乙型肝炎患者HBV DNA定量与血清标志物的关系分析

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物与HBV DNA定量之间的关系。方法分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）对391例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性血清进行检测，分析检出率及相关性。结果391例HBsAg阳性血清共检出7种模式，以HBV DNA含量大于5×10^2copy／mL为阳性。HBsAg阳性（＋）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）（＋）、乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）（＋）模式的阳性检出率较高，为96．9％，HBV DNA含量也较高，其中大于10^7copy／mL的血清为53．8％。HBsAg（＋）、抗-HBe（＋）、抗-HBc（＋）模式中阳性检出率为25．3％，171例（74．7％）HBV DNA含量小于5×10^2copy／mL。HBsAg（＋）、抗-HBc（＋）模式中阳性检出率为65．4％。结论HBsAg和HBV DNA联合检测，更能反映乙型肝炎患者HBV感染、传染性及体内复制情况。     

北京石景山地区人乳头瘤病毒(HPV)感染的分子流行病学研究

目的 探讨北京石景山地区妇科疾病与人乳头瘤病毒感染(HPV)的关系,建立本地区不同妇科疾病和不同年龄段妇女HPV感染的流行病学资料库.方法 应用反向点杂交技术分别对疾病组1 012例患者标本和正常组500例标本进行HPV检测,所得数据用SPSS13.0统计软件进行分析.结果 疾病组1 012例标本中,阳性标本351例,...     

人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的基因克隆及序列分析

新近研究表明:幽门螺杆菌(Ｈｐ)的尿素酶Ｂ亚单位(ＵｒｅＢ)、热休克蛋白Ａ亚单位(ＨｓｐＡ)和空泡细胞毒素(ＶａｃＡ)均是有效的抗原成分。由于Ｈｐ属微需氧菌,培养条件要求高,难以获得大量天然来源的ＵｒｅＢ,ＨｓｐＡ,ＶａｃＡ等成分。我们运用ＰＣＲ技术克隆ＨｐｈｓｐＡ基因,并构建载体对其进行序列分析。材料与方法一、材料质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔＴＭＸａ3购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。大肠杆菌ＪＭ109及Ｈｐ菌株系本室保存菌种。ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄⅢ(宝灵曼公司),Ｔ4连接酶,ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＰＣＲ分子量标准(华美生物工程公司)。…     

从一患者胆汁中分离出1株阿萨希毛孢子菌

阿萨希毛孢子菌系毛孢子菌属中的一种,为酵母样真菌。随着激素免疫抑制剂、抗菌药物等的应用,条件致病真菌感染的数量日益增多,近来发现阿萨希毛孢子菌是皮肤、呼吸道和胃肠道的免疫受损患者和新生儿的条件致病菌。本例导致肝胆系统损害,现报道如下。     

乳腺癌中int-2、c-erbB-2及c-myc三种癌基因扩增及其临床意义的初步研究

检测了16例乳腺癌标本中int-2、c-erbB-2及c-myc 三种癌基因的扩增情况。观察到有4例发生了int-2 基因扩增,有14例发生了c-erbB-2基因扩增,9例发生了c-myc基因扩增。该文对这三种癌基因的扩增倍数、频率与某些临床指征如肿瘤大小、淋巴结转移数目、雌激素受体水平等的关系进行了讨论。     

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位

目的：建立一种有效从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位HspA的方法。方法：重组基因工程大肠杆菌发酵后，表达的Hp r HspA包涵体经洗涤，变性，复性，采用Q Sepharose High Performance阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析分离纯化，使用SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用ELISA和动物实验对纯化蛋白的免疫学活性和生物学活性进行鉴定。结果：Hp的HspA包涵经洗涤和溶解后，Hp的HspA的纯度＞60％，包涵体溶解液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析后纯度超过95％，Hp的HspA纯品经检测具有良好的免疫学活性和生物学活性。结论：本研究建立的分离纯化方法可从包涵体中获得高纯度的重组HspA蛋白，为进一步的动物实验研究奠定了基础。     

AT细胞对电离辐射敏感原因的探讨

AT细胞具有对电离辐射和拟辐射物质的高敏感性以及DNA合成抑制市性，存在复杂的基因异质性，本从AT细胞的遗传学互补性分析，DNA损伤修复缺陷以及DNA拓扑酶学研究三方面对AT细胞辐射敏感性的分子机理等进行了讨论，认为DNA双链修复缺陷与重接忠实性下降可能是AT细胞电离辐射敏感性的原因。     

16SrRNA基因克隆文库用于菌群分析的效能研究和评价

目的建立16SrRNA基因克隆文库进行菌群相对定量的方法，评价其对细菌的检测效率以及对混合菌群巾低含量细菌的分析能力。方法取脆弱类杆菌等9种细菌以相同及级差比例制备细菌悬液，分别用或不用变溶菌素处理后，用试剂盒提取核酸，16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序，建立16SrRNA基因克隆文库，将序列与数据库进行比对分析。结果相同比例制备的菌悬液，加或不加变溶菌素提取的核酸，掺入的9种细菌均可检出。级差比例制备的菌悬液，加变溶菌素提取核酸，掺入的9种细菌均可检出；不加变溶菌素提取核酸，数量少难裂解的革兰阳性菌双歧杆菌未能检出。混合菌悬液中各种细菌的比例与文库反映的各种细菌的比例有数量对应关系，但不是线性对应关系。结论16SrRNA基因序列分析是一种较好的细菌菌群分析方法，它可以同时检出多种细菌，并能对混合细菌标本进行菌群相对定量，反映菌群中各种细菌的丰度，但不能准确定量菌群中各种细菌的数量。     

B型肉毒毒素重链C端基因的克隆与表达

目的:扩增B型肉毒毒素重链C端基因并将其在大肠杆菌中表达.方法:首先克隆B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc),经IPTG诱导,在大肠杆菌中进行天然序列的表达.构建原核表达载体pET32/Hc后进行融合蛋白的表达.对5′端引物进行修饰,最终进行N端修饰蛋白的表达.结果:扩增得到的BoNTB/Hc与已知序列同源性达99%,未得到天然序列的表达,获得了融合蛋白和N端修饰蛋白的表达.Western blot鉴定结果表明,融合蛋白和N端修饰蛋白都可以和特异性抗体发生反应.结论:获得了B型肉毒毒素重链C端基因的表达,为肉毒毒素相关研究奠定了基础.     

产毒性大肠杆菌不耐热和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的：用基因工程方法克隆产毒性大肠杆菌（ETEC）不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）基因,以制备检测ETEC的单克隆抗体.方法：利用PCR技术扩增LT和ST基因并将它们插入T-easy载体中,采用全自动测序仪进行核苷酸序列分析.结果：DNA序列分析表明,克隆的ETEC-LT-B DNA序列与GenBank公布序列比较在17、69、101、102位点有碱基变异,同源性98.9%;ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致.结论：成功获得正确的ETEC的LT和ST基因,为其重组表达及后续研究奠定了实验基础.