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1.
目的观察心肌肌钙蛋白Ⅰ在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用.方法实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行.取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因.饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行Western Blotting检测重组蛋白、肌钙蛋白Ⅰ的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量.结果12只小鼠进入结果分析.①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白Ⅰ水平均正常(P>0.05).②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr 55 000,24 000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达.③模型组在Mr55 000,30 000,28 000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ及其降解片断表达,正常对照组在Mr30 000见磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05).④去磷酸化抗肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在Mr55 000,28 000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白Ⅰ-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55 000,30 000,28 000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ及其降解片断表达,正常对照组在Mr 30 000,见肌钙蛋白Ⅰ表达,未见降解片断.结论Adc CTnI Arg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白Ⅰ磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究. 相似文献
2.
目的:利用聚合酶链反应定点突变技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体。方法:实验于2005-03/06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。选择南京医科大学第一附属医院体检中心健康体检者血标本提取人基因组DNA,设计、合成两对引物,将突变位点设计在引物内,突变位点包含限制性内切酶BseNI酶切位点,采用聚合酶链式反应定点突变技术,应用高保真TaqDNA聚合酶,通过三轮聚合酶链扩增反应对血小板反应素1基因的第13外显子进行扩增,将第13外显子碱基8831A置换为G,对最终扩增产物进行酶切鉴定和测序。结果:获得人血小板反应素1第13外显子编码钙结合域突变体,经酶切鉴定和测序分析,除引入突变点产生预期A8831→G突变外,其余碱基序列无改变。结论:采用聚合酶链反应体外定点突变技术,成功构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体,为研究血小板反应素1基因该位点突变导致血小板反应素1蛋白的结构、功能变化奠定了基础。 相似文献
3.
目的:探讨血小板反应素-1(TSP-1)基因G1678A(Ala523Thr)多态性与中国汉族人群不稳定型心绞痛(UAP)的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测110例UAP患者(UAP组)和319例非冠心病者(对照组)的TSP-1G1678A多态性。结果:TSP-1G1678A多态性AA、GA和GG基因型频率在UAP组和对照组的分布差异无统计学意义(AA,46.4%∶40.4%;GA,40.0%∶46.1%;GG,13.6%∶13.5%,均P>0.05)。A等位基因频率在UAP组(66.4%)和对照组(63.5%)分布差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:TSP-1基因G1678A多态性与中国汉族人群UAP无显著相关性。 相似文献
4.
目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。
方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行Western Blotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P〈0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P〉0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在帆55000,24000检测到突变CTnI—EGFP及其降解片断表达。③模型组在M55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18&;#177;0.15,0.97&;#177;0.15,P〈0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在肛55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在M55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在帆30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。
结论:Adc CTnI Arg146Trp—EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白-I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。 相似文献
5.
目的:应用C-反应蛋白干预体外培养的乳鼠心肌细胞,观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。
方法:实验于2005-05/10在南京医科大学第一附属医院心内科暨心血管病研究所完成。取新生1-3d的SD乳鼠,无菌操作取出心脏,去除大血管和心房后将心脏剪碎,加入适量0.125%胰蛋白酶反复消化至完全。所得消化液中加入含血清的DMEM培养基,离心后弃上清,沉淀用含0.1%Brdu、体积分数为0.15新生牛血清的DMEM培养基混悬。细胞密度稀释至6&;#215;10^8L^-1,接种至六孔板中,放入37℃,体积分数为0.05的CO2孵育箱内培养。24h后换液除去Brdu,取第3天细胞进行研究。采用充氮气孵育4h模拟缺氧造成心肌细胞损伤(缺氧组),以未缺氧组做对照,缺氧组与未缺氧组均加用不同浓度的C-反应蛋白(0,10,55,100mg/L)进行干预,测定细胞培养上清心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量及脂质过氧化产物丙二醛与超氧化物歧化酶的含量以观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。并通过免疫组织化学观察C-反应蛋白在细胞的分布情况。
结果:①细胞形态及搏动率的改变:未缺氧组细胞搏动率总体随C-反应蛋白浓度的增加而增加,但在缺氧4h组,细胞搏动率在C-反应蛋白55mg/L时达到最高峰[(132&;#177;9)次/min,P〈0.051。②培养细胞上清肌钙蛋白Ⅰ含量的变化:在未缺氧组和缺氧4h组,肌钙蛋白Ⅰ均随C-反应蛋白浓度的增加而增高,且C-反应蛋白浓度为100mg/L时的增幅最高[C-反应蛋白为0,10,55,100mg/L时的肌钙蛋白Ⅰ浓度:缺氧组分别为(0.789&;#177;0.066),(1.198&;#177;0.101),(1.979&;#177;0.151),(3.714&;#177;0.288)μg/L;未缺氧组分别为(0.332&;#177;0.034),(0.377&;#177;0.054),(0.527&;#177;0.057),(0.867&;#177;0.077)μg/L,P〈0.051。③细胞上清超氧化物歧化酶、丙二醛含量变化:各组丙二醛含量的变化趋势与肌钙蛋白Ⅰ相似,随C-反应蛋白浓度的增加而增加,而超氧化物歧化酶活力则随C-反应蛋白浓度的增加而降低。④免疫组织化学结果显示:随着C-反应蛋白浓度的增高,细胞着色变深,细胞密度变低,体积变小。相同C-反应蛋白浓度下,损伤组细胞的变化比未缺氧组更明显。
结论:C-反应蛋白对心肌细胞具有显著的损伤作用,尤其在已有缺氧损伤的基础上。 相似文献
6.
急性心肌梗死患者血小板反应素1单核苷酸多态性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨血小板反应素1基因第13外显子单核苷酸多态性致血小板反应素1蛋白第700位氨基酸丝氨酸转换为天冬氨酸与中国汉人急性心肌梗死的相关性。方法应用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性技术筛查了汉族172例急性心肌梗死患者和270例对照者血小板反应素1基因第13外显子钙结合活性片段8831A→G,对筛查到含有突变的片段进行序列测定,并与正常序列进行对照分析,探讨两者之间的关系。结果血小板反应素1基因8831A→G不是中国汉人急性心肌梗死发生的独立危险因素(GA比AA:相对危险度为3.19,95%可信区间为0.578~17.61,P=0.160)。结论血小板反应素1基因8831A→G在汉人中发生频率低,与汉人急性心肌梗死发生无相关性,补充了血小板反应素1基因单核苷酸多态性的数据库信息。 相似文献
7.
目的评定负重行军对下肢步态产生的影响。方法采用随机交互设计,15名健康男性受试者进行4次步行,作训着装0、7.5、27、50kg,分别采用Vicon运动捕捉系统和AMTI测力台检测髋部、膝部和踝部运动学参数的变化。结果随着负重增加,周期性步频相对增加,步幅减小,基本上维持在恒定速度;左右髋关节屈角峰值、外旋角度峰值以及左右膝关节内收峰值受到影响较为明显,但关节运动幅度能够维持。左踝关节内翻角度峰值以及右踝关节外翻角度峰值同样受到影响;下肢左右膝、踝关节的力和力矩增加。结论在既定负荷范围内,负重增加,整体上下肢关节变化较为稳定,但下肢负荷增加,可潜在增加下肢损伤的风险。 相似文献
8.
恒定负荷运动中和运动后心脏形态和功能的变化 总被引:9,自引:4,他引:5
目的:探讨运动中和运动后心脏的形态和功能的变化。方法:采用二维超声心动图分别记录8名耐力训练者和8名无训者安静状态下、运动中、运动后1,2,3min末心尖四腔图,并对图像进行分析处理。结果:青年健康者和有一定训练水平者运动后恢复期早期,每搏量(stroke volume,SV)和射血分数(ejection fraction,EF)增加,发生超射现象,青年健康者SV由运动时的(93.41&;#177;4.82)mL增至恢复期早期(98.66&;#177;4.07)mL,EF由运动时的(59.75&;#177;4.03)%增至恢复期早期(66.40&;#177;4.04)%;有一定训练水平者SV由运动时的(108.67&;#177;4.96)ml增至(115.94&;#177;9.13)mL,EF由运动时的(65.13&;#177;2.75)%增至恢复期早期(70.75&;#177;3.49)%。以上各指标两组均存在显著性差异(P&;lt;0.05)。结论:此现象可能是由左室收缩末容积缩小引起的,因此,运动后恢复期心肌的收缩能力和后负荷减少会出现短暂的不平衡状态。 相似文献
9.
目的:应用超声心动图评定和区分病理性和生理性左室肥大.方法:20只雄性SD大鼠随机分为3组:训练组,8只SD大鼠完成8周大强度游泳训练;2K1C组,6只SD大鼠建立"两肾一夹"高血压动物模型;对照组,6只SD大鼠做假手术组.8周后,应用常规和组织多普勒超声心动图检测所有大鼠.结果:超声心动图结果显示2K1C组和训练组心脏重量左室室间隔以及左室后壁厚度均增加,左室质量分别增加36%和41%.二尖瓣瓣口血流速度显示训练组舒张晚期血流速度降低,从而导致舒张早期血流速度/舒张晚期血流速度(E/A)比值增加.但是2K1C组二尖瓣瓣口血流速度显示舒张晚期血流速度增加,从而导致E/A比值降低.训练组显著增加二尖瓣瓣环基底部和侧壁瓣环舒张早期运动速度(Ea)和舒张早期运动速度/舒张晚期运动速度(Ea/Aa)比值增加,但2K1C组二尖瓣瓣环基底部和测壁瓣环舒张晚期运动速度(Aa)显著增加,从而导致舒张早期运动速度/舒张晚期运动速度(Ea/Aa)比值降低.结论:左室舒张功能多普勒超声心动图参数对于区分病理性和生理性左室肥大具有重要诊断意义. 相似文献
10.
血小板反应素-1基因G1678A多态性与急性冠脉综合征的相关性 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 探讨血小板反应素-1(thrombospondin-1,TSP-1)基困G1678A(Ala523Thr)多态性与中国汉族人群急性冠脉综合征(ACS)的可能关系.方法 采用病例对照研究,病例均选自2003年11月至2006年5月在江苏大学附属武进医院等4家医院住院的患者,其中ACS患者412例,病例均符合2002年AHA/ACC关于ACS诊断指南的诊断指标;同期选择年龄、性别相匹配的经相关检查排除冠心病者319例为对照.应用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测TSP-1 G1678A多态性.结果 ACS患者TSP-1 G1678A多态性从基因型频率(49.5%)明显高于对照组(40.4%),两组差异有统计学意义(P=0.015).GA和GG基因型在ACS组和对照组的分布差异无统计学意义(GA:39.3%vs.46.1%,P=0.070;GG:11.2%vs.13.5%,P=0.340).A等位基因频率在ACS组和对照组分别为69.2%、63.5%(P=0.022).多元logistic回归分析显示,TSP-1基因AA基因型与ACS的发生具有显著相关性(OR=1.52;95%CI:1.11~2.08;P=0.010).结论 TSP-1基因G1678A多态性与中国汉族人群ACS密切相关,从基因型可能是ACS遗传易感性的基因标记之一. 相似文献