转化生长因子β对大鼠神经干细胞增殖和分化的调控作用

目的:研究转化生长因子β对新生(P0天)大鼠脑室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞增殖、迁移和分化的调控作用。方法:应用地高辛标记的cRNA探针核酸分子原位杂交技术显示新生大鼠脑内转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)的mRNA表达。结果:新生大鼠的脑内广泛表达TGF-βmRNA,尤以SVZa区经喙侧迁移流(rostralmigratorystream,RMS)至嗅球的通路上最为明显,其强度又以SVZa区最强,阳性细胞数量最多,密度最大,RMS区域相对较弱,嗅球又见增多。细胞核和细胞质内均可见到阳性产物,但阳性产物主要沉积在胞核内。结论:SVZa区神经干细胞表达了较高含量的TGF-β,提示TGF-β参与了维持SVZa区神经干细胞的增殖状态,使SVZa区的神经干细胞处于适度稳定的增殖状态,而嗅球区表达量较高的TGF-β则可能主要参与促进细胞分化。     

维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞系定向分化神经细胞的最佳条件

背景:神经轴突再生是治疗中枢神经系统损伤必须克服的困难之一,包括移植神经干细胞、胚胎干细胞和许旺细胞等在内的细胞移植疗法已取得显著疗效,然而供体细胞不足的瓶颈限制了其发展。目的:观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化过程,找到其最佳分化为神经细胞的条件。设计:非随机对照实验。单位:解放军第三军医大学组织胚胎学教研室。材料:实验于2000-01/05在解放军第三军医大学基础部组织胚胎学教研室完成。发情期昆明种小鼠18只,雌12只,雄6只,2∶1同笼交配,阴栓检出日记为受孕1d。MESPU35胚胎干细胞株。方法:孕13～16d的小鼠胚胎,去头,胸腹腔脏器及四肢后,制备饲养层细胞。①采用饲养层贴壁培养增殖MESPU35胚胎干细胞,经典4-/4 法(即拟胚体自然生长4d,不加维甲酸,随后4d添加维甲酸诱导形成高比例神经拟胚体的方法)诱导其神经定向分化,不同浓度血清培养拟胚体,相差显微镜观察不同血清浓度下神经样拟胚体并计数。②免疫细胞化学技术观察各个分化时相点(5,9,14d)和不同维甲酸浓度下分化细胞形态学特征,流式细胞仪计数分化神经细胞比例。主要观察指标:①维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化后神经拟胚体形成中突起和细胞体长度估计测量。②免疫细胞化学染色分化细胞形态观察及流式细胞仪测量分化细胞比例。结果:①相差显微镜观察发现不同血清浓度对拟胚体形成后神经定向分化有一定影响,血清浓度过高和过低降低了拟胚体神经分化比例,5%血清浓度分化比例高。②免疫细胞化学观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化形成的NF200阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例随分化时相点和维甲酸浓度升高而升高,NF200阳性细胞形态由无突起变为多极细胞,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞突起由短变长,最后联结成网状。③流式细胞仪检测分化产生的胶质纤维酸性蛋白、NF200阳性细胞比例变化类似免疫细胞化学。结论:维甲酸配合合适的血清浓度、分化时相点等条件能够诱导MESPU35胚胎干细胞高比例神经分化,其分化调节以浓度依赖模式和时间依赖模式进行。     

人参皂甙Rg1和Rb1对培养大鼠室管膜前下区神经干细胞谷氨酸兴奋毒性的保护作用及其与STAT3表达的关系

目的：探讨人参皂甙Rg1和Rb1对大鼠室管膜前下区神经干细胞（SVZa NSCs）谷氨酸兴奋毒性的保护作用及其与STAT3表达的关系。方法：培养的胚胎大鼠SVZaNSCs用含Rg1或Rb1的培养液孵育24h后暴露于谷氨酸（500μmol／L）1h。用台盼蓝和MTT染色检测细胞存活率，TUNEL法检测细胞凋亡率，免疫细胞化学法检测STAT3表达。结果：人参皂甙Rg1（40μmol／L）和Rb1（40μmol／L）能显著提高SVZaNSCs存活率，增加STAT3表达。结论：人参皂甙Rg1和Rb1对SVZa NSCs谷氨酸兴奋毒性有保护作用，其机制可能与STAT3表达增加有关。     

银杏内酯B对神经干细胞分化的影响及其机制研究

目的观察银杏内酯B对体外培养的神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法用含不同浓度银杏内酯B（20mg／L、40mg／L、60mg／L）的分化培养基培养NSCs 3d和7d，测量细胞突起长度和胞体面积，用免疫荧光检测神经丝蛋白-200（NF-200）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及少突胶质细胞特异性蛋白（CC-1）、细胞因子信号抑制因子2（SOCS2）、DNA结合抑制因子2（Id2）的表达。结果银杏内酯B组细胞突起增长，胞体增大；NF阳性神经元样细胞百分率增加，GFAP阳性星形胶质样细胞百分率随银杏内酯B浓度增加而增加；SOCS2阳性细胞百分率（35．46％）较对照组（22．17％）明显增加（P〈0．01），银杏内酯B组Id2阳性细胞百分率（51．52％）较对照组（66．24％）明显减少（P〈0．01）。结论银杏内酯B可促进分化细胞成熟，促进NSCs向神经元分化；星形胶质细胞百分率的增高与银杏内酯B呈剂量依赖关系。     

ES-NT3细胞的神经定向诱导分化

目的了解维甲酸(retinoic acid,RA)对ES-NT3细胞的神经诱导分化的影响.方法转染NT3基因后的MESPU35胚胎干细胞(ES-NT3细胞),4-/4 法诱导其神经定向分化.结果相差显微镜观察ES-NT3细胞诱导分化的神经样细胞拟胚体百分率随分化时相点延长而升高;免疫细胞化学观察ES-NT3细胞诱导分化形成的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞的比例随分化时相点延长而升高,二者总和可以达到75%.结论RA诱导ES-NT3细胞神经定向分化能够产生高比例神经细胞,提示其可以作为移植治疗神经损伤的供体.     

转录因子FoxO1在神经元凋亡中的作用

Forkhead转录因子（Fox蛋白家族）是2000年才正式统一命名的一个新的转录因子家族．自20世纪90年代首次在果蝇中发现该基因以来,其家族已先后发现100多个Fox基因。该家族的共同特征是具有一个长110个氨基酸的保守的DNA结合结构域,称为Fox（Forkheadbox）结构域,含有一个螺旋-转角－螺旋基序,     

Aβ1-42抑制少突胶质前体细胞增殖与分化的实验研究

目的 探讨在离体细胞培养条件下,Aβ1-42对SD乳鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖与分化的影响.方法 采用条件培养液原代培养获得高纯度SD乳鼠OPCs,分为正常组、加入无菌水的对照组、加入Aβ1-42的实验组,采用CCK-8检测存活细胞数量和增殖水平,Western blot检测细胞凋亡蛋白含量,免疫细胞化学染色观察细胞形态变化及分化情况.结果 与对照组相比,实验组OPCs存活率显著降低(P＜0.01),具体表现为:Aβ1-42作用OPCs 1 h后,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01);药物浓度1 moL/L作用于OPCs时,增殖也受到影响(P＜0.05),当Aβ1-42剂量增加至2.5 mol/L时,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01),而对照组与正常组无显著差异(P＞0.05).对凋亡蛋白Caspase-3的检测发现,它们在对照组与正常组的表达水平基本相当(P＞0.05),而在实验组明显升高(P＜0.01),且呈现时间和浓度依赖性,具体表现为:Aβ1-42作用OPCs 2 h后,Caspase-3表达水平明显上调(P＜0.01);药物浓度2.5 mol/L作用于OPCs时,蛋白表达水平有所升高(P＜0.05),当Aβ1-42剂量增加至5 mol/L时,Caspase-3表达水平明显上调(P＜0.01).对成熟少突胶质细胞标记物髓鞘碱性蛋白的免疫染色发现,与对照组相比,实验组的细胞体积明显变小,突起明显减少.结论 Aβ1-42可能通过促使细胞凋亡而抑制OPCs增殖,并抑制了OPCs向成熟少突胶质细胞分化,从而影响中枢神经系统的髓鞘形成.     

RA诱导小鼠胚胎干细胞株MESPU35神经定向分化的研究

ES细胞 (Embryonic Stem Cells,胚胎干细胞 )是一种胚胎时期具有多项分化潜能的细胞 ,能够分化为来源于三个胚层的组织 ,体外培养时有高度未分化的特征。 1995年 Fraichard等发现培养 ES细胞加入 RA能够使之分化为神经元前体细胞、功能性神经元和胶质细胞。本实验对来源于 C5 7BL /6 J品系小鼠的 MESPU35胚胎干细胞系 ,用系列浓度的维甲酸 (retinoic acid,RA)利用 4- / 4 法诱导其神经定向分化。于不同的分化时相点 ,NF2 0 0 ,GFAP和 Gal- c免疫组织化学染色鉴定分化细胞的种类 ,并进行图象分析和统计学数据处理。得出以下结论 …     

对八年制医学生组织胚胎学教学内容改革的思考

在八年制组胚教学中,构建“人体发育与功能组织学”综合课程,组建八个综合化知识模块;同时建立一支高素质的、富有改革创新意识的教师队伍;用以问题为中心的教学方法（Pmblem—based learning,PBL）组织学生主动学习;并组织学生将所学的综合知识参与大、小社区服务。目的在于全面培养学生的创新能力、自学能力以及分析解决问题的能力。     

医学生开展组织胚胎学论坛活动的实践与体会

通过对刚学完组织胚胎学课程的大二本科学生开展组织胚胎学论坛活动,激发学生对医学知识的好奇心和求知欲,促其掌握能动性、系统性、整体性的自主学习方法,引导其接触医学科研前沿,培养其创新能力与协作精神。