对氨基糖甙类高水平耐药肠球菌的检测及药敏结果分析

目的了解肠球菌对高水平庆大霉素的耐药情况及用于耐万古霉素肠球菌(VRE)治疗的氯霉素(C)、红霉素(E)、四环素(TE)、利福平(RA)的耐药情况. 方法应用纸片扩散法药敏试验检测从临床标本中分离出的40株肠球菌.分析其药敏结果. 结果庆大霉素高水平耐药株(HLGR)16株(40.0%)、氯霉素耐药株17株(42.5%)、红霉素耐药株26株(65.0%)、四环素耐药株28株(70.0%)、利福平耐药株22株(55.0%),未检出对万古霉素耐药肠球菌. 结论治疗肠球菌感染时,应根据分离株的耐药特点选择不同的治疗方案.     

某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析

目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点。方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析。在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序。结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株。在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB发生基因突变株的51.2%(21/45)。在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41)。kasA基因未发现常见突变形式。结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同。     

耐喹诺酮类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的 探讨广州地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制.方法 对喹诺酮耐药株的gyrA和parC基因进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),并对其中的高水平耐药株gyrB和parE基因进行测序;用琼脂稀释法测定加入碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)前后环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC);同时用SDS-PAGE对高水平耐药株的外膜蛋白进行电泳分析.结果 有 72.7%(72/99)的菌株发生gyrA突变,主要为,Thr-83-Ile;25.3%(25/99)的菌株发生parC突变,主要为Ser-87-Leu,且均是gyrA和parC双基因突变;gyrB和parE突变较少见.53.3%(53/99)的菌株的MIC可被CCCP逆转,其MIC能明显降低;7%(7/10)的高水平耐药株的外膜蛋白在43～67kDa间条带增多,其蛋白含量有差异.结论 抗菌药物作用靶位的改变和外排泵机制是本地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药的重要机制.     

案例式教学法在临床微生物实习教学中的尝试和思考

本文主要探讨案例式教学法在临床微生物实习教学中对学生学习兴趣、临床思维能力提高的作用,以及总结在教学过程中的一些体会.     

不同耐药鲍曼不动杆菌毒力效应检测与分析

目的 比较不同耐药性鲍曼不动杆菌毒力特点,探讨鲍曼不动杆菌耐药性与其致病力之间的关系.方法 将来自临床的110株鲍曼不动杆菌分成3组:多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)、泛耐药鲍曼不动杆菌(XDRAB)和相对敏感鲍曼不动杆菌(RDSAB).采用PCR检测试验菌株携带的毒力基因(BasD、BauA、Omp33-36、traT);采用吸光度值法测定试验菌株的体外生长情况;采用蹭行运动实验检测试验菌株运动能力;采用明胶酶活性实验检测试验菌株产侵袭性酶类情况;采用结晶紫染色法测定试验菌株生物被膜形成能力;采用微量法D-甘露糖抵抗红细胞凝集实验检测试验菌株对红细胞的凝集能力;采用小鼠感染试验对比不同耐药菌的致病能力差异.结果 110株鲍曼不动杆菌中,除了2株RDSAB蹭行运动阳性外,其余菌株均为阴性,MDRAB和XDRAB均未观察到蹭行运动;110株鲍曼不动杆菌全部菌株明胶酶活性均为阴性;25株RDSAB的生物被膜形成能力比42株MDRAB或43株XDRAB的生物被膜形成能力强,差异有统计学意义(P<0.05),其中25株RDSAB生物被膜形成能力以强阳性为主,而42株MDRAB和43株XDRAB以阳性为主;只有1株RDSAB在有或者无D-甘露糖存在的条件下,均能与AB型和O型红细胞发生凝集;毒力基因BasD具有较高的检出率,为59.1％(65/110),毒力基因BauA和Omp33-36检出率较低,分别为6.4％(7/110)和3.6％(4/110),未检出毒力基因traT;MDRAB的BasD毒力基因检出率比RDSAB高,差异有统计学意义(P<0.05),RDSAB的毒力基因Omp33-36检出率比MDRAB和XDRAB高,差异有统计学意义(P<0.05),MDRAB的BasD和BauA毒力基因检出率比XDRAB高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 鲍曼不动杆菌在获得耐药性的同时其毒力并没有相应增加,RDSAB的环境生存和定植能力比MDRAB和XDRAB更强.     

艰难梭菌二元毒素A的原核表达及免疫原性分析

目的构建艰难梭菌二元毒素(Cdt)A的原核表达载体,表达并纯化His-CdtA重组蛋白,分析其免疫原性。方法以RT 027型艰难梭菌为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增cdtA的全长序列,导入大肠埃希菌BL21感受态细胞,诱导His-CdtA重组蛋白表达,并用纯化后的蛋白免疫小鼠,分析小鼠产生的抗体效价。结果成功构建pET-28b-cdtA原核表达载体,诱导并纯化出高浓度的His-CdtA重组蛋白,免疫小鼠后产生高效价的抗CdtA抗体。结论纯化的His-CdtA重组蛋白免疫小鼠产生了高效价的抗CdtA抗体,为后续制备抗CdtA单克隆抗体及建立CdtA的实验室检测方法学奠定了基础。     

白细胞介素1α基因单核苷酸多态性与甲型H1N1流感易感性的关系

目的 探讨白细胞介素1d(IL-1α)基因单核苷酸多态性(SNP)与甲型H1N1流感易感性的关系.方法 从IL-1α基因启动子区域中选取4个SNP位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525,针对以上位点建立基于飞行时间质谱分析技术(TOF-MS)鉴定SNP的方法,对167例H1N1流感患者(H1N1组)和192例健康对照人群(对照组)进行检测.确定各SNP位点的等位基因和基因分型;对比两组等位基因和各基因型的频率.结果 rs1800587、rs2856836、rs2856838位点具有T和C两种等位基因,包括TT、TC、CC 3种基因型.rs3783525具有A和T两种等位基因,包括AA、AT和TT3种基因型.H1N1组和对照组rs 1800587位点的等位基因频率差异有统计学意义(x2=12.69,P=0.000,OR=2.424,95％CI=1.472 ～ 3.993),rs2856836,rs2856838,rs3783525等位基因频率在H1N1组和对照组中差异则无统计学意义.H1N1组rs1800587位点CC纯合子频率低于对照组[72.5％(121/167)比87.0％(167/192),P＜0.05],杂合子(TC)频率高于对照组[25.1％(42/167)比12.5％(24/192),P＜0.05],而两组TT纯合子频率差异则不具有统计学意义.H1N1组rs2856836位点杂合子(TC)频率高于对照组[25.7％(43/167)比17.2％(33/192),P＜0.05],TT基因型与CC基因型频率在两组间差异均没有统计学意义.rs2856838位点对照组TT纯合子频率低于H1N1组[4.2％(8/192)比10.8％(18/167),P＜0.05],其余2种基因型TC与CC在两组间差异没有统计学意义.H1N1组rs3783525位点TTT纯合子频率高于对照组[21.0％ (35/167)比13.0％(25/192),P＜0.05],两组间的另两种基因型TC与CC差异也没有统计学意义.结论 IL-1α基因多态性位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525与甲型H1N1流感易感性相关.     

葡萄球菌耐药性和红霉素诱导克林霉素耐药状况

目的了解本地葡萄球菌耐药率以及红霉素诱导克林霉素耐药的发生率。方法采用试管法血浆凝固酶试验检测凝固酶阴性葡萄球菌（CONS）和金黄色葡萄球菌（Sa），头孢西叮纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），Kirby-Bauer法检测88株葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药性，D-test双纸片法检测红霉素诱导克林霉素耐药。结果88株葡萄球菌中，CONS和Sa的构成比是83．0％（73／88）比17．0％（15／88），MRS的检出率是71．6％（63／88）。在CONS中，MRCONS的检出率是71．2％（52／73），Sa中MRSA的检出率是73．3％（11／15），二者差异无统计学意义。对环丙沙星、红霉素、克林霉素、复方新诺明和庆大霉素的耐药率，Sa明显高于CONS、MRS明显高于MSS，二者差异有统计学意义（P〈0．05）。11种抗生素中，青霉素和红霉素对所有菌株的耐药率均〉50％，万古霉素、利福平、呋南妥因和氯霉素对所有菌株耐药率均〈50％，未检出万古霉素耐药菌株。在22株红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌中，D-test阳性的葡萄球菌共10株，阳性率为45．5％（10／22）。结论88株临床分离的葡萄球菌中主要以凝固酶阴性的葡萄球菌为主，MRS的检出率已超过70％，Sa和MRS的耐药率较CONS和MSS高，除万古霉素和呋南妥因外，本地区临床分离的葡萄球菌对常用抗生素的耐药性均较高。红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球茼中，红霉素诱导克林霉素耐药的菌株已接近一半（45．5％），对于药敏实验中表现为红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌， 必须加作D-test确定克林霉素的敏感性。     

临床微生物检验实验教学立体化教学资源建设

临床微生物学是一门实践性极强的形态学学科,而立体化的实验教学资源是学生掌握临床微生物基本理论、基本知识、基本技能的重要途径和平台。临床微生物检验实验教学立体化教学资源建设主要包含三个部分:纸质的实验教材编写与使用、多种类实验视频教学资料的制备以及多媒体实验教学网络课件、常见微生物图片库的建设。