MXA蛋白抑制HBV复制的体外研究

目的研究MXA蛋白抑制HBV复制的活性。方法将pcDNA3．1-MXA重组质粒和PU19-1．24HBV重组质粒分别按1：1、2：1共转染HepG2细胞（MXA组），对照组使用空pcDNA3．1、Salon DNA和PU19-1．24HBV重组质粒共转染，3d后Western blot检测MXA蛋白表达，Abbott法检测细胞上清HBeAg和HBsAg分泌量，定量PCR检测上清和胞内HBV DNA水平，统计学分析结果。pcDNA3．1-MXA与PU19-1．24HBV重组质粒共转染HepG2细胞，对照组为pcDNA3．1-MXA重组质粒、PU19空质粒和Salon DNA共转染．3d后裂解细胞Western blot检测MXA蛋白表达。结果Western blot显示MXA组有MXA蛋白表达：与对照组相比，pcDNA3．1-MXA和PU19—1．24HBV重组质粒按1：1转染时，MXA组HBeAg下降27％．上清HBV DNA和细胞内HBV DNA分别下降1个log值和0．6个log值；按2：1比例转染时MXA组HBeAg较对照组下降66％，上清HBV DNA和细胞内HBV DNA水平分别下降1．9个和1．7个log值，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示MXA蛋白抑制HBV组与对照组MXA蛋白表达没有明显差别。结论MXA蛋白在HepG2细胞具有抑制HBV复制活性，抑制活性与蛋白的表达量相关；在抑制HBV复制过程中MXA蛋白自身可能不发生降解。     

输血传播病毒在非肝炎人群中的感染状况

目的：调查非肝病人群中经输血传播病毒（TTV）的感染状况。方法：在TTV ORF1保守区设计引物,用巢式PCR检测125例医院工作人员、105例献血员、46例静脉透析病人、166例性病高危人群和83例静脉药瘾,共525人血清中TTV DNA。结果：TTV DNA阳性率,医院工作人员3．2％,献血员11．4％、静脉透析病人13．0％、性病高危人群20．5％和静脉药瘾39．8％。结论：静脉药瘾、性病高危人群和静脉透析病人是TTV感染的高危人群。     

慢性乙型肝炎血清透明质酸和抗-HBe与肝组织病理的相关性

目的： 探讨慢性乙型肝炎血清透明质酸（ Ｈ Ａ） 和抗 Ｈ Ｂｅ 与肝组织病理改变的关系。方法：对１７０ 例慢性乙型肝炎患者进行肝活检,观察肝组织病理分级（ Ｇ） 和分期（ Ｓ） 情况,同时检测 Ｈ Ａ 及肝炎病毒标志物。结果：①血清 Ｈ Ａ 与肝组织病理分级和分期关系密切,随着病理分级和分期的升高, Ｈ Ａ 也逐渐升高, Ｇ４ 、 Ｓ４ 的血清 Ｈ Ａ 分别比 Ｇ１ 、 Ｓ１ 显著升高（ Ｐ ＜ ０００１） 。②肝组织病理分级、分期与血清抗 Ｈ Ｂｅ 的出现情况也密切相关, Ｇ４ 、 Ｓ４ 的抗 Ｈ Ｂｅ 阳性率分别比 Ｇ１ 、 Ｓ１ 显著升高（ Ｐ ＜ ００５） ;③抗 Ｈ Ｂｅ 阳性者中 Ｈ Ａ 值显著高于抗 Ｈ Ｂｅ 阴性病人（ Ｐ ＜ ０００１） 。结论： Ｈ Ａ 与抗 Ｈ Ｂｅ 有一定的相关性,在 Ｈ Ａ 显著升高或／ 和抗 Ｈ Ｂｅ 阳性的慢性乙型肝炎病人中,其肝组织的炎症、坏死及肝纤维化的程度较严重。     

K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制体外研究

目的研究K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制活性。方法将pcDNA3.1-MxA(wild-type)重组质粒(WT组)、pcDNA3.1-MxA-K83A重组质粒(K83A组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与pU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后western blot检测MxA蛋白表达,Abbott检测各组细胞上清HBsAg和HBeAg表达,定量PCR检测上清和细胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。结果MxA、K83A组有较好的MxA蛋白表达;与对照组相比,K83A组和MxA组上清HBeAg分别下降73%和71%(P<0.05),上清HBV DNA水平分别下降2.22lg和2.11lg(P<0.01),细胞内HBV DNA水平下降1.89lg和1.78lg(P<0.01)。结论K83A变异不影响MxA蛋白抑制HBV复制活性。     

恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化96周的临床疗效

目的观察恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片对慢性乙型肝炎（CHB）肝纤维化患者的临床疗效,探索具有协同治疗作用、促进 CHB肝纤维化逆转的联合治疗方案。方法2010 年6 月~2015 年6 月在南方医科大学南方医院感染内科接受抗病毒治疗的 CHB肝纤维化患者197例构成随访队列,按年龄、性别、LSM配对后分为恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片组（以下简称A组,n=98 例）和单用恩替卡韦治疗组（以下简称B组,n=99例）,每12周随访1次。检测两组患者HBV DNA定量、血清学指标、血生化指 标,肝脏硬度值（LSM）采用FibroScan检测,并转换为Metavir分期。结果治疗后两组患者LSM均明显降低（P<0.05）,A组与B 组Metavir分级下降中位时间分别为72周、96周,差异有统计学显著性意义;A组和B组ALT复常中位时间分别为12周、24周, AST复常中位时间分别为24周、36周,差异均有统计学显著性意义。两组HBV DNA阴转率、HBeAg血清学转换率无明显差 异。结论恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片能进一步改善CHB肝纤维化患者的总体疗效;对CHB肝纤维化具有协同治疗效应;复 方鳖甲软肝片尚具有独立的护肝降酶作用。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

乙型肝炎病毒基因型、YMDD变异与拉米夫定治疗后HBV DNA反弹关系的研究

目的探讨HBV基因型、YMDD变异与拉米夫定抗病毒治疗后HBV DNA反弹的关系。方法应用多引物对巢式PCR法、PCR-序列分析法检测拉米夫定治疗的27例乙型肝炎患者和19例从未用过抗病毒治疗的患者HBV基因型和P区（YMDD）的突变位点。结果在27例HBV DNA反弹的患者中，13例（48．15％）检出YMDD变异，而对照人群无YMDD变异（P〈0．05）。YMDD变异的位点为rtM204V／I（C区）±rtL180M（B区）；在治疗组YMDD变异的患者中，B、C基因型构成比（46．15％和59．26％）与对照组（53．85％和68．42％）比较无显著性差异（P〉0．05）。结论YMDD变异是拉米夫定治疗后出现耐药导致HBV DNA反弹的主要原因；YMDD变异的常见位点依然为rtM204V／I（C区）±rtL180M（B区）；YMDD变异在B、C基因型病人中无差别。     

早期凝血酶原活动度对预测慢性乙型肝炎慢加急性肝衰竭预后的价值

目的探讨早期凝血酶原活动度（ PTA）对预测慢性乙型肝炎（ CHB）慢加急性肝衰竭患者预后的价值。方法分析156例CHB相关慢加急性肝衰竭患者3个月的预后,根据临床结局分为生存组和死亡组,分析两组患者在基线、1周及2周时的 PTA 及终末期肝病模型（ MELD）评分的差异,应用受试者工作特征曲线（ ROC曲线）评估基线、1周及2周时的PTA、MELD评分对预后判断的价值。结果在156例患者中有58例死亡,病死率为37.18％。生存组与死亡组患者的PTA （％）比较,在基线、1周及2周时分别为：31.49±7.22 vs 25.44±8.10、37.56±11.72 vs 24.22±11.22及49.28±20.82 vs 23.08±7.43,差异均有统计学意义（ P均＜0.05）;生存组与死亡组患者的MELD评分比较,在基线、1周及2周时分别为：25.53±4.61 vs 28.56±6.39、24.21±4.64 vs 31.07±6.03及20.06±5.06 vs 31.77±6.33,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。在基线、1周及2周时PTA、MELD评分的ROC曲线下面积（AUC）比较中,2周时PTA的AUC最大（0.957）,其次为2周时MELD评分的AUC（0.938）,但两者比较差异无统计学意义（P＝0.405）;2周时PTA的最佳临界值为35.55％,敏感度为96.60％,特异度为80.40％。2周时,PTA＜20％的3个月病死率为100％;20％≤PTA＜35％为70.81％;35％≤PTA＜50％为4.17％;PTA≥50％的均存活。 PTA越低,病死率越高,线性趋势检验χ2＝85.70,P＜0.001。结论慢性乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者治疗2周时的PTA可作为其3个月预后的早期预测指标。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠暴发性肝功能衰竭治疗作用的初步观察

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植对大鼠暴发性肝功能衰竭(FHF)的治疗作用.方法 全骨髓细胞贴壁培养筛选法分离纯化大鼠MSC;四氯化碳灌胃制作大鼠FHF模型,分为实验组和模型对照组,各20只,8只灌服等剂量0.9％氯化钠溶液作为空白对照组.将4 ’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记的大鼠MSC 1.0×106从尾静脉移植入实验组和空白对照组,等剂量0.9％氯化钠溶液尾静脉注入模型对照组;分别于术后7、14 d处死各组部分大鼠,评价实验组与模型对照组大鼠一般状况、生存率、肝功能、TNF-α水平、肝脏病理、MSC归巢至肝脏的情况.正态分布资料采用两个独立样本t检验,非正态分布资料采用非参数检验.结果 术后3d开始,实验组存活大鼠一般情况比模型对照组好转更加明显;术后7d,实验组与模型对照组各有15只和8只大鼠存活,差异有统计学意义(x2 =4.122,P＜0.05);术后7d以及14 d,实验组与模型对照组相比,肝功能指标、TNF-α水平均差异均有统计学意义(均P＜0.05),病理学检查肝组织炎性反应改善情况实验组均更为明显;术后实验组MSC归巢细胞逐渐增多,空白对照组只观察到很少量归巢细胞.结论 MSC经尾静脉同种异体移植,可以归巢到肝功能衰竭大鼠肝脏,改善大鼠免疫和肝脏组织炎性反应坏死状态,促进FHF大鼠肝功能的恢复,对FHF具有明显的治疗作用.     

慢性病毒性肝炎门静脉血流多普勒定量分析与肝组织炎症分级的相关性

应用多普勒超声评价了１０３例慢性病毒性肝炎患者及３４例正常人门静脉血流动力学改变与肝组织炎症分级的关系。结果显示：门静脉主干直径（ＰＤ）及淤血指数（ＣＩ）与炎症坏死程度（Ｇ）呈显著正相关关系；门静脉最大流速（ＰＶｘ）及平均流速（ＰＶｍ）则呈显著负相关关系；而门静脉血流量（ＰＢＦ）无明显相关关系。作者认为：ＰＤ、ＰＶｘ、ＰＶｍ及ＣＩ可用于评价慢性病毒性肝炎炎症坏死活动度，特别是在鉴别中重度（Ｇ３－４）与轻度（Ｇ１－２）炎症、正常与Ｇ２级病变等方面有较重要意义