黄曲霉毒素B1诱发树鼩肝癌过程中的差异表达蛋白质分析及意义

目的比较黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子.方法用双向电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)对同一动物自身的癌发生前肝组织(A45W),癌发生后的肝癌组织(ACa)及未经AFB1处理的对照组动物肝组织(E45W)进行了相互比较.结果A45W组、ACa组、E45W组分别平均检测到(1 255±43)个蛋白点(n=3)、(1 198±50)个蛋白点(n=3),和(1 252±40)个蛋白点(n=3),以其中A45W组图谱为参考胶,ACa组、E45W组分别与其匹配的平均匹配点数为(818±39)个(n=3)和(777±45)个(n=3),平均匹配率分别为66%和62%.癌与癌前比(ACa vs A45W),相差2倍以上的上调点和下调点分别为108个(包括癌特异点)和75个;癌前与未经AFB1处理的对照组比(A45W vs E45W),相差2倍以上的上调点有78个,下调点有21个.质谱可鉴定出不均一核糖核蛋白A1、不均一核糖核酸核蛋白A2/B1、peroxiredoxin 1、peroxiredoxin 2、膜联蛋白4、肌球蛋白α链等26种胶内差异蛋白质.结论在AFB1诱发的树鼩肝癌发生不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索.     

RNAi沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的影响

目的:研究细胞分裂周期素25a(cell division cycle 25a,CDC25a)基因RNAi(RNA干扰)的重组慢病毒载体对人肝癌细胞Hep G2 CDC25a基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:实验组以CDC25a基因重组慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;阴性对照组以RNAi-NC慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;空白对照组常规培养。三组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。连续28 d观察裸鼠成瘤情况及移植瘤生长情况,28 d后测定肿瘤体积和重量。用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学法检测移植瘤中CDC25a的表达情况。结果 :各组裸鼠接种Hep G2细胞后第7天均有肿瘤形成,实验组的肿瘤生长速度、体积和重量明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。实验组瘤体中CDC25a的m RNA及蛋白表达与阴性对照组及空白对照组相比明显下降(P<0.05)。结论:LV-CDC25a-RNAi重组体沉默Hep G2细胞的CDC25a基因后能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提示CDC25a基因可被认为是肝癌治疗的关键靶点。     

RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究

目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。     

树Qu对人乙型肝炎病毒实验感染的量反应

50只树Qu分成5组。将HBV含量为10^8CID/ml的美国NIH提供的标准血清稀释成10^-6--10^-10等5个浓度，先经股静脉分别给各组每只动物接种0.5ml，3天后，经腹腔再注射等量同样稀释血清一次。实验观察16周，经血清学及免疫组织化学检测，5个稀释度的血清引起树Qu实验感染率依次为80．1％，88．8％，66．67％，55．56％及42．8％。表明，树Qu对人HBV的易感性与黑猩猩近似。由于其体形小，易于饲养管理，是研究与HBV感染有关的疾病，治疗药物及疫苗质量检测的较好的实验动物。     

人乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌──—在树忽的实验研究

用人乙肝病毒（ＨＢＶ）接种树的，建立ＨＢＶ感染动物模型，实现连续传代感染，并用乙肝疫苗预防其感染。以此模型研究ＨＢＶ及（或）黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）在诱发肝癌中的作用。结果肝癌诱发率在同时接受两种因子者显著高于单一因子者，癌前病变的发生与肝癌诱发率相关，被感染树的肝组织及（或）肝癌中检出ＨＢＶＤＮＡ可整合于宿主肝ＤＮＡ。提示ＨＢＶ和ＡＦＢ１起协同致癌作用并支持ＨＢＶ与肝癌的病因学关系。     

胸腺素β10在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者组织胸腺素β10 (Thymosin beta-10,Tβ10) mRNA的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中Tβ10 mRNA的表达情况,分析Tβ10 mRNA表达水平与肝癌患者的临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平和病理分级等指标的关系.结果 Tβ10 mRNA在正常肝组织(1.30±0.53)及癌旁肝组织(1.21±0.50)中的表达水平明显高于在HCC组织(1.01±0.41)中的表达水平(P＜0.05),而在正常肝组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).Tβ10 mRNA在人HCC组织中的表达与门静脉癌栓、肿瘤个数及肿瘤直径明显相关(P＜0.05),而与临床分期、肝外转移及术后复发、血清AFP 水平及分化程度无明显关系(P＞0.05).结论 Tβ10 mRNA在HCC组织中低表达,可能与HCC的发生、发展的早期阶段有关.     

成年树鼩实验感染人乙型肝炎病毒的研究

作者取两名HBsAg及HBeAg均阳性,电镜观察含Dane颗粒的乙型肝炎患者新鲜血清作感染源,接种于96只健康的成年树鼩.实验观察了137周,每只树鼩采血18-20次,经多种敏感可靠的技术检测,发现87只(占90.6%)的血清和/或肝细胞有HHBV     

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1诱发Wistar大鼠肝癌的影响

[目的]通过建立黄凿霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)诱发Wistar大鼠肝细胞癌(HCC)模型,用银杏叶提取物(extract of Ginkgo Biloba Leaf,EGb761)进行干预,观察EGb761对AFB1致大鼠HCC作用的影响. [方法]实验大鼠按体重随机分成3组:A组(AFB1组)、B组(AFBI+EGb761组)和C组(空白对照组).于实验第14、28、42及55周给予肝活检并于第64周全部处死大鼠,观察大鼠肝脏γ-GY灶及HCC发生情况. [结果]在出癌前期,第42及第55周时,A组每个γ-GT阳性灶的面积分别为(7.95±0.30)mm2及(17.87±0.71)mm2,单位面积(cm2)灶的个数分别为0.35±0.006及0.26±0.004,灶总面积分别为(2.54±0.05)mm2/cm2及(4.68±0.12)mm2/cm2;B组在相同时段的相应指标,分别为(4.65±0.16)mm3及(9.03 4±0.35)mm2, (0.21 4±0.006)及(0.20±0.005),(0.97±0.03)mm2/cm2及(1.62±0.06)mm2/cm2.除了55周A、B两组的单位面积γ-GY阳性灶的个数无统计学差异外,各时段B组各项指标都显著小于A组(P=0.000).两个实验组共有28只大鼠发生恶性肿瘤,对照组无肿瘤发生.B组HCC诱发率(7/26,26.92%)明显低于A组(19/25,76%) (P=0.000).另外,HCC及其他肿瘤的发生时间,B组明显推迟.[结论]EGb761能明显抑制AFB1诱发大鼠肝的癌前病变及延迟癌前病变向癌发展.     

银杏叶提取物（EGb761）对乙型肝炎病毒抗原分泌的抑制作用

目的探讨银杏叶提取物对乙型肝炎病毒分泌抗原的抑制作用。方法用不同浓度的银杏叶提取物作用于HepG2.2.15细胞。期间分不同的时间段用MTT法检测银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞的毒性作用并收集细胞上清,用酶联免疫吸附法定量检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及乙肝e抗原（HBeAg）。结果银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞没有明显的毒性作用;经银杏叶提取物作用过的细胞,其培养上清中的乙肝表面抗原及乙肝e抗原明显少于未加该药作用者。结论银杏叶提取物可以抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg,且对细胞没有明显的毒性作用。     

组织型转谷氨酰胺酶在肝癌组织中高表达

组织型转谷氨酰胺酶（TGaSe-2）是转谷氨酰胺酶（TGase：EC2．3．2．13）家族发现最早的一个成员，它催化酰基转移反应，使翻译后的多肽链形成交联蛋白，同时具有GTP水解酶的作用。研究表明，TGase-2影响到肿瘤细胞生长、分化、凋亡以及肿瘤转移等生理、病理过程。TGase-2表达的异常或活性的失调，可能与人类乳腺癌㈤、[第一段]