发现一株产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌

目的 研究1株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的耐药机理。方法 采用浓度梯度法（Etest）测定细菌对各抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）。通过等电点分析（IEF）、质粒抽提、接合试验、转化试验、聚合酶链反应（PCR）扩增及耐药基因克隆测序分析细菌编码的B内酰胺酶。结果临床分离的肺炎克雷伯菌等电点显示3条β内酰胺酶条带，分别为5．4、6．7和8．2。PCR扩增测序临床分离菌含TEM-1（pI，5．4）、SHV-12（pI，8．2）和KPC-2（pI，6．7）β内酰胺酶编码基因。转化菌只有一条β内酰胺酶条带，为6．7。从转化菌质粒（60000bp）上获得1500bp的克隆片段，测序证实其为KPC-2编码基因。结论 亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的质粒上携带水解碳青霉烯类抗生素的A类2f组KPC-2酶的编码基因。     

中国部分地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶基因型研究

目的了解中国产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布。方法收集北京、浙江、新疆及郑州等共400株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用接合试验，聚合酶链反应，克隆测序等方法明确ESBLs基因型。结果400株细菌中356株细菌ESBLs的基因型明确。其中328株细菌产1种ESBLs，主要为CTX-M型，包括CTX-M-14型ESBLs占52．25％，CTX-M-3型占14、25％，CTX-M-24型占7．25％，CTX-M-22型占2％，CTX-M-28和CTX-M-9型分别占0．75％，CTX-M-13、CTX-M-27和CTX-M-29型各占0．25％；其次为SHV型，其中SHV-12占2．5％(10／400)，SHV-5占1．00％，SHV-2占0．5％。28株细菌同时携带2种或3种ESBLs，占7．00％(28／400)，其中以同时产CTX-M-14和CTX-M-3最常见。结论中国产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型以CTX-M-14型为主；其次为CTX-M-3型，部分菌株同时产两种及两种以上ESBLs。     

甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的RAPD分型研究

目的建立随机扩增多态性DNA技术（RAPD）对甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌（MRSH）的分型方法.方法收集本院2002年4月至2003年4月临床分离的MRSH 81株.共设计了5组引物进行RAPD,电泳条带采用SPSS 13.0软件分析,根据树状图分型.结果除引物H12和M13组无法扩增出条带外,其余的4种引物均可以将81株MRSH进行分型.其中引物ERIC2将其分为13型,而引物ERIC1R将其分为8型.两种引物均可以辨别出主要流行株.结论 RAPD技术采用引物ERIC2对MRSH分型具有快速、敏感、稳定性高等特点.在有适合引物的条件下,RAPD可以作为判断MRSH医院感染流行的初筛工具.     

溶血葡萄球菌对抗菌药物的敏感性和mecA基因的检测

目的　了解溶血葡萄球菌的耐药情况 ,以指导临床合理用药。方法　对 133株临床分离的溶血葡萄球菌采用微量肉汤稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,多聚酶链反应 (PCR)法检测mecA基因 ,并与普通药敏试验比较 ,对不相符的菌株进行抑制、诱导试验。结果　 133株溶血葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素无耐药 ,对替考拉宁的耐药率为 6 .0 % ;对阿米卡星、异帕米星、米诺环素、利福平、氟氧头孢的耐药性较低 ,耐药率 <2 0 % ;对青霉素、苯唑西林的耐药率 >90 %。除米诺环素、青霉素外 ,住院患者分离菌株的耐药率高于门诊患者分离的菌株。mecA基因阳性率为 90 .2 3% ,且PCR产物经克隆测序证实为mecA特异性产物。对 2株mecA基因阳性而苯唑西林MIC≤ 0 .2 5 μg/ml的菌株进行诱导试验后其MIC≥ 0 .5 μg/ml;对 3株mecA基因阴性而MIC≥ 0 .5 μg/ml的菌株进行抑制试验后其MIC值下降 8倍以上。 结论　溶血葡萄球菌对大多数抗菌药物均有较高的耐药性 ,对糖肽类抗生素的敏感性也在下降 ,需引起临床重视。     

杭州市五家医院万古霉素耐药肠球菌耐药转座子结构及分子分型

目的 明确万古霉素耐药肠球菌(VRE)耐药转座子结构及分子分型.方法 收集2006年4月至2007年4月杭州市5家医院21株VRE菌株,用Etest法进行抗菌药物的药敏试验,并通过PCR、接合试验、质粒提取、耐药转座子结构、脉冲凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MIST)及多位点串联重复序列分型(MLVA)进行研究.结果 21株VRE基因型及表型均符合vanA.属于10个不同的PFGE型,7个不同的MLST分型,4个不同的MLVA分型,其中18株属于克隆复合体CC17,另外3株为ST343与CC17接近.所有VRE菌株均对利奈唑胺及替加环素敏感.多对引物对转座子的不同区域的PCR扩增并进行序列拼接、比对,发现其中2株VRE菌株携带典型的耐药转座子Tn1546,其余19株VRE菌株均携带一种新的与Tn1546相似耐药转座子,均在vanXY之间反向插入IS1485.18株VRE菌株均可通过滤膜接合试验进行万古霉素耐药转移,接合菌均含有约54 000 bp大小的质粒.结论 杭州市5家医院21株VRE菌株均为vanA表型及基因型,发现了一种新的万古霉素耐药转座子结构.21株VRE菌株经MLST分型属于7个不同的序列分型,属于或接近易在医院环境里生存并在近年来迅速造成了全球播散的克隆复合体CC17.     

甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的基因多态性研究

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,对甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌（MRSH）进行基因多态性研究。方法对81株MRSH通过RAPD技术进行扩增,电泳条带采用SPSS13.0软件分析,根据树状图分型。结果81株MRSH通过RAPD技术可产生相对固定的6条电泳带,经遗传相关系数分析后可分为8型,其中A型占70.37%,而10株血培养阳性的MRSH中有9株为A型。结论通过RAPD分型研究,可以了解MRSH基因流行型的特性,为该菌的感染控制提供分子流行病学依据。     

细菌的群体感应系统

近年来的研究证明细菌之间存在信息交流，许多细菌都能合成并释放一种被称为自诱导物质（autoinducer，AI）的信号分子，胞外的AI浓度能随细菌密度的增加而增加，达到一个临界浓度时，AI能启动菌体中相关基因的表达，调控细菌的生物行为，如产生毒素、形成生物膜、产生抗生素、生成孢子、产荧光等，以适应环境的变化，我们将这一现象称为群体感应调节（quorum sensing，QS）。这一感应现象只有在细菌密度达到一定阈值后才会发生，所以也有人将这一现象称为细胞密度依赖的基因表达（cell density dependent control of gene expression）。     

16S rRNA甲基化酶基因在鲍曼不动杆菌中的分布

目的调查国内6个省市25家医院临床分离鲍曼不动杆菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB的分布情况。方法收集2004年12月-2005年12月国内6省市8家省级医院、浙江省11个地区17家市级医院临床分离的700株鲍曼不动杆菌。琼脂稀释法测定其对妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、异帕米星、奈替米星5种氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度（MIC）值；PCR筛选三种甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB，克隆测序明确基因型；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性；质粒抽提、接合试验及Southern杂交确定armA基因定位。结果对妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、异帕米星、奈替米星的耐药率分别为67．7％、70．9％、75．7％、63．5％和71．5％。对5种氨基糖苷类抗生素全部耐药的菌株有377株，其中334株检出armA基因；未发现rmtA、rmtB阳性菌株。armA基因阳性菌株PFGE分型以A、B、C为主。碱裂解法反复抽提未得到质粒，多次接合试验未成功；Southern杂交显示，armA基因分别位于克隆A、B、c菌株染色体ApaⅠ酶切PFGE约220、300、220kb大小的PFGE片段上。结论16SrRNA甲基化酶基因armA在鲍曼不动杆菌中广泛存在，armA基因位于鲍曼不动杆菌的染色体上。     

克隆分析法在hbv dna p区变异位点检测中的应用及临床意义

核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎(chb)的过程中易导致患者体内乙型肝炎病毒(hbv)p区出现耐药变异,这是由核苷(酸)类药物的药理特性决定的.因此,及时而准确地检测出变异位点对临床治疗有很重要的指导意义.pcr技术能检测出部分变异位点,但hbv是以准种的形式存在于人体中,在一些变异株尚处于低载量复制时,pcr技术容易出现漏检现象.克隆分析法原指将dna从一个载体转移到另一个载体的技术.     

浙江省产超广谱β-内酰胺酶菌株SHV型β-内酰胺酶分布

随着三代头孢菌素如头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松和单环酰胺类抗生素在临床上的广泛使用 ,超广谱 β 内酰胺酶 (ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ β ｌａｃｔａｍａｓｅｓ ,ＥＳＢＬｓ)在革兰阴性杆菌中产生率不断增加 ,ＥＳＢＬｓ种类也不断增加 ,至 2 0 0 0年 6月 ,已发现近 10 0种ＥＳＢＬｓ亚型〔1〕,其中ＴＥＭ型有 6 7种 ,ＳＨＶ型有 2 4种 ,非ＴＥＭ非ＳＨＶ型有 2 0多种。ＴＥＭ和ＳＨＶ型分别由广谱酶ＴＥＭ 1、ＴＥＭ 2和ＳＨＶ 1编码基因中 1～ 5个位点发生点突变而来。各国各地区流行的ＥＳＢＬｓ亚型各不相同〔2〕。我们对…