N,O-羧甲基壳聚糖对小白鼠精子畸形的影响

目的:观察能明显促进禽类等动物的生长发育,改善肉质的新型饲料添加剂N,O-羧甲基壳聚糖对昆明种小白鼠精子畸形的影响,分析其应用在畜牧生产中的安全性。方法:实验于2005-06-22/2005-08-06于南京农业大学动物医学院药理组实验室完成。挑选体质量25～28g的小鼠50只,以随机数字表法分为生理盐水组、环磷酰胺组、N,O-羧甲基壳聚糖(南京龙源天然多酚合成厂提供,商品名为毕罗喜,质量浓度为105g/kg)2,4,8g/kg剂量组,每组10只。N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组分别给予相应剂量的N,O-羧甲基壳聚糖,溶于1mL生理盐水,2,4g/kg剂量1次灌服,8g/kg剂量分2次灌服,每次间隔约3h;生理盐水组给予生理盐水1mL;环磷酰胺组给予环磷酰胺0.04g/kg,溶于1mL生理盐水。给药前禁食10h,不禁水。连续灌胃5d,给药后30d麻醉下处死,取两侧附睾按Wyrobek方法涂片,观察小白鼠精子畸形状况。评估标准参照农业部兽药评审委员会办公室编写的兽药试验技术规范汇编(2001年)。评估内容参照沈建忠主编的动物毒理学(中国农业出版社,2002年),包括各种畸形的精子形态:不定形、胖头、香蕉头、无钩、双头(多头)和双尾(多尾)等,及其分类计数。每组随机选取5只小鼠,计算总畸形率。精子畸形率(%)=畸形精子总数/检查精子总数×100。结果:最终25只小鼠进入结果分析,每组5只。①环磷酰胺组的精子畸形率远高于生理盐水组和N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组(6.10%,2.48%,2.46%,2.64%,2.78%,P<0.01);N,O-羧甲基壳聚糖2,4,8g/kg剂量组与生理盐水组比较,差异无显著性意义(P>0.05),且各剂量组之间差异也没有显著性意义(P>0.05)。②各组精子畸形主要表现为头部或尾部异常。以无定形和胖头居多,占35.48%(292/823)和29.28%(241/823);其次是无钩形及香焦形多见,占19.68%(162/823)和13.49%(111/823);偶尔可见双头双尾形,只占2.07%。结论:N,O-羧甲基壳聚糖精子畸形试验结果呈阴性,说明其对雄性生殖细胞没有明显的遗传毒性。     

氟尼辛葡甲铵的解热镇痛效应

目的:通过小白鼠醋酸扭体法、家兔蛋白胨致热法观察氟尼辛葡甲铵的解热、镇痛作用。方法:实验于2004-03/06在南京农业大学药理及毒理教研室实验室完成。①小鼠扭体实验:取清洁级KM小鼠80只按随机数字表法分为8组,每组10只:双氯芬酸钠16.25mg/kg组、安乃近32.5mg/kg组、氟尼辛葡甲铵10,5,2.5,1.25,0.625mg/kg组、生理盐水对照组。除双氯芬酸钠采取口服外,其余各组分别肌肉注射相应剂量的药品,生理盐水对照组给予等体积量的生理盐水。给药30min后立即给各组小鼠腹腔注射1.2%的冰醋酸溶液0.2mL/只,观察记录15min内出现扭体反应的次数。②蛋白胨致热实验:健康家兔36只,按随机数字表法分成6组,每组6只:空白对照组(生理盐水1mL/kg)、氟尼辛葡甲铵1,2,4mg/kg组、安乃近0.2g/kg组和氨基比林0.2g/kg组。实验前测定各组兔子的直肠体温。在家兔大腿肌肉注射40%蛋白胨,剂量为2mL/kg,然后按上述分组分别给予相应的药物。给药后8h内每小时各测体温1次。结果:80只小鼠和36只家兔均进入结果分析,中途无脱落。①与生理盐水对照组相比,安乃近32.5mg/kg组、氟尼辛葡甲铵10,5,2.5,1.25mg/kg组和双氯芬酸钠16.25mg/kg组对醋酸所致小鼠的扭体反应有显著的镇痛作用[(4.3±4.1),(10.4±5.7),(0.0±0.0),(0.9±1.9),(1.8±2.4),(3.2±4.2),(3.6±3.9)次/15min;P<0.05,P<0.01]。②与空白对照组比较,氟尼辛葡甲铵高、中剂量组及安乃近0.2g/kg组、氨基比林0.2g/kg组对由蛋白胨引起的家兔发热,在给药后4～8h均有显著的抑制作用(P<0.05),氟尼辛葡甲铵高、中剂量和安乃近0.2g/kg组在给药后6～8h作用极显著(P<0.01)。氟尼辛葡甲铵高剂量组在给药后5～7h显著强于安乃近0.2g/kg组(P<0.05),与氨基比林0.2g/kg组相比,差异极显著(P<0.01)。氟尼辛葡甲铵中剂量组作用稍逊于安乃近0.2g/kg组,差异不显著。氟尼辛葡甲铵低剂量组与氨基比林0.2g/kg组相当。结论:氟尼辛葡甲铵具有明显的解热、镇痛作用。     

壳聚糖絮凝法澄清复方黄芪水提液的工艺研究

目的优选最佳的复方黄芪水提液的壳聚糖澄清工艺。方法经预试验确定澄清剂的大致剂量,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以药液絮凝度和多糖含量为指标,以壳聚糖加入量、絮凝温度、絮凝时间为考察因素,采用正交试验摸索最优的壳聚糖絮凝条件。结果得到了最优的絮凝工艺,即药液中壳聚糖最佳用量为2 g/L,20℃的温度下絮凝24 h。结论壳聚糖絮凝法简便易行,经济实用,制剂澄清效果好。     

壳聚糖对大鼠的致畸胎试验

背景与目的:通过在胚胎器官形成期连续给药,观察壳聚糖对大鼠的胚胎毒性和致畸毒性.材料与方法:将90只妊娠SD大鼠按时间先后随机分为5组,即阴性对照组、壳聚糖50、250、1000 mg/k剂量组和阳性对照组,每组18只.在大鼠胚胎器官形成期(妊娠的第6～15 d),壳聚糖各剂量组和阴性对照组连续给受试物10 d,每日经口灌胃分别给予壳聚糖和生理盐水,阳性对照组在孕期第11～13 d每天腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)7 mg/kg,在妊娠的第20 d处死大鼠进行胎鼠检查.结果:壳聚糖对孕鼠的健康状况、行为、增重和生殖机能无明显影响;对胎鼠的生长发育无明显影响;对胎鼠的外观、骨骼和内脏无致畸作用.结论:在≤1000 mg/kg剂量下,壳聚糖对大鼠无胚胎毒性和致畸毒性.     

聚肌胞对小鼠的急性毒性和蓄积毒性

目的:测定非病毒类干扰素诱导剂聚肌胞对昆明种小鼠的急性毒性和蓄积毒性。方法:实验于2006-04/05在南京农业大学药理与毒理教研室实验室完成。实材料:聚肌胞注射液(南京富纳生物技术有限公司),批号:060509-3,规格为3mg/mL。清洁级昆明种小鼠购自南京中医药大学实验动物中心(动物生产许可证号为SYXK(苏)2005-0009)。实验方法:①急性毒性实验:选取体质量18～22g的50只小鼠,按随机数字表法分为5组,每组10只,雌雄各半,用药前6h禁食不禁水。在预实验基础上确定各组小鼠聚肌胞注射液用药量,相邻的两组间剂量的比值r为1.2。5组小鼠具体用药剂量为36.17,43.40,52.08,62.50,75.00mg/kg。每只小鼠按0.25mL/10g体质量腹腔注射,不同剂量组按同体积不同浓度给药。②蓄积毒性实验:选取体质量15～18g小鼠60只,随机数字表法分为聚肌胞蓄积毒性实验组40只,对照组20只,各组小鼠雌雄均各半。采用剂量递增连续染毒法来评价聚肌胞的蓄积毒性,以LD50为基础选择剂量,起始剂量为0.1LD50,4d为1期,按1.5倍等比级数递增,分5期共20d。将药用生理盐水配成适合的浓度,每天按体质量1次性腹腔注射给药,每只小鼠给药体积均为0.25mL/10g,连续给药20d,对照组小鼠给予相同容积的生理盐水。实验期间观察小鼠一般表现并按时称体质量,记录小鼠死亡的情况并计算蓄积系数,观察各组小鼠对聚肌胞的耐受性。结果:110只小鼠均进入结果分析。①急性毒性实验:各组小鼠注射聚肌胞后均表现行动迟缓,精神沉郁,畏寒扎堆,被毛竖立,用药后3h呈现不同程度的腹泻,4h后相继出现死亡。小鼠的死亡多集中在用药后4～12h,用药后24h未死亡小鼠的精神、食欲都逐渐恢复,继续观察6d未见小鼠再有死亡。小鼠腹腔注射聚肌胞注射液的LD50为59.73mg/kg,LD5095%可信限为:29.49～120.97mg/kg。②蓄积毒性实验:实验组小鼠未发现有明显毒性反应,无小鼠死亡。实验组小鼠体质量与对照组相比差异不显著(P>0.05)。③耐受性实验:实验组小鼠死亡率明显低于对照组(0,20%,P<0.01)。结论:聚肌胞腹腔注射对小鼠毒性较大,但相对于临床应用剂量,聚肌胞注射液的使用仍较为安全;聚肌胞注射液对小鼠没有或仅有轻微的蓄积毒性,小鼠对本品可产生明显的耐受性。     

N,O-羧甲基壳聚糖对小白鼠精子畸形的影响

目的：观察能明显促进禽类等动物的生长发育。改善肉质的新型饲料添加剂N，O-羧甲基壳聚糖对昆明种小白鼠精子畸形的影响，分析其应用在畜牧生产中的安全性。 方法：实验于2005—06—22／2005—08—06于南京农业大学动物医学院药理组实验室完成。挑选体质量25～28g的小鼠50只，以随机数字表法分为生理盐水组、环磷酰胺组、N，O-羧甲基壳聚糖（南京龙源天然多酚合成厂提供，商品名为毕罗喜，质量浓度为105g／kg）2，4，8g／kg剂量组，每组10只。N，O-羧甲基壳聚糖2，4，8g／kg剂量组分别给予相应剂量的N，O-羧甲基壳聚糖，溶于1mL生理盐水，2，4g／kg剂量1次灌服，8g／kg剂量分2次灌服。每次间隔约3h；生理盐水组给予生理盐水1mL；环磷酰胺组给予环磷酰胺0．04g／kg，溶于1mL生理盐水。给药前禁食10h，不禁水。连续灌胃5d，给药后30d麻醉下处死，取两侧附睾按Wyrobek方法涂片。观察小白鼠精子畸形状况。评估标准参照农业部兽药评审委员会办公室编写的兽药试验技术规范汇编（2001年）。评估内容参照沈建忠主编的动物毒理学（中国农业出版社，2002年），包括各种畸形的精子形态：不定形、胖头、香蕉头、无钩、双头（多头）和双尾（多尾）等，及其分类计数。每组随机选取5只小鼠，计算总畸形率。精子畸形率（％）=畸形精子总数／检查精子总数&;#215;100。 结果：最终25只小鼠进入结果分析，每组5只。①环磷酰胺组的精子畸形率远高于生理盐水组和N，O-羧甲基壳聚糖2，4，8s／kg剂量组（6．10％，2．48％，2．46％，2．64％，2．78％，P〈0．01）；N，O-羧甲基壳聚糖2，4，8g／kg剂量组与生理盐水组比较，差异无显著性意义（P〉0．05），且各剂量组之间差异也没有显著性意义（P〉0．05）。②各组精子畸形主要表现为头部或尾部异常。以无定形和胖头居多，占35．48％（292／823）和29．28％（241／823）；其次是无钩形及香焦形多见，占19．68％（162／823）和13．49％（111／823）；偶尔可见双头双尾形，只占2.07％。 结论：N，O-羧甲基壳聚糖精子畸形试验结果呈阴性，说明其对雄性生殖细胞没有明显的遗传毒性。     

慢性镉接触大鼠免疫细胞活性和免疫介质变化探讨

目的研究镉(Cd)致大鼠血中几种免疫介质、脾脏淋巴细胞转化和NK细胞活性变化,探讨慢性Cd接触对大鼠免疫介质释放和免疫细胞活性的影响。方法选择健康SD雌性成年大鼠54只,随机分成对照组,低剂量氯化镉组,高剂量氯化镉组。对照组每天给予普通全价饲料,低、高Cd组分别饲喂含镉2和10 mg/kg的全价饲料,连续9周。分别在第3、6和9周采集血样和脾脏进行分析。结果在整个实验期内,Cd诱导血浆环磷酸腺苷(cAMP)水平升高,且第3周高Cd组及第9周低Cd组与对照组差异显著;Cd接触大鼠血浆NO均升高,且高Cd组显著高于对照组(P<0.05);Cd诱导血浆白细胞介素-2(IL-2)水平下降、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平上升,但与对照组差异不明显。慢性Cd接触大鼠脾脏淋巴细胞转化刺激指数均显著低于对照组,NK细胞活性随剂量增加和时间的延长而明显下降。结论慢性Cd接触诱导大鼠免疫细胞活性抑制,一些免疫介质发生紊乱和较大变化可能在介导免疫细胞功能活动低下发生过程中有重要作用。     

聚肌胞不同给药方式对鸡α干扰素诱生作用的研究

聚肌胞（Polyinosinic：polycytidylic acid，Poly I：C）于1958年由Davies等最先发现，自1967年Field等发现低剂量的聚肌胞可在动物血清中诱导产生高滴度的干扰素后，在世界范围内引起轰动。国内外很多学者参与了聚肌胞的研究，研究发现聚肌胞是迄今为止最强的非病毒干扰素诱生剂。有关聚肌胞在人类和多种动物体内诱生干扰素的报道已有很多，但有关其对鸡体内诱导产生干扰素的研究尚未见报道。本文以聚肌胞为诱生剂，探讨了不同给药方式对鸡血液中鸡α干扰素（ChIFN-α）含量及其消长规律的影响。     

反相高效液相色谱法测定血浆中的安替比林

目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)检测血浆中安替比林的方法。方法:血浆经乙腈提取后进样测定,色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为0.025 mol.L-1醋酸钠溶液-乙腈(74 26,v/v),流速为0.8 ml.min-1,检测波长为254 nm,进样量20μl。结果:血浆安替比林浓度在0.1~30μg.ml-1范围内线性关系良好(r=0.9995),样品的平均回收率为93.44%~97.21%,日内和日间变异系数小于4.26%。结论:方法简便、准确可靠,适用于安替比林消除动力学模型的研究。     

两种低聚糖对乳酸菌体外增殖的影响

目的:观察低聚异麦芽糖和低聚果糖对禽源嗜酸乳杆菌、乳酸乳杆菌和乳酸链球菌体外增殖的影响。方法:实验于2004-03/07在南京农业大学动物医学院药理毒理实验室完成。乳酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌分离自健康雏鸡肠道中。实验分别在MRS肉汤培养基中和普通肉汤培养基中进行,观察低聚糖对3株乳酸菌增殖的影响。每个部分分为干预情况相同的3组,分别为低聚异麦牙糖组、低聚果糖组和对照组,两种低聚糖的添加浓度为30g/L。每组每株菌初始接种浓度为108cfu/L,分别于0,24,48h,取菌液进行平板计数,观察每组乳酸菌的生长情况。结果:在MRS培养基中,随着时间的延长,低聚异麦芽糖组和低聚果糖组3株乳酸菌的菌落对数值增加,与对照组相比,差异无显著性意义[嗜酸乳杆菌:(5.00±0.15),(7.76±0.15),(8.99±0.30);(5.00±0.01),(7.81±0.14),(8.87±0.08);(5.00±0.04),(7.25±0.15),(8.30±0.21);乳酸乳杆菌:(5.00±0.14),(7.97±0.10),(9.26±0.31);(5.00±0.07),(8.12±0.17),(9.24±0.24);(4.90±0.09),(7.40±0.64),(8.79±0.05);乳酸链球菌:(5.00±0.01),(8.59±0.30),(9.41±0.28);(5.00±0.08),(8.64±0.31),(9.56±0.11);(5.00±0.03),(8.16±0.21),(8.98±0.19);P>0.05];在营养贫瘠的普通肉汤培养基中,乳酸菌在前24h处于增殖阶段,不过增殖幅度较为缓慢,而24～48h乳酸菌活菌数量呈现下降趋势;添加低聚异麦芽糖和低聚果糖,3株乳酸菌的增殖速度明显加快,24h和48h乳酸菌数量与对照组比较,差异有显著性意义[嗜酸乳杆菌:(5.0±0.15),(7.24±0.32),(8.56±0.27);(5.00±0.17),(7.20±0.31),(8.69±0.15);(5.00±0.24),(6.42±0.45),(6.03±0.24);乳酸乳杆菌:(5.00±0.06),(7.66±0.34),(8.99±0.64);(5.00±0.12),(7.98±0.08),(8.86±0.25);(4.90±0.08),(6.24±0.53),(5.83±0.05);乳酸链球菌:(5.0±0.14),(8.43±0.24),(9.33±0.21);(5.00±0.02),(8.50±0.33),(9.19±0.40);(5.00±0.09),(7.56±0.45),(7.44±0.06),P<0.05]。提示低聚异麦芽糖和低聚果糖可促进乳酸菌的生长增殖。结论:低聚异麦芽糖和低聚果糖可促进禽源乳酸菌的生长增殖,在普通肉汤培养基中增殖效果更加明显。