简套式荧光RT-PCR检测患者血清样本中SARS冠状病毒

目的　建立一种快速、特异、灵敏的SARS冠状病毒(SARS CoV)核酸检测方法。方法　根据GenBank中SARS CoV基因序列,自行设计引物、荧光探针,在PE 770 0扩增仪上探讨工作参数,形成试剂盒,并用研制的试剂检测76份临床SARS样本。结果　简套式荧光RT PCR方法对血清样本、漱口液样本、正常人样本检出率分别为33.3% (12 36 )、6 7.5 % (2 7 4 0 )、0 (0 / 16 0 ) ,与经典套式检测结果一致。而传统一步法荧光RT PCR对样本的检出率分别为13 9% (5 36 )、5 2 5 % (2 1 4 0 )、0 (0 / 80 )。结论　简套式荧光RT PCR核酸检测法是SARS临床早期诊断快速、特异、灵敏的方法。     

核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

含SARS CoV RNA病毒样颗粒的构建和表达

目的:构建并表达含有SARS冠状病毒RNA片断的抗核糖核酸酶的病毒样颗粒.方法:通过克隆大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒RNA聚合酶基因片段,将这些基因连接到载体 pTrc99a上表达,并进行纯化、定量分析、RT-PCR检测和稳定性试验. 结果: 获得病毒样核蛋白颗粒,在37℃稳定性可达到30 d,能抵抗核糖核酸酶降解. 结论: 该病毒样核蛋白颗粒稳定、安全、可靠,可作为SARS冠状病毒RT-PCR检测、定量分析的有效阳性参考品.     

新一代癌症标志物:MicroRNAs

MicroRNA是一类接近于22个核苷酸的小RNA分子,已经证明它在特定类细胞型以及疾病发生上调或者下调。研究表明这些小RNA分子是人类基因组中最主要基因编码的监测调节开关之一。本文综述了MicroRNA结构、作用机制、MicroRNA检测技术、以及人类肿瘤关系。通过一些特定的方法,诸如基因芯片、磁珠芯片、实时定量PCR等,能够检测miR-NAs。对于一些类型的肿瘤,包括慢性白血病、乳腺癌、结肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌等,特定组织中miRNA的丰     

多重PCR-核酸探针杂交法同时检测沙眼衣原体、解脲支原体和淋病奈瑟菌

目的：建立一种同时检测沙眼衣原体，解脲支原体，淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法并用于临床标本检测。方法：采用多重PCR－核酸探针杂交技术，结果与常规PCR法比较。结果：本法特异性良好，敏感度达到0.1fg。经过对166例性传播疾病门诊患者标本测定证实，沙眼衣原体，解脲支原体，淋病奈瑟菌检出率分别为22．9％，54．8％，34．3％，并有22．2％的双重复合感染和4．8％的三重复合感染。并与常规PCR法具有很好的一致性。结论：本法快速，简便，特异性好，能指示多重感染。     

内含HCV RNA病毒样颗粒的HCV荧光定量参考品的建立

目的 使用内含HCV RNA病毒样颗粒建立HCV实时荧光定量参考品,以便对实验操作进行严格的质量控制.方法 使用国家一级校准品对内含HCV RNA病毒样颗粒进行含量标定,并稀释制作定量参考品.结果 内含HCV RNA病毒样颗粒的RNA溶液作为HCV RNA荧光定量检测试剂盒的定量参考品,在检测方法上该参考品既可作为定量参考品,又可当作室内质控品,从样品处理开始就可以监控整个实验操作过程,对实验的可靠性提供了有效的保证.结论 内含HCV RNA病毒样颗粒定量参考品的使用使临床上开展核酸扩增技术(NAT)来检测HCV病毒RNA含量定量准确,结果可靠.     

实时荧光RT-PCR对SARS患者血清中病毒含量的定量检测

目的:阐述SARS患者病程与血清中SARS病毒含量间的关系.方法:采用高灵敏度荧光实时定量RT-PCR方法,对156份SARS患者进行检测,同时,以9.4×109copies/L(Robert Koch Institute)灭活的SARS冠状病毒为定量标准品,病毒样颗粒为阳性对照,分析SARS-CoV阳性血清样本中的病毒含量.结果:检测试剂的灵敏度达1×105copise/L,与相关病原体没有交叉.81份血清样本中病毒含量分布在1×105～1×107copies/L之间,患者血清样本中病毒含量较低,经统计学分析,病毒含量与病程长短无明显数量关系.结论:SARS患者血清中病毒含量低,与病程没有明显的相关性.     

胆结石患者胆囊粘膜及胆汁和结石中幽门螺杆菌DNA的检测

目的　检测单纯胆囊结石患者胆囊粘膜、胆汁和胆石中的幽门螺杆菌DNA ,探讨幽门螺杆菌在胆石的形成过程中的作用。方法　选用一对来源于幽门螺杆菌特异性尿素酶A基因的引物 ,用PCR法对 5 2例单纯胆囊结石患者的胆囊粘膜、胆汁和胆石中的幽门螺杆菌DNA进行检测。结果　胆汁中幽门螺杆菌DNA的阳性率为30 .8% (16例 ) ,明显高于胆囊粘膜中的 15 .4% (8例 )和胆石中的 13.5 % (7例 )。结论　提示幽门螺杆菌是胆石形成过程中的重要病原菌之一