蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区神经干细胞增殖潜能的影响

目的: 观察侧脑室注射蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖能力的影响,了解蛋白酶体对NSCs增殖潜能的调控作用,从而进一步探讨蛋白酶体在帕金森病(PD)等老年性疾病神经元损伤中的可能作用机制。方法: 选90日龄健康BALB/c小鼠,左侧侧脑室注射10 μg MG132,于注射后3 d、7 d、14 d提取SVZ总蛋白,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性。同时腹腔注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU免疫荧光染色标记NSCs,动态观察蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力的影响。另设溶剂对照组左侧侧脑室注射等剂量DMSO,进行上述实验。结果: 侧脑室注射MG132 3 d、7 d后,SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组显著降低(P<0.05),同时SVZ BrdU⁺ NSCs也显著减少至21±4和22±3,与DMSO对照组相比差异显著(P<0.05)。随着MG132注射时间延长,14 d后SVZ蛋白酶体活性恢复至正常水平(P＞0.05),BrdU⁺ NSCs数量MG132组(82±4)与DMSO组(67±6)相比无显著差别(P＞0.05)。结论: 应用蛋白酶体可逆性抑制剂MG132短时期内能显著抑制SVZ蛋白酶体活性,并且能够降低NSCs增殖能力,提示蛋白酶体活性与NSCs增殖潜能密切相关。     

不同形式游泳运动后大鼠孤束核内c-fos的表达

目的:建立不同形式大鼠游泳运动模型,探讨运动后大鼠孤束核内c-fos的表达及其时效性分布规律。方法:将55只正常雄性SD大鼠随机分为对照组(5只)、持续游泳运动组(25只)和间歇游泳运动组(25只)。持续游泳运动组和间歇游泳运动组通过6周游泳训练建立运动模型,在运动结束后0、0.5、1、2、4 h等不同时间点取材,冰冻切片,SABC法行免疫组织化学染色,计数孤束核内c-fos阳性神经元的数目,并进行统计学分析。结果:持续游泳运动组大鼠c-fos阳性神经元数在运动结束后逐渐增加,至0.5 h达高峰,之后回落,2 h时达运动后的低点,而后重新升高。间歇游泳运动组大鼠运动后孤束核内c-fos阳性神经元数显著增高至峰值,之后下降,至0.5 h后重新缓慢升高至接近于峰值水平,并维持于这一较高的表达水平。结论:孤束核在大鼠不同游泳运动后机体的调节作用中起重要作用。     

20S蛋白酶体β5亚单位基因沉默对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的:应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点。方法:构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白(GFP)对照组和shRNA组。倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1(cyclin D1)及其激酶CDK4的表达变化。结果:慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95%以上细胞表达绿色荧光蛋白。shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31%±0.59%和56.83%±13.31%,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47%±0.41%。此外,shRNA组BrdU阳性率26.14%±8.13%较对照组49.53%±11.18%显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55%±7.76%和63.26%±15.76%。结论:PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能。     

两种脓毒症模型小鼠血清白细胞介素-6与其早期生存率的关系

目的探讨盲肠结扎穿孔( CLP)、腹腔持续置管引流( CASP)脓毒症模型小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)与其早期生存率的关系。方法将60只雄性BALB/c小鼠编号,采用数字表法随机分为3组,即假手术组( Sham组)、CLP组、CASP组,各20只。 CLP组小鼠麻醉后,于中下腹正中线做纵行切口,充分暴露并结扎盲肠,用18 G注射器针头在结扎部位远端穿孔并来回贯穿2次,将少量肠内容物挤出,回纳盲肠,缝合腹壁切口。 CASP组术前准备、开腹方式同CLP模型,暴露小鼠升结肠系膜,在其对侧处插入静脉导管,退出针芯,荷包缝合并固定、剪断静脉导管,将游离端放置于腹腔内。用棉签挤压肠管,使少量肠内容物从导管口溢出,以确认导管通畅。 Sham组术前准备、开腹、术后处理同CLP组,不行盲肠结扎、穿孔。观察各组小鼠术后12、24、36、48、60、72 h的生存率。术后6 h采集各组小鼠尾静脉血,采用 ELISA 检测血清 IL-6,比较此时间点3组存活小鼠间 IL-6水平以及CLP组、CASP组的存活和死亡小鼠间IL-6水平。结果 Sham组、CLP组和CASP组术后72 h生存率分别是100.0%(20/20)、45.0%(9/20)和10.0%(2/20),3组间总体比较差异有统计学意义(字2=32.970,P<0.01),两两比较3组间差异均有统计学意义(P值均<0.05);3组小鼠生存时间曲线经Log-rank检验,差异有统计学意义(字2=34.030,P<0.05)。术后6 h,Sham组、CLP组、CASP组存活小鼠血清 IL-6水平分别是(36.62依10.30) ng/L、(2443.47依970.50) ng/L、(4057.93依827.41)ng/L,差异均有统计学意义(Hc=29.270,P<0.01);CLP组和CASP组各组内存活小鼠血清IL-6水平平均分别为(1348.80依276.25) ng/L、2100.00 ng/L,明显低于死亡小鼠的(3157.29依330.94)ng/L、(4275.48依512.71)ng/L,CLP组差异有统计学意义(t=13.071,P<0.01)。结论两种脓毒症模型小鼠的转归都有一定的病死率,较好地模拟了脓毒症的病理生理过程,CLP模型侧重于模拟局限性腹腔脓肿,CASP模型则侧重于模拟弥漫性腹膜炎。 CLP组模型术后6 h血清IL-6水平较低的小鼠,术后72 h生存率较高。     

四肢长管骨骨髓腔最狭窄部位的测定

<正> 四肢骨折或骨病患者,在应用髓内针或人工关节时,若不了解髓腔内径最狭窄部位所在处,而盲目插入髓内针或人工关节时,常常在通过髓腔最狭窄点时会产生新的骨折或造成手术的困难与失败。我们于1986年至1987年选用国人肱骨、尺骨、桡骨、股骨、胫骨及腓骨,分别进行髓腔内径的测量。得知四肢长管骨髓腔内径的最狭窄点与最狭窄区。为骨科医生及医疗器械厂家提供参考。一、材料和方法采用成人非同一个体左、右侧的干燥肱骨、尺骨、股骨、腓骨各30支,桡骨、胫骨各20支沿矢状面,纵行锯开,从其正中点分别向近端和远端,每隔1～2cm用游标卡尺测量骨髓腔内径。     

清除免疫细胞化学中的非特异性染色

本文介绍两种简单易行的免疫细胞化学染色方法，以清除实验中出现的非特异性染色。此两种方法做出的切片背景浅淡，被染色的阳性神经元胞体清晰可见，突起呈串珠状。     

颊间隙的解剖学结构及其临床意义

目的 为了给颊间隙疾病的诊治提供解剖学基础，探讨颊间隙的解剖边界、内容物及其与颊间隙疾病的关系。方法 选用成年尸体头颈部5例，逐层解剖分离，观察颊间隙的解剖结构、内容物以及与相邻组织的关系；选用2例健康人、3例颊间隙感染和2例颊间隙肿瘤患者进行电子计算机断层扫描和磁共振成像检查，观察其解剖及疾病影像特征。结果 颊间隙有较为明确的前后、内外及下界，而无明确的上界；在间隙内有面神经、面动脉、颊神经、颊动脉、面深静脉走行，也有少许淋巴结及脂肪组织分布；颊间隙内并未发现面静脉、腮腺导管；电子计算机断层扫描和磁共振成像是颊间隙病变诊断的重要方式。结论颊间隙可以认为是一个不完全封闭的相对独立空间，依据其内容物的特点可以指导颊间隙及相关疾病提供合理的治疗手段，颊间隙的影像学与解剖对比研究对颌面部疾病的诊治也具有重要意义。     

单侧标本开放操作在局部解剖学实习教学改革中的作用探讨

选取人体结构中双侧基本对称的局部,尸体标本单侧开放操作,进行局部解剖学实习教学改革.结果表明引入单侧标本开放操作,能够提高学生的学习兴趣,在一定程度上提高了学习效果.今后需继续扩大研究对象群体,进行进一步探讨和研究.     

雌激素对去卵巢雌性大鼠子宫壁NPY-IRF的影响

目的:用SABC免疫组织化学染色法结合定量数据分析,探讨雌激素对去势雌性大鼠子宫壁神经肽Y免疫反应神经纤维(neuropeptide Y-immunoreactivity nerve fibers,NPY-IRF)的影响。方法:雌性SD大鼠分为假手术对照组(SHAM)、卵巢切除后4周组(OVX1)、卵巢切除后8周组(OVX2)、卵巢切除后肌注苯甲酸雌二醇4周组(OVX+E1)、卵巢切除后肌注苯甲酸雌二醇8周组(OVX+E2),共5组,每组10只,用SABC免疫组织化学染色法观察子宫壁NPY-IRF表达,实验数据进行统计学分析。结果:①OVX+E2组、SHAM组,NPY-IRF长,分支多;OVX+E1组NPY-IRF较长,分支较多;OVX1组及OVX2组,NPY-IRF较短,分支较少;②NPY-IRF表达概括为:OVX+E2组及SHAM组>OVX+E1组>OVX1组>OVX2组,P<0.05;OVX+E2组NPY-IRF表达与SHAM组相比差异无统计学意义,P>0.05。结论:子宫壁NPY-IRF的表达与雌激素水平呈正相关,雌激素水平高时,其表达增多;反之,则少。外源性雌激素对子宫壁NPY-IRF也有作用,但外源性雌激素是否能完全取代内源性雌激素还有待进一步研究。     

基于磁共振图像建立踝关节三维有限元模型

目的重建基于正常健康人体、且有高度几何相似性及可进行良好数字化模拟的踝关节三维有限元模型,并进行初步验证分析。方法严格筛选出1名正常发育,排除踝关节畸形、疾患及损伤的青年男性,使用3.0T核磁共振的T1加权3D快速回波序列对其右踝关节进行连续矢状位扫描,将所得图像导入Mimics进行三维重建后,再经过Geomagic Studio二次加工、组装,最终建立包含关节软骨的踝关节三维模型,而后将其导入ANSYS进行模拟分析以验证其有效性。结果与国外相关实验研究数据对比表明,本模型具备高仿真的几何形态和良好的数学求解能力。结论本研究中重建的踝关节三维有限元模型,经验证是一个仿真度高、可靠性好的模型,可以帮助临床工作者和其他相关人员更好地理解踝关节的各种生物力学特性。