Hedgehog通路下游转录因子Gli1在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨hedgehog信号通路下游转录因子Gli1在肝细胞癌中的表达及临床意义。方法:收集63例肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织构建成组织芯片,应用免疫组化、RT-PCR法检测Gli1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况。结果:Gli1蛋白在肝癌组织与癌旁组织中表达具有显著性差异;Gli1mRNA含量在肝癌组织及癌旁组织中具有显著性差异;肝细胞癌中Gli1蛋白表达和mRNA含量与病理分级、门脉癌栓有无、淋巴结转移与否、原发肿瘤分级、TNM分期密切相关。结论:Gli1的上调参与了肝细胞癌的发生发展,与肿瘤转移侵润有关。Gli1可能成为肝细胞癌重要生物学标志和生物治疗靶点。     

参附注射液对心脏骤停患者脑复苏后血清NSE和S-100B蛋白水平及预后的影响

目的 探讨参附注射液治疗心脏骤停(cardiac arrest,CA)患者脑复苏后血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100B蛋白的变化,评价其对预后的影响。 方法 将106例浙江省人民医院收治的心脏骤停后出现自主循环恢复的患者分为2组,每组53例。对照组采用常规脑复苏治疗,保持机体低亚温。治疗组在对照组基础上,给予参附注射液治疗。于心肺复苏后0.5、2、12、24 h,采用酶联免疫吸附法检测2组患者血清NSE和S-100B蛋白的水平。于心脏骤停后12、24、48、72 h检测2组患者脑氧代谢指标水平;采用格拉斯哥昏迷量表(GCS)评估患者昏迷状态。记录2组患者复苏有效率及病死率。 结果 心肺复苏后,2组NSE、S-100B蛋白的水平均显著升高(P<0.05);心肺复苏后2、12、24 h,治疗组NSE、S-100B蛋白的水平均显著低于对照组同期的水平,差异有统计学意义(P<0.05);心脏骤停后12、24、48、72 h,2组患者动静脉血氧含量差(Ca-jvO₂)、脑氧摄取率(CERO₂)显著降低,颈静脉球部血氧饱和度(SjvO₂)、GCS评分显著升高(P<0.05);心脏骤停后48、72 h,治疗组Ca-jvO₂、CERO₂、GCS评分显著高于对照组同期的水平,SjvO₂显著低于对照组同期的水平,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组有效率(67.92%)显著高于对照组(45.28%),病死率(69.81%)显著低于对照组(88.68%),差异有统计学意义(χ2=5.530、5.736,P<0.05)。 结论 参附注射液能使心脏骤停患者脑复苏后的血清NSE、S-100B显著降低,有助于改善患者预后。      

miR-122介导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA-122(mi R-122)介导肝癌细胞凋亡的分子作用机制。方法将人工合成的mi R-122类似物、对照片段NC转染到肝癌细胞Hep G2(p53wt)、MHCC97H(p53 mutation)后,mi R-122组(转染mi R-122)、对照组(转染对照无意片段)和空白对照组均应用RT-PCR检测mi R-122,Western blot检测p53、Bax蛋白,MTT法检测肝癌细胞增殖变化,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率。结果在Hep G2中,mi R-122组的mi R-122的表达、p53蛋白和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=13.41,F分别=15.35、16.88,P均<0.05)。在MHCC97H中,mi R-122组mi R-122的表达和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=12.98,F=18.91,P均<0.05),而三组的p53蛋白测定值比较,差异无统计学意义(F=2.82,P>0.05)。在Hep G2和MHCC-97H细胞中,与对照组和空白对照组比较,mi R-122组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(χ~2分别=8.53、7.81、11.64、12.45,P均<0.05)。对照组和空白对照组的细胞增殖和细胞凋亡率无明显变化,差异均无统计学意义(χ~2=0.08、0.05、0.12、0.09,P均>0.05)。结论 mi R-122可通过p53依赖途径及非p53依赖途径促进肝癌细胞凋亡。     

胶质瘤相关癌基因1在肝细胞癌中的表达及其与Shh、Vimentin、E-cadherin蛋白的相关性研究

目的:研究胶质瘤相关癌基因1( Gli1)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨Gli1表达与sonic hedgehog通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin表达的相关性,由此分析其在肝癌EMT过程中的作用.方法:收集63例肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织应用免疫组化,RT-PCR法检测Gli1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,同时应用免疫组化法检测Hedgehog信号通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,使用Mann-Whitney U检验分析肝细胞癌组织与癌旁正常组织Gli1的mRNA含量以及蛋白表达差异.使用卡方检验分析Gli1蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者临床特征的关系.使用Spearmen秩检验分析肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达分别与Shh、Vimentin及E-cadherin这三种蛋白表达的关系.结果:肝细胞癌组织中Gli1蛋白及mRNA含量明显高于癌旁正常肝组织;Gli1蛋白表达分别与肿瘤肝内转移或淋巴结转移(x2=6.205,P＜0.05)、门静脉侵袭(x2=4.014,P＜0.05)、高Edmonson病理分级(x2=19.668,P＜0.05)以及TNM肿瘤分期较晚(x2=7.091,P＜0.05)有关;肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达与Shh(r=0.574,P＜0.05)、Vimentin蛋白(r=0.467,P＜0.05)表达呈明显正相关,而与E-cadherin蛋白(r=-0.439,P＜0.05)呈负相关.结论:Gli1在肝细胞癌中表达增加,且与肝癌侵袭转移有关的临床病理特征具有相关性,Gli1可能在Shh配体的作用下激活Hedgehog信号通路,并可能诱导肝癌发生与侵袭转移相关的EMT过程.     

替加环素和头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗多重耐药鲍曼不动杆菌肺炎的比较研究

<正>多重耐药鲍曼不动杆菌(mu1tiding-resistant Acinetobacter baumannii,MDR-AB)所引起的肺炎已是重症医学科面临的常见而严重的问题之一[1-3]。随着广谱抗生素和免疫抑制剂在临床的广泛使用,鲍曼不动杆菌耐药问题日趋严重,急诊重症监护病房(emergency intensive care unit,EICU)内经常能培养到MDR-AB。在替加环素诞生以前,注射用头孢哌     

microRNA-616在肝细胞癌侵袭转移中的作用机制研究

目的探讨microRNA-616（miR-616）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC侵袭转移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-616在60例HCC及癌旁组织中的表达,同时检测miR-616在不同肝癌细胞系中的表达情况;免疫组织化学染色检测miR-616在HCC及癌旁组织中波形蛋白（vimentin）、上皮型钙黏素（E-cadherin）及同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）的表达情况;qRT-PCR检测miR-616在人正常永生化肝细胞（LO2）及5种不同肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Hu7）中的表达水平;使用miR-616抑制物作用Hep3B细胞,TranswellTM实验检测miR-616抑制后Hep3B细胞侵袭能力变化;应用miR-616抑制物及PTENsiRNA转染Hep3B细胞,qRT-PCR检测Hep3B中miR-616、vimentin、PTEN、E-cadherin的mRNA水平,Westernblot法检测癌细胞中vimentin、PTEN、E-cadherin的蛋白水平。结果miR-616在HCC组织中表达水平高于对应癌旁组织;miR-616在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-616高表达与低表达在血管侵犯、Edmonson-Steiner分级、TNM分期比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);miR-616高表达肝癌组PTEN及E-cadherin水平低于miR-616低表达肝癌组,而vimentin水平高于miR-616低表达肝癌组,相关性分析结果显示HCC组织中miR-616与E-cadherin、PTEN水平呈负相关,与vimentin水平呈正相关;在肝癌细胞中抑制miR-616后PTEN及E-cadherin表达水平上调,而vimentin表达降低,Hep3B细胞的侵袭能力明显降低。结论miR-616在HCC组织中表达上调,其表达与HCC恶性临床病理特征有关,miR-616促进肝癌细胞侵袭转移的作用可能与其抑制PTEN表达及诱导上皮间质转化有关。     

miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长

目的探讨微小RNA 204(miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关。