热休克预处理对化疗环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响及机制

目的:探索热休克预处理(heat shock pretreatment,HSP)对化疗微环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的影响及其潜在机制.方法:探索HSP最佳条件,往热休克预处理BMSCs(heat shock pretreated bone marrow mesenchymal stem cells,HS-MSCs)培养基中加入顺铂,通过CCK-8检测细胞增殖率,Hoechst33342/PI测定存活率,流式细胞仪检测凋亡率.使用Western blot检测不同时间点HS-MSCs热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)、Hsp90、自噬相关蛋白Beclin1和LC3B的表达.通过透射电镜观察自噬小体数量.结果:加入顺铂后,热休克模型组凋亡率明显低于模型组.此外,热休克模型组增殖速率较模型组增加,而表达亮蓝色/暗红色荧光的比例则低于模型组.HS-MSCs内Hsp70和Hsp90的表达随时间推移逐渐上调,并在48 h后达峰值.同时,细胞内自噬小体减少、Beclin1表达降低、LC3B Ⅱ/LC3B Ⅰ比值下降.结论:HSP能够提高化疗微环境下BMSCs的存活与抗凋亡能力,其作用可能与HSP增强Hsp70及Hsp90的表达、减弱自噬水平有关.     

携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞,观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况;将人卵巢颗粒培养24h后,分为3组。实验组:加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2;空白对照组:不加病毒;空载体对照组:加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天,采用Western blotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形;当MOI为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,感染率达60%。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后,实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达,且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白,抑制细胞凋亡。     

卵巢早衰的诊治研究进展

卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是指妇女在40岁以前因某种原因引起的闭经、不育、雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病,在人群中的发病率约为1%~3%.POF危害妇女身心健康,导致生育能力丧失、生殖器官萎缩、围绝经期综合征等,同时还可能引发一系列心理及社会问题[1].POF的发生与遗传、免疫、环境、放疗或化疗等因素密切相关[2],其诊断及治疗引起了国内外临床医生的日益关注.本文就近年来卵巢早衰诊断及治疗方面的研究进展概述如下.     

全骨髓法体外培养分离大鼠骨髓间充质干细胞及PKH26标记

背景：要获得动物实验需要的标记大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养、扩增和示踪已成为实验的关键环节。目的：采用全骨髓培养分离大鼠骨髓间充质干细胞,以及PKH26对其体外标记,建立一种方便、实用的分离培养并示踪骨髓间充质干细胞的方法。方法：通过全骨髓培养分离法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。经传代扩增,细胞进一步纯化。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞按PKH26标记程序进行标记后培养,荧光显微镜下观察标记后细胞生长状态、萤光强度变化和传代培养效果。利用四唑盐比色法测定标记后骨髓间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：全骨髓培养分离法能成功获得纯度高的骨髓间充质干细胞,用PKH26标记后的骨髓间充质干细胞呈红色荧光,体外连续传代培养3代后,细胞荧光强度逐渐减弱。PKH26标记骨髓间充质干细胞的生长形态、生长活力不发生改变。结果证实全骨髓培养分离法简便易行,能获取较高纯度的生长增殖状态良好的骨髓间充质干细胞,PKH26荧光标记大鼠骨髓间充质干细胞是一种有效、实用的方法。     

人胎盘间充质干细胞大鼠体内移植的初步免疫学研究

目的了解大鼠对于人胎盘间充质干细胞是否存在天然免疫耐受,分析人胎盘间充质干细胞在大鼠体内出现免疫排斥的可能。方法分离提取并鉴定人胎盘间充质干细胞,观察大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后有无出现相关的免疫排斥症状、细胞在大鼠体内的分布情况及脏器的病理改变。结果大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后未出现急慢性免疫排斥反应,肝、肾、肺可见标记后的人胎盘间充质干细胞的分布,但相关病理切片未见明显的淋巴细胞浸润和纤维组织增生现象。结论人胎盘间充质干细胞与大鼠脏器间存在天然的免疫耐受。     

宫腔粘连的诊治现状

宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是指宫腔肌壁和(或)宫颈管的全部或部分闭锁[1]。任何子宫手术都有可能导致宫腔粘连的形成[2],而产后刮宫术被认为是引起IUA最常见的原因[3]。IUA患者的临床表现与IUA的部位、面积及程度有一定关系,但两者之间不完全一致,主要的临床症状为月经量过少、闭经、继发性不孕、周期性下腹痛、反复流     

抗生长分化因子-9抗体对化疗所致大鼠卵巢损伤的保护作用

目的 探讨抗生长分化因子-9抗体(Anti-GDF-9)对化疗所致体外培养大鼠卵巢损伤的保护作用.方法 实验分3组,每组32个卵巢:(1)正常对照组不加磷酰胺氮芥(PM);(2)PM组加入10 μg /mL 的PM;(3)抗体组在加入PM前24 h加入Anti-GDF-9(5 μg/mL).加入PM前,加入后2、4、6...     

全骨髓法体外培养分离大鼠骨髓间充质干细胞及PKH26标记

背景：要获得动物实验需要的标记大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养、扩增和示踪已成为实验的关键环节。 目的：采用全骨髓培养分离大鼠骨髓间充质干细胞,以及PKH26对其体外标记,建立一种方便、实用的分离培养并示踪骨髓间充质干细胞的方法。 方法：通过全骨髓培养分离法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。经传代扩增,细胞进一步纯化。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞按PKH26标记程序进行标记后培养,荧光显微镜下观察标记后细胞生长状态、萤光强度变化和传代培养效果。利用四唑盐比色法测定标记后骨髓间充质干细胞的生长曲线。 结果与结论：全骨髓培养分离法能成功获得纯度高的骨髓间充质干细胞,用PKH26标记后的骨髓间充质干细胞呈红色荧光,体外连续传代培养3代后,细胞荧光强度逐渐减弱。PKH26标记骨髓间充质干细胞的生长形态、生长活力不发生改变。结果证实全骨髓培养分离法简便易行,能获取较高纯度的生长增殖状态良好的骨髓间充质干细胞,PKH26荧光标记大鼠骨髓间充质干细胞是一种有效、实用的方法。     

重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞的实验研究

目的 体外研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质于细胞(MSCs)的方法.方法 用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体Ad-GFP转染,荧光显微镜检测其转染效率,CCK-8法检测转染细胞的增殖能力.结果 Ad-GFP对大鼠MSCs的感染率高达90.0%,感染1月后仍有稳定表达;转染细胞的增殖能力与未转染细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体Ad-GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖能力不受影响,可作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法.     

脐带间充质干细胞卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布

目的 观察脐带间充质干细胞(UCMSCs)卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布.方法 建立模型移植标记UCMSCs,观察各脏器绿色荧光细胞分布情况.结果 卵巢内发现移植细胞,肺、脾可见到较多移植细胞,心、肝、肾可见到散在分布移植细胞.结论 UCMSCs能在卵巢组织内存活,部分滞留在肺、脾等组织.