小发卡状RNA介导的人呼吸道黏膜下腺细胞对水通道蛋白5的抑制及其对MUC5AC表达的影响

水通道蛋白5（AQP-5）不仅表达在肺泡Ⅰ型上皮细胞，还广泛分布于外分泌腺腺泡的细胞膜上。近来研究表明AQP-5基因敲除小鼠呼吸道黏膜下腺的分泌下降一半、蛋白浓度升高，说明其在呼吸道黏膜下腺液体分泌中有重要作用。     

血液透析增加患者心肌胶原蛋白糖化氧化(glyoxidation)和脂质过氧化

糖与蛋白质通过非酶促的美拉德反应缩合形成糖化蛋白。在生物体内这一过程与蛋白质氧化密切相关,据此提出蛋白糖化氧化(glyoxidation)的概念。 目的 测定进行血透的尿毒症患者心肌胶原中pentosidine——一种蛋白糖化氧化产     

灌肠技术改进应用体会

儿科常将灌肠技术应用于临床诊断、治疗和护理中。如高热降温 ,镇静 ,局部治疗 ,解除便秘 ,减轻腹胀 ,灌出大便送检等。传统的灌肠方法是将患儿取仰卧位 ,用肛管插入 8～ 1 0 cm。小于 6个月患儿液体量约为 5 0 ml,6个月～ 1岁患儿约为 1 0 0 ml,1～ 2岁患儿约为 2 0 0 ml,2～ 3岁患儿约为 30 0 ml。高热降温用 2 8℃～ 32℃灌肠液。但这种灌肠方法灌肠液保留时间太短 ,且容易污染病床 ,并且不利于操作。通过实践 ,我院对传统灌肠方法进行了改进 ,总结如下。1　一般资料　2 0 0 0～ 2 0 0 2年 6月收治的 1 35例患儿 ,其中细菌性肠炎 5 0例 ,…     

RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株黏蛋白合成及分泌的影响

目的观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5(AQP5)的抑制效果,并观察AQP5抑制后细胞株黏蛋白合成、分泌的变化。方法用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞,并在转染后7d内的不同时点收集细胞,检测AQP5 mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株,用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况。用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化。结果siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65%、79%。对蛋白的抑制在转染后第7d最明显,分别为93%,98%。稳转株(5株)对AQP5蛋白的抑制率为45%~64%。ELISA显示瞬转第5d,MUC5AC的合成和分泌分别增加57.9%、85.3%。在5株稳定转染细胞中(shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5)MUC5AC的合成和分泌分别增加59%~156%及33%~166%。结论化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达,后者较前者更经济,抑制效应更优。与瞬时转染比较,稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后,细胞株黏蛋白的合成、分泌增高。     

上市后药品不良事件自发性报告的数据管理

随着国民经济水平的不断提升，民众的健康需求被广泛重视。各大制药企业纷纷投身新药研究和开发的大潮中，新药的研制成功，既可以满足治疗疾患之需，同时又为制药工业带来了新的发展动力和机遇。但是，药物的安全性，尤其是新药的安全问题，特别需要受到关注和重视，它不仅关系到药物的市场开发和销售前景，更关系到民众的用药安全。     

84例肺结节病临床特征分析

目的:探讨肺结节病的临床特点及诊治方法。方法:分析84例肺结节病患音的临床资料。结果:本组病例有以下临床特征:(1)以中老年女性患者为主,平均年龄48.26岁;(2)症状多样性。胸部X线检查是早期诊断的重要手段,支气管肺泡灌洗液细胞分类对诊断有帮助;(3)确诊依赖组织病理学。经纤支镜粘膜活检及经纵隔镜淋巴结活检诊断阳性率较高。结论:肺结节病临床表现多样,糖皮质激素治疗有一定疗效,但应采取个体化疗法,必要时加用其它免疫抑制剂。     

端粒酶永生化原始乳腺癌组织来源细胞及其意义

背景与目的：乳腺癌细胞系大部分来源于乳腺癌转移所致的胸水或非原始乳腺癌组织来源，与真正的乳腺癌的生物学性状有很大差异。而仅部分细胞系直接由乳腺癌原代细胞在体外培养条件下成为永生化的细胞系，过表达人端粒酶逆转录酶（hTERT）可使正常人上皮细胞永生化。本研究将通过hTERT转染人原始乳腺癌组织来源的细胞建立永生化乳腺癌细胞系，并研究过表达hTERT对其他基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒pBABE-hTERT-puro将hTERT基因导人原始乳腺癌组织来源的细胞，建立稳定表达hTERT的永生乳腺癌细胞。再利用微阵列技术检测乳腺癌细胞中hTERT诱导的基因表达改变。结果：Real-TimeRT-PCR证实hTERT转染后的乳腺癌细胞中hTERT过度并稳定表达，为转染前表达量的1400倍以上，并使得被转染的细胞永生化，可以传40～50代以上。微阵列结果进一步证实hTERT在转染后的细胞中过表达，另外，有22个基因在转染后的乳腺癌细胞中上调，未观察到所有细胞株中均下调的基因。结论：过表达hTERT可导致乳腺癌原代细胞的永生化，并对部分基因有上调作用。     

RNA干扰在哺乳动物中的应用与肿瘤基因治疗

RNA干扰是目前分子生物学研究领域的热点。随着其作用机制和生物学意义逐渐被阐明,它已成为基因治疗学研究的得力工具。它在哺乳动物细胞中的特殊作用机制及应用策略研究也为人类肿瘤性疾病的治疗开辟了一条前景光明的新途径。     

肺癌组织神经生长导向因子Slit2蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究肺癌组织中神经迁移导向因子Slit2蛋白的表达及其临床意义.方法:免疫组织化学法检测56例肺癌组织中Slit2蛋白的表达及微血管密度(microvessal density, MVD).结果:56例肺癌标本中,Slit2阳性率为76.8%,且其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分化程度及临床TNM分期密切相关,P<0.01;而与患者性别和病理类型无关,P>0.05.Slit2蛋白表达与肺癌组织中MVD呈显著正相关,r=0.732,P<0.001.结论:肺癌组织中Slit2表达在肺癌生长和血管生成中起重要作用,其有可能成为反映肺癌进展的指标和抗肿瘤治疗的重要靶点.     

靶向EGFR基因的短发夹RNA对A549细胞生长及药物敏感性的影响

背景与目的已证实非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的过度表达和活化与肿瘤分期、放化疗敏感度下降密切相关.许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤增殖以改善预后,EGFR目前成为公认的肿瘤基因治疗的重要靶点.本研究采用靶向EGFR的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达重组质粒,观察能否在人肺腺癌细胞株A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应及其对A549细胞生长及药物敏感性的影响.方法构建靶向EGFR的shRNA重组质粒(pShEGFR)和非特异性的shRNA重组质粒(pShNEG),阳离子脂质体将其转染至肺腺癌A549细胞分别命名为A549/pShEGFR、A549/pShNEG和对照组A549,免疫荧光和Western blot法检测转染后细胞中EGFR表达变化;克隆形成实验观察细胞生长变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;MTT法检测细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性.结果与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR可显著抑制A549细胞中EGFR表达,转染后第6天抑制率达74.1%(P＜0.01);A549/pShEGFR组细胞克隆形成抑制率为62.8%.与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR组细胞阻滞在G0/G1期(63.2±1.1,64.5±1.4 vs.74.2±0.8;P＜0.01),凋亡细胞比例显著增加(5.8±1.4,7.7±1.2 vs.25.6±1.2;P＜0.01);与A549组相比,A549/pShEGFR可将A549细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性分别提高6.7、5.5、6.6倍.结论瞬时转染靶向EGFR基因的shRNA表达重组质粒能够通过下调EGFR蛋白水平抑制肺腺癌A549细胞生长,并提高细胞对不同化疗药物的敏感性.