外泌体提取方法及鉴定分析研究进展

外泌体是活细胞分泌的纳米级胞外囊泡,广泛存在于生物体体液中。外泌体携带蛋白质、脂质、核酸等,可反映来源细胞的生理、病理情况,在细胞间物质交换和信息传递中发挥重要作用。外泌体作为肿瘤标志物,可用于肿瘤的诊断,进展及预后评估,还可作为纳米载体装载基因或药物到达靶器官,在临床治疗中有较好的应用前景。因此,外泌体分离提取、鉴定分析成为目前研究的热点。本研究就外泌体提取方法及鉴定分析的研究进展作一综述。     

外泌体与脂质代谢的相互作用

外泌体作为细胞间的通讯载体，可以与邻近细胞或远距离的细胞交换遗传物质和代谢信息，如脂质、核酸和蛋白质。脂质代谢受遗传、神经体液、激素、酶，以及肝脏等组织器官的调节，当以上因素出现异常时，可造成脂质代谢紊乱。外泌体会影响脂质代谢，同样脂质代谢也会影响外泌体的产生、分泌，以及和受体细胞间的相互作用。脂质可以在细胞信号的传递、膜结构的组成和功能中发挥作用，外泌体与脂质代谢相互作用的研究有望成为研究脂质代谢相关疾病诊断和治疗的热点。     

PD1抗体联合紫杉醇化疗增强乳腺癌小鼠抗肿瘤疗效

目的探讨PD1抗体联合紫杉醇化疗治疗小鼠乳腺癌的效果。方法应用小鼠乳腺癌细胞系D2F2皮下注射构建Balb/c小鼠乳腺癌模型。实验分为对照组、紫杉醇组、PD-1抗体组和PD-1抗体联合紫杉醇组,分别用PBS、紫杉醇、PD-1抗体、PD-1抗体联合紫杉醇处理小鼠。测定各组小鼠肿瘤生长曲线、生存率以及质量,同时用流式细胞仪检测小鼠肿瘤微环境以及脾脏中CD8+T细胞产生IFN-γ的变化,从而评价各组治疗效果。结果不同组荷瘤小鼠脾脏中CD8+T细胞产生IFN-γ的变化是PD1抗体处理组与PBS处理组相比差异有统计学意义(P=0.025)。PD-1抗体联合紫杉醇处理组与PBS处理组相比差异有统计学意义(P=0.003 2)。PD1抗体处理组与联合用药组相比差异有显著统计学意义(P=0.008 5)。另外,不同组荷瘤小鼠肿瘤微环境中CD8+T细胞产生IFN-γ的变化是联合用药组与PBS处理组相比差异有统计学意义(P=0.009 2)。联合用药组与紫杉醇组相比差异有统计学意义(P=0.010 9)。PD1抗体处理组与联合用药组相比差异有显著统计学意义(P=0.039)。把不同组荷瘤小鼠的生长曲线比较得出,PD1抗体治疗组与PBS组相比差异有统计学意义(P=0.004 0);PD-1抗体联合紫杉醇治疗组与紫杉醇治疗组相比差异有统计学意义(P=0.029 8)。其生存率比较,发现PD1抗体治疗组与联合用药组相比差异有统计学意义(P0.000 1);紫杉醇组与联合用药组相比差异有统计学意义(P0.000 1)。结论 PD1抗体联合紫杉醇治疗显著增强小鼠乳腺癌治疗效果。本研究为乳腺癌的临床治疗提供理论及实验基础。     

小柴胡汤单剂与糖皮质激素受体

糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor,简称GCR）的研究已深入到分子水平,阐明了糖皮质激素（Glucocorticoid,简称GC）与GCR的作用机制[1],纯化了GCR,弄清了GCR的一级结构及与其结合的DNA序列[2],克隆出了GCR的cDNA[3]。     

系统性红斑狼疮患者淋巴细胞增殖活性分析

目的:探讨系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞核仁嗜银蛋白(AgNORs)和T细胞亚群及辅助性T细胞亚群(Th)的的关系及其临床意义,指导临床诊断与治疗。方法:PBMC经多克隆T细胞活化剂刺激,以图像分析法检测AgNORs区面积与细胞核仁面积的百分比(I.S%);以微量细胞毒法检测T淋巴细胞亚群水平;以ELISA法检测血清中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4水平以来评价辅助性T细胞亚群活性。结果:(1)13例稳定期和17例活动期系统性红斑狼疮患者PBMC中活化T细胞AgNORs表达分别为(5.14±1.06)I.S%和(3.21±1.40)I.S%,与正常对照组(6.69±1.30)I.S%相比,均显著下降(分别有P<0.05,P<0.01);活动期显著低于稳定期(P<0.01);(2)与稳定组和正常对照组相比,活动期系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞计数(23.5±7.8)%和CD4+/CD8+比值(0.58±0.31)显著降低(P<0.01),CD8计数明显升高,为(37.4±12.1)%(P<0.05);(3)与稳定组和正常对照组相比,活动期SLE患者血清IL-4水平明显升高,为(37.2±2.7)pg/mL,(P<0.05),IFN-γ分泌为(17.9±2.7)pg/mL,较正常对照组明显降低(P<0.05),与稳定期患者无显著差异(P>0.05)。结论:系统性红斑狼疮患者细胞免疫活性低于正常水平;(2)活动期患者血清IL-4分泌水平增高,IFN-γ水平降低,提示Th1类活性降低,在系统性红斑狼疮中存在Th1/Th2的不平衡。     

ENA多肽抗体谱检测的临床意义

ＥＮＡ多肽抗体谱检测的临床意义许泼实罗虹高航云８０年代以前，自身免疫病的诊断主要依靠抗核抗体的检查，操作麻烦而且阳检率不高。自８０年代始，国外对抗核抗体的研究开始转入抗体所作用的自身核杭原的分子组成、抗原表位的研究。我国也运用免疫印迹技术（ＩＢＴ）将...     

乙型肝炎病毒感染者血清中丁型肝炎病毒标志物检测分析

目的 了解丁型肝炎病毒(hepatitis delta virus,HDV)感染标志物在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者中的分布状况并分析其临床意义.方法 收集HBV感染者的临床资料和血清样本,通过酶联免疫分析法检测其血清HBV感染五项指标、HDVAg和Anti-HDV,结合临床诊断和生化指标进行分析.结果 收集HBV感染者样本462例,其中无症状携带者210例,慢性肝炎175例,急性乙肝35例,肝纤维化42例,检出HDV感染率为4.8％,男性显著高于女性,肝纤维化组的HDV感染率最高,为9.5％,其次为慢性肝炎的6.9％,45～60岁人群的HDV感染率为7.8％,显著高于其他年龄段.结论 慢性乙肝和肝纤维化病例的HDV感染显著增高,提示HDV感染与肝病的严重程度相关,建议对肝病患者开展血清HDV感染标志物检查,鉴别是否存在HDV重叠感染.     

马方综合征临床实验室基因诊断

目的建立马方综合征(MFS)临床实验室基因诊断流程, 对MFS家系进行临床实验室基因诊断。方法利用二代高通量测序对2020年1月至12月到阜外华中心血管病医院(河南省人民医院心脏中心)就诊的2个MFS家系患者FBN1基因进行测序分析, 然后利用Sanger测序验证二代高通量测序结果, 同时对家系正常人及100名健康人进行突变位点Sanger测序以明确家系中FBN1基因致病性突变, 并于2个家系孕妇孕中期指导其进行产前诊断。结果 MFS临床实验室诊断显示2例MFS患者FBN1基因分别存在c.2560T>C 杂合突变、c.6772T>C杂合突变的致病性突变, 2个家系中正常人及100名健康人均未见此突变;产前诊断显示家系一胎儿存在FBN1基因c.2560T>C杂合突变, 为MFS患儿, 家系二胎儿FBN1基因未见突变, 建议继续妊娠, 产后随访结果与临床实验室诊断结果一致。结论成功建立了MFS临床实验室基因诊断流程, 对明确MFS临床诊断提供重要的参考依据。