不溶性血小板膜微粒止血功能的实验研究

目的:探讨不溶性血小板膜微粒的止血效果.方法:以手工采浓缩血小板为原料,采用冷冻、融化、裂解、洗涤和干燥技术,制备成血小板膜微粒,并在血小板减少兔体内观察其止凝血作用.结果:血小板减少兔注射血小板膜微粒前出血时间与注射后2、4、6 h的出血时间分别比较差异有显著性(均P＜0.01);注射前出血时间与注射后24 h出血时间比较差异无统计学意义(P＞0.05);Russel蝰蛇毒时间检测结果正常对照为(12.64±0.72)s,血小板膜微粒为(14.82±0.79)s,提示血小板膜微粒具有初步促凝作用.结论:血小板膜微粒具有短期止凝血活性.     

乙型肝炎病毒全长基因组的扩增

目的:探讨扩增乙肝病毒全长基因组合适的PCR反应条件。方法:设计针对负链5′末端引物,PCR一步法扩增乙肝病毒全长基因。改变PCR反应条件,决定最佳退火温度和最佳引物浓度,并观察不同乙肝病毒DNA模板量对PCR扩增效率的影响。结果:最佳退火温度为68℃,最佳引物浓度为0.5μmol/L,模板量在150拷贝以上能扩增出乙肝病毒全长基因,但模板量达到105拷贝抑制扩增效率。结论:退火温度为68℃、引物浓度为0.5μmol/L、乙肝病毒DNA模板量在150～105拷贝为乙肝病毒全长基因扩增的合适PCR反应条件。     

海南省医院图书馆现状调查分析

为了全面了解海南省医院图书馆的发展现状,本文通过对海南省县级以上医院图书馆进行问卷调查,分析了存在的问题,提出了有针对性的对策与建议.     

血小板生成素thrombopoietin对神经保护作用的体外研究

目的体外研究血小板生成素（TPO,一种调控巨核细胞和血小板生成的因子）,对神经祖细胞C17.2的保护作用。方法建立无血清条件下C17.2细胞凋亡的模型,用TPO不同浓度处理C17.2细胞,利用MTT、Western blotting、流式细胞技术等方法检测TPO对C17.2细胞的保护作用。结果不同浓度的TPO（0、1、10、50、100、200ng/ml）都能促进C17.2细胞增殖,并且具有剂量依赖性。TPO使磷酸化AKT水平增加,促进神经祖细胞增殖,LY294002可以阻止细胞的增殖。用流式细胞仪方法检测表达Annexin V的细胞减少。结论体外研究显示TPO通过激活PI3K/AKT信号通路,对神经祖细胞C17.2起保护作用,这一发现为临床上神经损伤的治疗提供了新的思路。     

血小板输注无效与对策

血小板输注无效（PTR）困扰临床。引起PTR的原因有免疫因素和非免疫因素，免疫因素主要是HLA抗体和血小板特异性抗体，非免疫因素包括发热、感染、弥漫性血管内凝血（DIC）、骨髓移植（BMT）、脾肿大、药物影响等。针对PTR的原因可采取相应对策，避免免疫因素的影响可以输注去除白细胞的血小板，ABO和血小板交叉配型相合的血小板，解离HLA抗原的血小板．对血小板表面HLA抗原进行化学修饰，紫外线照射血小板，给受者大剂量静脉注射免疫球蛋白；避免非免疫因素，要积极治疗原发病，如发热、感染、DIC、去除药物影响等，脾大患者必要时切脾。     

丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17．2的保护作用

目的:了解丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17.2的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:本实验于2005年起在广州血液中心器官移植配型中心实验室进行。C17.2祖细胞系由澳大利亚新南威尔士大学解剖教研室David Walsh博士惠赠。将C17.2细胞以1×109L-1的密度接种,用含10%胎牛血清IMDM,37℃、体积分数为0.05CO2、饱和湿度的CO2培养箱培养,接近融合的C17.2细胞用含0.1mmol/LEDTA的胰酶室温消化,按1∶3的比例传代。C17.2细胞以5×107L-1的密度接种于96孔板或25cm2的培养瓶中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/L AAPH(水溶性偶氮引发剂2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐)无血清的IMDM培养基培养建立神经细胞凋亡模型。C17.2细胞以5×103/孔的密度接种于96孔板中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/LAAPH无血清的IMDM培养基培养。对照组不加入丹参酮ⅡA,实验组分别加入0.02,0.05,0.1,0.2mg/L丹参酮ⅡA培养8h,噻唑蓝法检测细胞活性:细胞活性的相对值=(实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①AAPH处理8h后,C17.2细胞被过氧化损害,大多数细胞失去正常的形态,细胞呈圆形,脱落。加入丹参酮ⅡA后,细胞形态基本保持正常,少数细胞呈圆形。②C17.2细胞在IMDM的培养液中,细胞数量是含4g/L AAPH无血清的IMDM培养基条件下的2.5～3倍。浓度为0.02,0.05,0.1mg/L的丹参酮ⅡA对C17.2细胞有保护作用,质量浓度大于0.2mg/L丹参酮ⅡA对C17.2细胞保护作用降低。③AAPH作用前大部分C17.2细胞的线粒体完整,有少量的早期凋亡细胞和凋亡细胞,AAPH作用后凋亡细胞总数、凋亡细胞明显增加。丹参酮ⅡA处理组可以明显减少早期凋亡细胞。结论:在体外丹参酮ⅡA对神经细胞具有抗凋亡的作用,可以保护神经细胞。     

γ射线辐照对血液质量的影响

目的　探讨用灭活淋巴细胞剂量的γ射线辐照对血液质量造成的影响。方法　用淋巴细胞转化试验找出能灭活淋巴细胞的最小剂量 ,以此剂量辐照 ,对辐照前后的标本作红细胞渗透脆性试验 ;用血细胞计数仪对辐照前后血标本作RBC、Hct、MCV、Plt、MPV检测 ;用生化分析仪检测辐照前后血清中K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度的变化 ;用瑞氏染色法观察辐照前后RBC及Plt的形态变化 ;用CD4 1a、CD6 2 p标记辐照前后血小板标本后 ,用流式细胞仪检测其阳性率。结果　辐照前后标本RBC、Hct、MCV、Plt、MPV无变化 ;RBC、Plt形态无改变 ;K+ 、Na+ 、Cl-、Ca2 + 浓度无变化 ;CD4 1a、CD6 2p阳性率无变化。结论　血液成分经 35Gyγ射线辐照后 ,淋巴细胞被灭活 ,而RBC、Plt的数目、形态及其功能都不受影响     

核黄素联合紫外线A照射对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果

目的考察核黄素联合紫外线A对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。方法以伪狂犬病毒为模拟病毒,以Vero细胞为培养细胞,用病毒感染细胞,制备病毒增殖液;分别采用5、10、15及20J/cm2联合核黄素处理血浆,观察处理前后血浆病毒灭活的效果,筛选灭活病毒合适的紫外线剂量;将含有伪狂犬病毒血浆的样本分为实验组:采用上述筛选的紫外线强度照射联合核黄素处理;对照组1:单独采用紫外线A照射;对照组2:单独采用核黄素处理;阴性对照组:未采用紫外线照射和核黄素处理;分别在实验前后采用96孔细胞病变法,对照细胞病变效应,根据Reed-Muench公式计算病毒滴度。结果采用不同强度的紫外线联合核黄素处理血浆,紫外线强度为15及20J/cm2的灭活血浆病毒的效果明显,处理后病毒滴度分别下降4.55和4.39logs;实验组和对照组1病毒滴度分别下降4.55和4.28logs,有统计学意义(P<0.05);对照组2病毒滴度降低1.93logs,没有病毒灭活效果。结论核黄素联合紫外线可灭活血浆中伪狂犬病毒,单独紫外线照射也具有灭活血浆伪狂犬病毒的效果;而仅单独采用核黄素处理而未联合紫外线照射,对血浆中伪狂犬病毒灭活效果不明显。