)患者合并冠心病(coronary heartdisease,CHD)的发病率,研究合并CHD对于PTE患者病情严重程度的影响,同时比较临床干预的差异。方法分析了48例合并CHD的住院PTE患者的一般情况,吸烟指数,栓塞面积,是否合并高血压和下肢深静脉血栓(deep ve-nous thrombosis,DVT),动脉血气分析结果,心肌坏死标记物和所接受的临床干预措施,并与对照组30例不合并CHD的PTE患者进行比较。结果 15.3%的住院PTE患者合并CHD,合并CHD的住院PTE患者静息时未吸氧情况下动脉血氧分压(PaO2)低于未合并CHD的PTE患者,差异有统计学意义[(73.2±8.6)mm Hg vs.(78.6±6.1)mm Hg,P=0.015];栓塞累计肺段数两组相比,合并CHD的PTE患者累及肺段多于不合并CHD的患者,差异有统计学意义[(7.1±3.4)个vs.(5.1±3.2)个,P=0.029];临床干预方面,两组均采用低分子肝素序贯华法林和(或)溶栓治疗,合并CHD的PTE患者在此基础上应用抗血小板药... 相似文献
8.
目的构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体,鉴定其生物学效应。方法采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体,转染293E细胞,包装成逆转录病毒,以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1,用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达,并用RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制,2 h即明显低于Scramble病毒组(0.91±0.03比1.02±0.02,P〈0.01),此后持续降低;在LPS刺激后的24、36、48和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组(0.97±0.02比1.01±0.01,0.94±0.01比1.02±0.01,0.94±0.02比1.02±0.01,0.93±0.01比1.00±0.02,P〈0.05)。LPS刺激后2、6、12和24 h,siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(P〈0.01),而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组(P〈0.01)。结论将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后,可以减少其下游炎症因子的释放,提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。 相似文献
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目的 分析首都医科大学附属北京安贞医院2008年1月至2009年12月临床分离的85株嗜麦芽窄食单胞菌对抗生素的耐药情况。方法 采用梅里埃公司VITEK-JR系统对85株嗜麦芽窄食单胞菌进行鉴定和药敏试验,并用SPSS 13.0软件对其耐药性情况进行统计学分析。结果 嗜麦芽窄食单胞菌85株中,以呼吸道标本为主,占87.1%,分离菌株对抗生素耐药率较低的为复方新诺明(4.7%),之后依次为环丙沙星(18.8%)、左氧氟沙星(22.4%)、哌拉西林/舒巴坦(23.5%)。结论 嗜麦芽窄食单胞菌是医院感染的重要病原菌,了解其临床分布并进行药敏试验,能为合理选用抗生素提供依据。 相似文献
10.
朱光发 《中华临床医师杂志(电子版)》2011,5(14):4000-4004
无创正压通气(noninvasive positive pressure ventilation,NPPV)是指不经人工气道而给予的机械通气。NPPV操作简便,患者易接受,而且气道损伤和呼吸机相关肺炎等并发症少,已成为重症监护室、急诊室和普通病房救治慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)急性加重期、心源性肺水肿等急性 相似文献