胶质瘤IDH1和TP53突变与LOH1p/19q的表达及意义

目的探讨胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变、TP53突变和1p/19q联合性缺失(LOH 1p/19q)的表达及其意义。方法病理组织学证实的Ⅱ-Ⅲ级胶质瘤136例,采用基因片段测序检测IDH1突变,免疫组织化学检测TP53突变,荧光原位杂交法检测LOH 1p/19q的表达。结果 136例中,IDH1突变107例,TP53突变59例,LOH 1p/19q 36例。其中,同时存在IDH1突变和TP53突变共有55例(弥漫性细胞瘤24例,间变性星形细胞瘤26例,少突星形细胞瘤3例,间变性少突星形细胞瘤2例)。同时存在IDH1突变和LOH 1p/19q共有26例(少突胶质细胞瘤13例,间变性少突胶质细胞瘤9例,少突星形细胞瘤2例,间变性少突星形细胞瘤2例)。无一例同时存在TP53突变和LOH 1p/19q。结论联合检测IDH1突变、TP53突变和LOH 1p/19q能有利于明确肿瘤分子病理分型和预后判断,可能成为未来胶质瘤基因治疗的新靶点。     

以缺血为首发症状的脑动脉瘤的诊断与治疗

目的探讨以脑缺血发作为首发症状的颅内动脉瘤的诊断与治疗。方法回顾性分析4例以脑缺血发作为首发症状的颅内动脉瘤的临床资料。1例行动脉瘤夹闭并载瘤动脉重建术，2例行动脉瘤孤立术，1例行支架辅助弹簧圈栓塞治疗。结果4例均是血栓性巨大动脉瘤。术后4例患者脑缺血症状均得到明显改善。结论以脑缺血为首发症状的颅内动脉瘤都是血栓性巨大动脉瘤，应在术前制定个性化治疗方案，积极进行外科手术或栓塞治疗，可明显改善脑缺血的发作，避免动脉瘤破裂。     

颅脑外伤患者血清Hsp70含量变化及其临床意义

目的探讨颅脑外伤患者血清Hsp70含量变化及其临床意义。方法采用酶联免疫法（ELISA）检测60例颅脑外伤患者血清Hsp70含量的水平，并分析其与颅脑外伤分级的关系以及其时间变化趋势。结果重型颅脑损伤组在病程第1、3、5天3个时间点的血清Hsp70水平较轻、中型组明显升高（P〈0．01）；血清Hsp70水平第1天最高，以后逐渐下降，但第5天仍然高于对照组。结论血清中Hsp70水平在重型颅脑损伤中明显增高，与颅脑损伤程度呈正相关，其测定对于早期评估脑损伤的严重程度和预后有重要的临床意义。     

下调RNF138基因对胶质瘤细胞株U251增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的探讨RNA干扰下调胶质瘤细胞株高表达基因RNF138对胶质瘤细胞株U251体外增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法构建下调RNF138基因的siRNA,通过慢病毒转染导入胶质瘤细胞株U251,设立阴性干扰对照组及空白对照组,荧光显微镜观察转染效率;实时荧光定量PCR检测敲减效率;运用Cellomics仪器连续检测U251体外增殖情况;流式细胞仪检测U251凋亡及细胞周期变化情况。结果慢病毒载体高效、稳定转染U251细胞,靶向RNF138的siRNA有效抑制RNF138基因表达,使RNF138mRNA表达减少60%,U251体外增殖明显减缓,凋亡明显增加,细胞阻滞在G2/M期。结论 RNA干扰抑制RNF138基因表达可以明显抑制胶质瘤细胞株U251体外增殖,促进其凋亡,影响细胞周期,阻滞细胞分裂。     

抑癌基因PTEN与iNOS在胶质瘤中表达及意义

目的探讨抑癌基因PTEN和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在胶质瘤组织中表达意义及两者与胶质瘤侵袭性的关系。方法采用LSAB免疫组织化学法检测56例胶质瘤中PTEN、iNOS蛋白的表达,并分析两者与胶质瘤病理级别和侵袭性的关系。结果PTEN在胶质瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级中阳性率分别为91．7％、75％、53．3％、15．4％,PTEN表达阳性率随病理分级升高而降低(P＜0．01)。而iNOS表达阳性率分别为50％、38．1％、73．3％、76．9％;iNOS表达水平与PTEN表达水平呈负相关(P＜0．05)。结论PTEN和iNOS的表达一定程度反映胶质瘤的恶性度和侵袭性强弱;PTEN缺失可引起iNOS表达增加,在胶质瘤发生、发展过程中发挥重要作用。     

SHG-44绿色荧光裸鼠原位模型的建立

目的 建立SHG-44绿色荧光裸鼠原位模型.方法 将C57BL/6J-增强绿色荧光蛋白(ECFP)转基因小鼠与裸小鼠进行交配,在继代时严格挑选都表达EGFP基因的无毛雄鼠(♂)与有毛母鼠(♀)交配,通过肉眼、荧光显微镜和分子生物学等方法观察EGFP基因在裸小鼠全身各组织中的表达;将胶质瘤细胞株SHG-44(15μl,含1×106个细胞)注射于绿色荧光裸鼠的脑内制成原位模型.结果 每只种鼠平均产仔7～8只,其中纯合裸仔鼠有3～4只,比例接近1∶1;每代仔鼠通过小动物活体成像系统出生后2d就可鉴别其是否表达EGFP基因;器官及组织冰冻切片荧光显微镜下观察均见有绿色荧光;聚合酶链反应(PCR)结果表明脑组织、皮下肌肉、鼠尾和脚趾全部表达EGFP基因;原位模型的成瘤率达100％,瘤细胞依然具有人脑胶质瘤的基本特征.结论 表达EGFP基因的裸小鼠可用于肿瘤移植实验.     

Gsk-3ββ-catenin CyclinD1在脑胶质瘤中的表达及意义

目的：探讨Gsk-3β、β-catenin和CyclinD1在脑胶质瘤中的表达及意义。方法应用免疫组化Envision法检测Gsk-3β、β-catenin和CyclinD1在48例胶质瘤和11例对照组（正常脑组织）中的表达情况。结果 Gsk-3β、β-catenin、CyclinD1的表达在脑胶质瘤和对照组（正常脑组织）之间以及胶质瘤的高低级别组之间差异均具有统计学意义（P＆lt;0.05）,β-catenin和CyclinD1在颅内胶质瘤中的表达呈正相关（P＆lt;0.05）,β-catenin与Gsk-3β在胶质瘤中的表达呈负相关（P＆lt;0.05）。结论胶质瘤组织中存在Gsk-3β低表达和β-catenin高表达,以及细胞周期调节紊乱,这三种蛋白可能在胶质瘤的发生过程中起一定作用。     

RNA干扰抑制c-myc基因表达对D341细胞增殖的影响

目的探讨应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制髓母细胞瘤D341细胞株的c-myc基因对D341细胞的生长、细胞周期及凋亡的变化。方法制备特异性针对c-myc基因的siRNA,转染D341细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测c-myc基因表达情况,流式细胞仪进行细胞周期及凋亡检测。结果siRNA转染D341细胞后,c-myc基因表达在转染后24h抑制效率最高,c-myc蛋白在48h抑制效率最高,并随siRNA浓度的增大,沉默c-myc基因效率增高。RNA干扰抑制D341细胞c-myc基因后,细胞生长停滞于G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对D341细胞c-mycmRNA及蛋白有明显抑制作用,细胞生长受到抑制,有望成为髓母细胞瘤的新的治疗途径。     

人源Dickkopf-1真核表达质粒的构建

目的构建人源Dickkopf-1（DKK-1）基因的真核表达质粒,为进一步探讨DKK-1的生物学功能奠定基础。方法Trizol法从人新鲜胎盘组织中抽提总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增人源DKK-1的基因序列,将真核表达载体pcDNA3.1和DKK-1的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pcDNA3.1-DKK-l,转化至大肠杆菌后经菌落PCR、NHeⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定。结果RT-PCR法从人胎盘中扩增出816bp大小的目的片段,重组质粒转化至大肠杆菌后菌落PCR同样扩增出816bp大小的目的片段,NHeⅠ和EcoRⅠ双酶切重组质粒能切出两条目的条带,测序后与Genbank中DKK-1的cDNA对比,证明DKK-1的基因序列完全正确。结论成功构建了pcDNA3.1-DKK-1重组质粒,为研究人源DKK-1的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础。