核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

临床核酸定量方法简介

随着临床医学和临床分子生物学检验的发展,核酸定量检测作为一项重要指标显得越来越重要,试验结果可靠与否,直接影响临床的治疗,因此,了解各个方法的原理、优缺点是非常必要的。下面介绍一下关于核酸定量检测的几种方法:     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究

[目的 ]　建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。　 [方法 ]　采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。　[结果 ]　设计三组引物对相应甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒靶基因的mRT -PCR扩增产物片段分别为 43 0bp、2 10bp、3 91bp ,本实验mRT -PCR扩增产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,与Marker比照 ,DNA条带基本在此位点附近 ;产物采用毛细管电泳法经Caliper10 0 0微流芯片分析仪后 ,分别于 413bp、2 0 3bp、3 79bp处出现陡峭的峰 ,如图所示。　[结论 ]　应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT -PCR产物进行定位及相对定量 ,有助于快速诊断流感病毒感染 ,有助于对流感的监测。     

终末期肾功能衰竭患者ApoE基因多态性的分布及意义

目的 研究终末期肾功能衰竭（ESRF）发生的遗传学倾向,寻找与ESRF发生有关的基因。方法 对94例以原发性慢性肾小球肾炎为根底疾病的ESRF患者和108例健康正常人进行载脂蛋白E(ApoE）基因多态性研究。结果 ESRF患乾ApoE2／3基因型（31．91％VS13．89％,P＜0．05）及ε2等位基因（23．94％VS1065％,P＜0．05,P＜0．05）频率明显高于正常人,而ApoE3／3基因型（50％VS70．37％,P＜0．05）及ε3等位基因（69．15％VS82．41％,P＜0．05）则明显低于正常人。结论 ApoE基因多态性与原发性慢性肾小球肾炎的肾功能恶化及肾功能衰竭的发生有一定联系,对ApoE基因多态性的分析,对预测此类疾病患者预后有一定价值。     

男性不育症患者DAZ基因缺失研究

为探讨ＤＡＺ基因在男性生精过程中的作用及ＤＡＺ基因与男性不育症的关系。本文应用多重聚合酶链反应对男性不育症患者ＤＡＺ基因进行检测。并结合临床表型进行分析。结果在正常有生育力的男性、精子数正常不育男性、已知原因无精子少精子症患者中皆无ＤＡＺ基因缺失;在特发性无精子症患者中检测出ＤＡＺ缺失,缺失比例高达１５％（５／３４）,其中无精子症１７％（３／１８）,少精子症１３％（２／１６）。提示ＤＡＺ基因在生精过程中起重要作用,ＤＡＺ基因缺失是导致特发性无精子少精子症的原因之一。     

部分人群中输血传播病毒的检测

目的　了解部分人群是否有输血传播病毒 (TTV ,TransfusionTransmittedVirus)感染。方法　利用半套式PCR方法对慢性乙肝患者、慢性丙肝患者、血液透析者、健康人群中TTV的感染状况进行了筛选。结果　 2 40例慢性乙肝患者中发现 2例TTV阳性 ,10 0例慢性丙肝患者中发现 4例TTV阳性。 2 0例血液透析者和 10 0例健康人群中都未发现TTV感染。结论　慢性丙肝患者比慢性乙肝患者有较高的感染率 ,在血液透析者和健康人群中没有发现TTV感染者。     

PCR-微流芯片在血液HBV DNA HCV/HIV RNA筛查中的初步应用

目的探讨在血液筛查中应用PCR-微流芯片技术检测献血者HBV DNA,HCV/HIV RNA的模式及可行性。方法在常规ELISA初、复检全项测定合格基础上,将献血者的血清按5人份×200μL进行汇集,用大容量磁珠法提取样本核酸,PCR-微流芯片检测技术进行扩增和检测。将国家标准质控血清进行系列稀释考评方法的灵敏度和重复性。结果342份(69个汇集池)无偿献血标本中有3份HBsAg(-)HBV DNA( ),HBV DNA阳性率为0.89%,其中1份标本两对半结果全阴性,2份标本抗-HBs( )及抗-HBc( )。PCR-微流芯片法检测HBV DNA、HCV RNA及HIV RNA的95%的灵敏度分别为11.5IU/mL、167.7拷贝/mL和57.9IU/mL结论PCR-微流芯片法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好特点,可应用于血液HBV DNA HCV/HIV RNA的筛查工作,以进一步提高输血的安全性。     

CCR5基因32个碱基缺失突变的分子流行病学调查

目的 调查蒙古、藏、维吾尔、壮、彝、傣族6个少数民族人群CCR5-Δ32等位基因的突变率和CCR5基因在细胞表面的表达，及其在汉族人群中的分布状况。方法 每个民族抽取10份标本，采用全血基因组DNA提取方法提取DNA，运用PCR法检测CCR5-Δ32等位基因突变率和流式细胞术检测CCR5基因在细胞表面的表达，运用0ne—way ANOVA(SPSS l0．0)进行统计学分析。结果 70份不同民族标本中，发现1例杂合子(维吾尔族)，其余均为野生型纯合子。傣族人群的CD3^ CCR5^ 和CD4^ CCR5^ 表达百分数明显高于其他6个民族(P＜0．01)。结论 7个民族人群中CCR5-Δ32等位基因突变率很低，提示该人群对嗜巨噬细胞的HIV—1感染的遗传易感性较强，尤以傣族人群更易感。     

多重PCR-核酸探针杂交法同时检测沙眼衣原体、解脲支原体和淋病奈瑟菌

目的：建立一种同时检测沙眼衣原体，解脲支原体，淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法并用于临床标本检测。方法：采用多重PCR－核酸探针杂交技术，结果与常规PCR法比较。结果：本法特异性良好，敏感度达到0.1fg。经过对166例性传播疾病门诊患者标本测定证实，沙眼衣原体，解脲支原体，淋病奈瑟菌检出率分别为22．9％，54．8％，34．3％，并有22．2％的双重复合感染和4．8％的三重复合感染。并与常规PCR法具有很好的一致性。结论：本法快速，简便，特异性好，能指示多重感染。