螨制剂舌下免疫治疗对单一和多重致敏变应性鼻炎的疗效评估

目的观察单一和多重变应性鼻炎患者舌下脱敏的疗效异同并分析原因。方法回顾性分析舌下脱敏治疗1年以上单一和多重变应性鼻炎患者终止治疗1年后的疗效,并对粉尘螨变应原组分与其他点刺变应原作同源进化树分析。结果纳入患者50例,舌下免疫治疗显效22例,有效15例,无效13例,总有效率为74%。50例患者中30例(60%)为多重变态反应患者,阳性率最高的前3种变应原依次为蟑螂(83%)、冬季花粉(70%)和蚕丝(63%)。用有序多分类资料比较的秩和检验分析舌下脱敏治疗1年以上单一尘螨过敏患者与多重变态反应患者的疗效,两组总体分布相同。结论使用舌下含服粉尘螨滴剂治疗变应性鼻炎,多重与单一尘螨变态反应患者治疗效果相当。粉尘螨滴剂亦可用于多重变态反应患者常规治疗。     

蛔虫过敏原ABA-1融合基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

背景:利用蛔虫基因融合技术,可将过敏原ABA-1的主要基因进行融合。目的:利用大肠杆菌表达系统重组表达蛔虫主要过敏原ABA-1融合蛋白。方法:从Gene Bank和Protein Database中获取蛔虫主要过敏原ABA-1基因和蛋白序列,选定其中的ABA-1B1,ABA-1A2与ABA-1A1基因重组为融合基因BAA,经密码子优化后,全基因合成目的基因BAA并构建于表达载体PET-44a上,经KCM法转化入大肠杆菌JM109中进行克隆,PET-44a/BAA经NdeⅠ和PstⅠ双酶切及DNA测序正确后,转化入大肠杆菌Rosetta Blue TM中,经IPTG诱导表达。表达蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,通过Western blot和氨基酸测序鉴定目的蛋白。结果与结论:大肠杆菌的融合蛋白BAA表达量约占总蛋白的40%,纯化后蛋其白纯度可达90%左右。Western Blot结果显示在相对分子质量45000处可见一特异目的条带,氨基酸测序显示N端15个氨基酸与目的蛋白完全相同。结果证实,融合蛋白BAA在大肠杆菌中得到高效的表达。     

蛔虫过敏原ABA-1融合基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

背景：利用蛔虫基因融合技术,可将过敏原ABA-1的主要基因进行融合。目的：利用大肠杆菌表达系统重组表达蛔虫主要过敏原ABA-1融合蛋白。方法：从Gene Bank和Protein Database中获取蛔虫主要过敏原ABA-1基因和蛋白序列,选定其中的ABA-1B1,ABA-1A2与ABA-1A1基因重组为融合基因BAA,经密码子优化后,全基因合成目的基因BAA并构建于表达载体PET-44a上,经KCM法转化入大肠杆菌JM109中进行克隆,PET-44a/BAA经NdeⅠ和PstⅠ双酶切及DNA测序正确后,转化入大肠杆菌RosettaBlue^ TM中,经IPTG诱导表达。表达蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,通过Western blot和氨基酸测序鉴定目的蛋白。结果与结论：大肠杆菌的融合蛋白BAA表达量约占总蛋白的40%,纯化后蛋其白纯度可达90%左右。Western Blot结果显示在相对分子质量45000处可见一特异目的条带,氨基酸测序显示N端15个氨基酸与目的蛋白完全相同。结果证实,融合蛋白BAA在大肠杆菌中得到高效的表达。     

循证过敏反应学在研究生教育中的应用研究

循证过敏反应学是一门将循证医学应用于过敏反应学的新兴交叉学科。从循证医学的概念与特点着手,从研究生的科研工作、临床决策以及实施效果与问题等方面,阐述将循证过敏反应学应用于研究生培养过程中增强了学生的过敏反应学理论知识和技术应用能力,使他们了解过敏反应学科的最新研究进展,提高了学生的创新能力、观察思维能力以及临床实践能力。     

主要过敏原的物种分布及逐步聚类分析

目的 综合分析数据库中过敏原的总体状况，在剖析重组过敏原研究领域的共性问题后，对主要过敏原进行聚类分析，为重组过敏原的深入研究指明方向。方法 以国际免疫学联合会过敏原命名分会公布的正式过敏原名录表为原始数据，对过敏原的物种分布特点进行分析，并采用Kolmogorov-Smironov检验对过敏原类型分布与相应的物种分布的一致性进行检验；针对氨基酸序列数据，采用ClustalW 1．83及MEGA2等生物信息学软件，辅之以手动缩减，对来自公共数据库中的主要过敏原进行逐步聚类分析，以获得代表性过敏原。结果 过敏原物种分布分析显示，510个过敏原归属于9大类共179个物种，不同类型过敏原所涉及的物种数及过敏原例数产生的两类分布相同；用关键词在蛋白质数据库中搜索得到的60条主要过敏原序列，聚类成有着明显差异的7个簇后，逐步聚类缩减到21个氨基酸序列无任何相关的代表性过敏原。结论 过敏原的研究是依所涉及的物种不同而逐步平行地展开，没有明显的物种或过敏原的侧重点；依据氨基酸序列的相似性，可以将不同物种来源的主要过敏原缩减到少数代表性过敏原上，从而减少重组过敏原的工作量。     

豚鼠老化模型听反应阈检测及基因多态性标记分析

目的 建立D-半乳糖致豚鼠老化模型,应用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析检测与听力损失相关的分子生物学标记,寻求老年性聋发病的分子机制.方法 51只豚鼠随机分为三组:A组(模型实验组)21只,5%D-半乳糖腹腔注射(200 mg·kd-1·d-1),共6周;B组(模型对照组)15只,仅给予生理盐水注射.A、B两组注射前后分别进行听性脑干反应(ABR)检测,将两组豚鼠置于噪声环境中7 d,每天噪声暴露8 h,结束后再次检测ABR阈值.C组(空白对照组)15只,不加任何处理,仅予以同步检测ABR阈值.用比色法检测三组肝和脑组织的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量.提取三组豚鼠内耳组织DNA,应用AFLP技术筛选差异位点.结果 注射后A组豚鼠ABR阈值较B组提高,但两组阈移之间差异无统计学意义(t=1.14,P>0.05),噪声暴露后,A组ABR阈值(峰等效声压级)平均提高(22.97±10.56)dB,B组提高(14.16±7.36)dB,组间差异具有统计学意义(t=2.78,P<0.05).A组肝和脑组织中SOD活性明显低于B组,MDA含最则明显高于B组,其差异具有统计学意义(P值均<0.01).AFLP分析发现有与耳聋一致的多态性标记.结论 D-半乳糖可以诱导豚鼠衰老,此模型豚鼠听反应阈虽无明显提高,但对噪声的敏感性增加,AFLP检测到的差异位点可能与其对噪声敏感有关.     

小麦过敏原Tri a Bd 27k蛋白抗原表位预测及三维结构模拟

目的 通过生物信息学方法了解小麦过敏原Tri a Bd 27k的结构特征,为小麦变态反应性疾病的诊断和预防提供依据.方法 在Uniprot数据库中获得Tri a Bd 27k蛋白序列,通过DNAStar预测B细胞抗原表位,NetMHCⅡ和Syfpeithi预测T细胞抗原表位;使用Swiss-Model软件预测其三维结构并用Ramachandran进行稳定性评估.在Uniport 数据库搜索Tria Bd 27k的同源蛋白,应用Clustalx 1.83及Mega 3.1构建同源进化树.结果 小麦过敏原Tri a Bd 27k的B/T细胞共同抗原表位优势区域为34-42、102-117,Ramachandran软件预测结果显示小麦Tri a Bd 27k蛋白的空间构象稳定.结论 通过对小麦过敏原Tria Bd 27k进行生物信息学分析获得了该过敏原优势区域及三维结构模型,为进一步了解和掌握小麦过敏原Tri a Bd 27k的结构功能打下理论基础.     

猫主要过敏原Fel d 1的T细胞抗原表位分析及三维结构模拟

目的:预测猫主要过敏原Fel d 1与MHC Ⅰ、MHCⅡ类分子的结合力获得T细胞优势抗原表位,并模拟Fel d 1的三维结构,为猫主要过敏原的改造及其临床研究等提供依据.方法:从Uniprot数据库中得到猫主要过敏原Fel d 1的氨基酸序列,通过在线软件NetMHCⅡ2.2对Fel d 1氨基酸序列进行MHCⅡ抗原表位分析,使用软件SYFPEITHI分析MHC Ⅰ的抗原表位,再通过在线软件Swiss-Model预测Feld1的三维结构,以Ramachandran图评估三维结构的稳定性.结果:运用生物学软件分析得到Fel d 1上两个高值MHCⅡ抗原表位区域分别为22～43、80～95,MHC Ⅰ抗原表位优势区为17～30、56～84、91 ～103.Ramachandran图显示Feld 1的空间构象稳定.结论:本研究有助于确定Fel d 1的T细胞优势抗原表位及其三维结构模型,为Fel d 1抗原性改造提供理论依据,及将来的临床研究奠定基础.     

新型变应原疫苗治疗变应性鼻炎的实验研究

目的 建立变应性鼻炎的豚鼠模型,探讨新型变应原疫苗的治疗效果.方法 70只豚鼠随机分为5组,以卵白蛋白为致敏原建立豚鼠变应性鼻炎模型,将泛过敏原与白介素IL-10的重组偶联物作为新型变应原疫苗,经鼻腔给药治疗,观察豚鼠抓鼻、打喷嚏等鼻部症状及其鼻黏膜形态.结果 豚鼠变应性鼻炎模型成功建立,新型变应原疫苗LTT可显著减轻变应性鼻炎鼻部症状(P＜0.01),改善鼻黏膜形态结构,减少炎症细胞浸润,具有明显的治疗效果.结论 LTT作为新型免疫疫苗,可有效治疗变应性鼻炎,预示该类疫苗在免疫治疗上具有较好的前景.