我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对小鼠脑组织铁代谢影响

目的　探讨我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对宿主脑组织铁代谢及脑损伤的影响。方法　将20只C57BL/6（体质量15～17 g）小鼠随机分为对照组和感染组，每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射4 000个弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3虫株速殖子，对照组小鼠注射等量无菌PBS，饲养6 d后处死小鼠并取其脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP⁃MS）检测小鼠脑组织铁元素水平；采用RNA芯片检测两组小鼠脑组织差异基因数目并对功能基因表达情况进行基因本体论（Gene Ontology, GO）功能富集；采用实时荧光定量PCR（fluorescent quantitative real⁃time PCR, qPCR）技术检测小鼠脑组织中弓形虫表面抗原1（Toxoplasma gondii surface antigen 1，TgSAG1）基因及部分锌铁调控蛋白（Zrt⁃ and Irt⁃like protein, ZIP）家族mRNA表达水平；采用光镜和电镜观察小鼠脑组织海马齿轮回（dentate gyrus, DG）超微结构；采用Western blotting检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPx4）蛋白表达水平；采用硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平；采用免疫组化检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达光密度（optical density, OD）值。结果　光镜下可见感染组小鼠脑组织海马DG区细胞坏死，电镜下见感染组小鼠脑组织海马区出现胞质空泡化、核皱缩坏死、线粒体嵴断裂消融、自噬小体增加等超微结构变化。与对照组相比，感染组小鼠脑组织中铁元素水平上调[（32.92 ± 0.90） µg/g vs.（37.72 ± 1.10） µg/g；t = 3.397, P < 0.01]；RNA芯片检测感染组小鼠脑组织发现721个基因上调、276个基因下调，差异表达基因在金属离子结合能力上有明显富集。与对照组相比，感染组小鼠脑组织金属元素转运体ZIP2 mRNA表达水平上调（t = 8.659，P < 0.05）、GPx4表达下降[（1.046 ± 0.025） vs. （0.720 ± 0.101）；t = 3.129，P < 0.01]）、MDA水平升高[（4.37 ± 0.33） nmol/mgprot vs.（5.93 ± 0.54） nmol/mgprot；t = 2.451，P < 0.05）]、VEGF蛋白平均OD值上调[（0.348 3 ± 0.017 8） vs. （0.490 6 ± 0.010 5）；t = 6.641，P < 0.01]。结论　Chinese 1优势基因型弓形虫感染后，小鼠脑组织中铁元素蓄积、抗氧化能力下调、氧化应激水平升高，提示弓形虫感染可影响宿主脑组织铁代谢而导致脑损伤。     

Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白 ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

目的：构建弓形虫Chinese 1基因型TgCtWh3（以后均简称Wh3）株棒状体蛋白（ rhoptry protein ,ROPs）16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至pMD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3 D结构。结果各组均PCR扩增出约2．1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以pET-28a和pEGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。     

3种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法的建立

目的:建立快速检测食源性致病菌的多重PCR方法。方法:本研究根据肠毒性大肠埃希菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)的大肠杆菌不耐热毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亚单位(LTB)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH),分别设计了三对引物,预计PCR扩增的目的基因片段为194、279和435 bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化,建立了快速检测肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌和福氏志贺菌的稳定的单管多重PCR方法。结果:该方法检测的灵敏度分别为:145 pg/ml肠毒性大肠埃希菌的基因组DNA、100 ng/ml伤寒沙门菌的基因组DNA、7 ng/ml福氏志贺菌的基因组DNA,与单基因PCR检测的灵敏度相同。并且模拟检测食品中的细菌,结果很稳定。结论:该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够快速地实现对食品中的多种致病菌的诊检和监控。     

microRNA?155在弓形虫感染调节巨噬细胞极化中的作用

目的 探讨弓形虫感染对宿主细胞内microRNA?155（miR?155）表达的影响及其对巨噬细胞极化的作用。 方法 利用miRNAs基因芯片检测弓形虫感染宿主细胞内miRNAs表达水平,应用实时定量聚合酶链反应技术（qPCR）检测miR?155表达水平。采用脂质体转染法将pEGFP?miR?155导入人巨噬细胞,利用流式细胞术检测转染效率。采用流式细胞术、qPCR、酶联免疫法检测弓形虫感染组、pEGFP?miR?155过表达组以及miR?155抑制组诱导巨噬细胞表面分子CD86及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和白细胞介素（IL）?12表达水平。结果 基因芯片和qPCR检测结果显示,随着弓形虫感染时间的延长,miR?155表达量上升;pEGFP?miR?155转染宿主细胞的转染效率可达82.6%。弓形虫感染组和pEGFP?miR?155过表达组CD86表达水平显著高于对照组和miR?155抑制组,iNOS和IL?12基因表达量显著升高。结论 弓形虫感染能够通过上调miR?155表达参与驱动人源巨噬细胞向M1型偏移。     

聚合酶链反应在检测脑性瘫痪患儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)在检测脑性瘫痪 (CP)患儿人巨细胞病毒 (HCMV)感染中的意义。方法　对 5 6例CP患儿用PCR检测尿巨细胞病毒 (CMV)DNA ,病毒分离检测尿标本 ,观察CMV特征性致细胞病变效应 (CPE) ,ELISA检测血清CMVIgM和IgG。结果　PCR检测CMVDNA阳性率为 5 3 .6% ,9例CMV病毒分离结果阳性 ;CMVIgM、IgG阳性率分别为 12 .5 %、3 7.5 % ;病毒分离 :CMVIgM阳性与CMVDNA阳性的符合率分别为 10 0 %、10 % ,前两者与后者比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ;CMVIgG阳性与PCR阳性符合率为 6.7% ,两者无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　PCR检测CMVDNA能够早期快速检测到CP患儿CMV感染 ,可应用于CP患儿中CMV感染的检测 ,为早期干预提供可靠依据。     

HCMV编码的dsRNA结合蛋白在抗机体RNA干扰中的作用

人巨细胞病毒(HCMV)是一种感染广泛的疱疹病毒家族中的一员,它对人群中的易感者尤其对免疫能力下降患者的危害已引起社会的广泛重视.RNA干扰(RNAi)是近年来发现存在于体内抵御病毒感染和基因损伤的一种重要的保护机制.而HCMV则可通过编码dsRNA结合蛋白(DRBPs),特异性结合dsRNA,阻断宿主细胞抗病毒的RNAi途径,保护病毒mRNA的表达,最终达到逃避宿主细胞的抑制病毒转录的作用.     

阜阳市 HIV / AIDS 患者弓形虫感染情况调查

目的 了解安徽省阜阳市 HIV / AIDS 患者弓形虫的感染情况,以及弓形虫合并感染对患者 CD4+ T 淋巴细胞计数的影响,为 HIV / AIDS 患者弓形虫病防控提供参考依据。 方法 以安徽省阜阳市 2020 年 1 月至 2021 年 3 月未经治疗新报告的 HIV / AIDS 患者为调查对象,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其血清弓形虫 IgG 抗体,同时检测 CD4+T 淋巴细胞水平。 结果 共调查 HIV / AIDS 患者 449 例,其中,男性 348 例,女性 75 例,36 例性别不详;年龄以 20~ 60 岁为主。 检测出弓形虫 IgG 抗体阳性 5 例,阳性率为 1. 11%。 弓形虫 IgG 抗体阴性的 HIV / AIDS 患者CD4+T 淋巴细胞计数最低为 1 个 / μL,最高为 1 616 个 / μL,中位数(四分位间距)为 287(170,439)个 / μL;弓形虫IgG 抗体阳性的 HIV / AIDS 患者 CD4+T 淋巴细胞计数最低为 43 个 / μL,最高为 325 个 / μL,中位数(四分位间距)为 139(86,237)个 / μL,两者间差异无统计学意义(Z = -1. 749,P>0. 05 )。 结论 安徽省阜阳市 HIV / AIDS 患者弓形虫感染率较低,CD4+T 淋巴细胞水平与弓形虫感染之间的关系有待进一步研究。     

下腰痛症状与巨细胞病毒感染料

目的：探寻人巨细胞病毒感染与下腰痛存在的相关性，旨在进一步阐述下腰痛的可能病因资料来源：应用计算机检索Medline1992—01／2004—04的文章，检索词为“back pain，human cytomegatovirus．virus”，限定文章浯言种类为English。同时检索http：//www．wanfangdata．com．cn／1998—01／2004—12的文章，检索词为“腰痛、人巨细胞病毒”，限定文章语言为中文。资料选择：纳入标准：①腰痛的病因学研究。②人巨细胞病毒感染与疼痛的相关研究：排除标准：①较陈旧的文献：②重复研究。③综述文献。资料提炼；共检索到181篇巨细胞病毒感梁与下腰痛相关文献，其中25篇符合标准，排除的其余文章系同一类的重复性研究、较陈旧的及综述文献。资料综合：①下腰痛简介：成年人中60％～80％有下腰痛史，但85％的下腰痛原因不明，临床上不能针对病因开展有效治疗，由此导致5％～10％的下腰痛转为慢性或致残，因而倍受国内外学者关注。Muneshige等指出病毒感染理论是揭开慢性局部疼痛之谜有吸引力的假说。②人巨细胞病毒简介：成年人群中人巨细胞病毒感染非常普遍，其抗体阳性率为40％～100％。人巨细胞病毒感染的临床类型分为亚临床感染／隐性感染和症状性感染。③人巨细胞病毒可能引起下腰痛的途径：有先天性感染、围生期感染和后天性感染；试验研究显示许多脊柱结构，包括韧带、平面关节、椎骨骨膜、椎骨周围的肌肉和筋膜、血管、纤维环和脊神经根病变可导致下腰痛。结论：人巨细胞病毒感染与下腰痛可能具有相关性，但其确切关系尚待进一步观察验证.     

人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性研究

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染与非特异性下腰痛（NLBP）的关系，HCMV活动性感染与NLBP临床症状和内皮素（ET）的相关性。方法：PCR、HE染色检测尿沉渣HCMV—DNA和包涵体：ELISA、放免法测定血浆HCMV抗体和内皮素水平。结果：（DNLBP患者病毒包涵体、HCMV抗体阳性率明显高于正常对照组（P〈0．05）。②NLBP患者HCMV—IgM抗体阳性组与阴性组，在疼痛加重病程、疼痛程度和内皮素水平方面差异均有显著性意义，t值分别为-4．74（P〈0．01）、3．67（P〈0．01）、4．32（P〈0．01）。结论：NLBP患者腰痛症状可能与HCMV活动性感染相关。成年人HCMV活动性感染后导致的NLBP患者，尿沉渣涂片经HE染色后光镜下见不典型HCMV包涵体．