血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化

目的 探讨血清反应因子(serum response factor,SRF)在大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为膀胱平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)中的作用和机制.方法 贴壁法分离4周龄雌性SD大鼠的骨髓MSCs与膀胱SMCs,通过Transwell小室共培养诱导MSCs分化.收集MSCs,根据共培养不同时间点进行分组,通过实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测共培养SRF MSCs中SMCs标志基因表达;通过染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)定量PCR技术检测SMCs相关基因启动子区组蛋白乙酰化修饰、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)和SRF的富集.丁酸钠(sodium butyrate,NaB)预处理MSCs后与SMCs共培养,实验分为正常共培养对照组和NaB预处理干预组,ChIP-qPCR对比两组间组蛋白修饰和SRF富集情况.结果 共培养MSCs中,α-SMA、Calponin和SM-MHC基因表达量增加,在这些基因启动子区H3K9ace,H3ace和H4ace富集量增加(P＜0.05),同时MSCs中HDAC1和HDAC2降低(P＜0.05).与对照组相比,NaB干预组SRF、H3K9ace和H4ace富集量增加(P＜0.05).结论 SRF可能在HDAC1和HDAC2调节下通过结合H3K9ace和H4ace控制SMCs标志基因表达,从而促进MSCs向SMCs的分化.     

腹腔镜检查诊断536例结核性腹膜炎分析

目的：评价诊断性腹腔镜检查在结核性腹膜炎的价值和安全性。方法：对1983年-2001年536例腹腔镜检查诊断为结核性腹膜炎的病例进行回顾性分析。结果：有527例患者成功行腹腔镜检查并确诊为结核性腹膜炎(98．3％)，有6例气腹失败(1.1％)，有3例因腹腔镜检查时肠管损伤行剖腹肠管修补术(0．6％)。在536例病例中，渗出型有67例(12．5％)，粘连型有183例，(34．1％)，干酪型286例(53．4％)。粘连型腹腔镜检查失败率和并发症均明显高于渗出型和干酪型。结论：腹腔镜检查是一种安全、诊断准确率高的检查方法。对结核性腹膜炎的诊断具有重要价值。     

卵巢癌手术治疗新进展

<正>卵巢癌是影响女性健康和生命的严重疾病,其病死率居妇科肿瘤之首。2015年中国癌症统计数据显示,我国每年新发卵巢癌病例5. 21万人,死亡2. 25万人~([1])。卵巢癌发病隐匿,诊断多在晚期,手术和化疗是其治疗的主要方法,但即使治疗达到完全缓解,70%的晚期卵巢癌患者会在1～2年内复发。近年来随着科学和技术的进步,妇科肿瘤医生和科研工作者通过卓越的探索,从手术到药物,进行了大量的临床试验,更新了手术理念和化疗方案,以及以PARP抑制剂为代表的创新靶向药物的研制,让卵巢癌患者的生存时间不断延长,使卵巢癌真正成为一种伴随患者终身的慢性疾病。     

2型糖尿病并发抑郁症的危险因素及胰岛素干预和抑郁程度关系的研究

目的:探讨2型糖尿病并发抑郁症的独立危险因素及胰岛素治疗对抑郁程度的影响。方法:根据抑郁量表评分将299例2型糖尿病患者分为抑郁组159例和非抑郁组140例,再根据治疗方式将抑郁症组分为非胰岛素干预组81例和胰岛素干预组78例。通过汉密顿抑郁量表评分评估患者的抑郁情况,并结合反映糖尿病病情的相关指标,如性别、年龄、体质量指数、是否应用胰岛素、病程、糖尿病并发症数目、糖化血红蛋白、三酰甘油和总胆固醇等,分析可能导致糖尿病患者并发抑郁症的指标及使用胰岛素干预糖尿病与抑郁程度的关系。结果:299例患者中发生抑郁症159例(53.18%),未并发抑郁症140例(46.82%);糖尿病并发抑郁症与糖化血红蛋白(OR=2.680)、年龄(OR=2.431)、女性(OR=3.055)、糖尿病并发症数目(OR=1.802)显著相关;胰岛素治疗组抑郁程度较非胰岛素治疗组轻。结论:年龄、女性、糖化血红蛋白、糖尿病并发症数目是2型糖尿病并发抑郁症的独立危险因素,存在胰岛素治疗适应证的2型糖尿病患者需尽早使用胰岛素控制病情。     

丁酸钠对大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)丁酸钠对在体外与膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)接触共培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化能力的影响。方法常规培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代,种植于多孔膜两侧进行接触共培养。实验组BMSCs培养上室面添加含3 mmol/L丁酸钠诱导其分化;对照组不含丁酸钠行接触共培养。免疫荧光化学染色法对2组BMSCs中平滑肌标志性蛋白calponin进行检测,同时用逆转录PCR(RT-PCR)和荧光定量PCR法(real-time PCR)对BMSCs中平滑肌α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、calponin、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SM-MHC)行进鉴定。结果大鼠原代BMSCs流式检测显示CD29、CD44、CD166表达阳性,阳性率分别为96.55%、92.76%、99.54%;CD31、CD45表达阴性,阳性率为1.39%、5.56%。BSMCs鉴定α-SMA、calponin、SM-MHC 3种标志性蛋白的表达均为阳性。细胞免疫荧光染色显示平滑肌标志性蛋白calponin的表达均随时间的延长而增加,实验组表达强度明显高于对照组。RT-PCR和荧光定量PCR显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、calponin、SM-MHC随共培养时间的延长逐渐增多,与对照组比较有明显差异(P<0.05)。结论 HDACi丁酸钠可以增强BMSCs向平滑肌细胞的分化能力,提示提高组蛋白乙酰化程度可以促进BMSCs分化。     

依达拉奉对急性脑出血的抗氧化作用

82例急性脑出血患者随机分为常规治疗组和依达拉奉组,依达拉奉组在常规治疗基础上给予依达拉奉治疗10 d。与治疗前比较,两组患者治疗后血清一氧化氮、过氧化脂质水平明显降低,谷胱甘肽过氧化物酶及超氧化物歧化酶水平明显升高,依达拉奉组优于常规治疗组。提示急性脑出血患者早期应用依达拉奉治疗可以减轻或防止继发性脑损伤,促进细胞功能的恢复。     

FSHR胞外区基因片段的原核表达及多克隆抗体的制备

目的 构建人卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)胞外区的原核表达载体,并用纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备抗血清.方法 采用RT-PCR克隆人FSHR胞外区,将其克降到原核表达载体pET32a(+),并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达,所获得的包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出1 047 bp目的 基因片段,测序证实克隆的基因序列与GenBank中的FSHR序列相符.工程菌pET32 a(+)/FSHR胞外区经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为58 000,与预期的一致.其表达形式为不溶性包涵体,此包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,纯化的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.该蛋白免疫小鼠制备抗血清,抗体效价为1:12 800,Western blot检测证实该抗体能与目的 蛋白发生特异性结合.结论 获得了人FSHR胞外区融合蛋白及特异性多克隆抗体,为进一步研究FSHR蛋白的功能奠定了基础.     

敲除Smad4基因对小鼠肝纤维化与肝癌发生和发展的影响

目的 探讨敲除Smad4基因对转化生长因子β1(TGFβ1)信号传导系统和对肝纤维化及肝癌发生和发展的影响.方法 采用CCl_4/乙醇分别诱导野生型小鼠(Smad4+/+)与Smad4基因敲除小鼠 (Smad4+/-)20周,观察每组小鼠发生肝纤维化和肝癌的情况,并采用RT-PCR方法检测Smad4、TGFβ1、Smad2、Smad3、Smad6,基质金属蛋白酶抑制剂1、基质金属蛋白酶2、9等基因的mRNA表达程度.采用χ~2检验与t检验进行统计学处理. 结果 纤维化肝脏Smad4的表达较正常对照组明显增强.与野生型相比,Smad4杂合子小鼠的TGFβ1-Smads信号传导系统有所减弱.经CCl_4/乙醇诱导后,总体上Smad4杂合子小鼠发生肝纤维化的程度 (评分为2.12±0.88)显著低于野生型小鼠 (评分为2.87±0.88,t=3.163,P=0.003);Smad4杂合子小鼠组的肝癌发生率 (32.0%) 也明显低于野生型小鼠组 (41.9%).结论 敲除Smad4基因能有效弱化TGFβ1信号传导,从而减缓肝纤维化的程度;同时,能减缓肝癌的发展进程.     

形状记忆输卵管避孕材料的急性毒性研究

目的 探明形状记忆输卵管避孕材料的急性毒性,为临床的安全使用提供依据和资料.方法 形状记忆输卵管避孕材料浸提液腹腔注射给药,以最大允许给药剂量为最高剂量,观察小鼠的死亡率和脏器的感官病理改变.连续观察14d.结果 给药后,各种剂量下均未见中毒症状,动物活动自如,皮毛光滑,未出现死亡.存活动物体质量无明显变化;肉眼未见脏器明显的病理改变.结论 形状记忆输卵管避孕材料急性单次接触条件下的生物安全性良好.     

miRNA与肿瘤及子宫颈癌的研究进展

研究发现,RNA的种类除包括与蛋白合成直接相关的rRNA、tRNA和mRNA等分子外,尚有许多非编码RNA,参与基因的表达调控、RNA的定点修饰,以及染色质结构的组织等.