贴壁法体外培养小鼠神经干细胞

神经干细胞是神经组织特异性的具有多向分化潜能的一类干细胞 [1]。国内外对神经干细胞的分离、培养已有较多研究 ,不同的实验室有不同的培养方法及培养条件。但用贴壁法体外培养神经干细胞的研究很少见报道 ,本实验成功地用贴壁法对小鼠的神经干细胞进行了分离、培养和细胞鉴定 ,并对其生长方式进行了观察。现报告如下。1　材料与方法1 .1　材料　实验动物为成年昆明种小白鼠 ,由广西医科大学实验动物中心提供 ,饲养观察 1周后使用。主要试剂为 Dulbecco/F1 2改良培养基 [DMEM/F1 2( 1∶ 1 ) ],碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF) ,胎牛…     

RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松

目的分析RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松研究现状,并对两者的研究进行展望。方法从中国知网上下载"RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松"方面的论文,运用文献计量学和知识图谱的方法,分析RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松的关系的研究现状。结果 RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松方面的研究可归纳为"RANK/RANKL/OPG系统与骨重建"、"RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松"、"RANK/RANKL/OPG系统与类风湿关节炎"和其它等4个主流知识群。从知识图谱分析来看,RANK/RANKL/OPG系统与骨重建、RANK/RANKL/OPG系统与骨质疏松是研究的热点,OPG在骨吸收中起重要作用。结论 RANK/RANKL/OPG系统在阐明骨质疏松发生机制中有重要作用,OPG及其系统其他组分有可能作为以高骨吸收为特征的许多疾病的治疗药物。     

雌激素与葛根素组合治疗去卵巢大鼠骨症的最佳剂量

背景：小剂量的葛根素联合雌二醇对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗效果与单独使用较大剂量的葛根素或较大剂量的雌二醇效果相近。目的：寻找治疗Ⅰ型骨质疏松症最佳的雌二醇和葛根素的剂量搭配。方法：64只健康雌性大白鼠等分为假手术组、去卵巢模型组、葛根素-50组、雌二醇-200组、葛根素＋雌二醇-5,50,100,150组。除假手术组外,其余大鼠均建立去卵巢动物模型。葛根素-50组大鼠皮下注射葛根素50mg/kg,1次/d;雌二醇-200组大鼠皮下注射雌二醇200μg/kg,2次/周;葛根素＋雌二醇-5,50,100,150组大鼠皮下注射葛根素25mg/kg,1次/d同时分别注射雌二醇5,50,100,150μg/kg,2次/周。结果与结论：去卵巢模型组大鼠骨密度和骨钙、骨磷水平明显低于假手术组（P〈0.05）,骨组织呈骨质疏松的病理改变;葛根素和/或雌二醇治疗10,20周后骨密度和骨钙、骨磷水平明显升高（P〈0.05）,其中葛根素＋雌二醇-100组治疗去卵巢大鼠骨质疏松的效果最为明显,提示葛根素25mg/kg,1次/d＋雌二醇100μg/kg,2次/周是治疗去卵巢大鼠骨质疏松的最佳搭配剂量。     

构建组织胚胎学实验教学平台,培养学生综合素质

实验课是组织胚胎学教学中重要部分.通过建立网络课程平台、编写实验教学用书、开展本科生导师制活动和采取灵活多样的实验教学法等方式构建组织胚胎学实验教学平台,培养学生综合素质.     

雌激素受体-α基因PvuⅡ、Xba Ⅰ多态性及山茶籽油与广西壮族绝经后骨质疏松症的关联性

目的:探讨雌激素受体-α(ER-α)基因多态性及山茶籽油与广西壮族妇女绝经后骨质疏松症(PMOP)的关联性.方法:615例广西长期食用山茶籽油壮族妇女和616例广西长期非食用山茶籽油壮族妇女,定量超声骨质密度仪测量2组右侧足跟骨宽带超声衰减值(BUA),PCR-RFLP检测2组ER-α基因多态性.结果:食用山茶籽油组绝经妇女与非食用山茶籽油组绝经妇女同一年龄组相比较,前者的不正常骨量和骨质疏松症的患病率均明显低于后者.ER-α基因PvuⅡ等位基因频率在2组中存在差异,P等位基因患PMOP的风险是p等位基因的1.566倍.食用山茶籽油组绝经后骨质疏松症携带XbaⅠ酶切位点的X等位基因分布频率明显少于非食用山茶籽油组绝经后骨质疏松症.结论:提示P等位基因可能是PMOP的遗传易感基因;食用山茶籽油对PMOP有防治作用,X等位基因可能是对山茶籽油起交互作用的敏感基因.     

广西壮族及汉族人群雌激素受体-α基因多态性的分析

目的：研究雌激素受体-α基因PvuⅡ和XbaⅠ多态性在广西壮、汉两民族中的分布。方法：采用PCR-RFLP方法检测壮族和汉族PvuⅡ和XbaⅠ多态性，比较其在两民族中的分布频率，并与其他种族的分布进行比较。结果：PvuⅡ等位基因P、p频率在壮族与汉族两个民族正常人群中分别为33．6％、66．4％和31．9％、68．1％；XbaⅠ等位基因X、x频率分别为22．4％、77．6％和24．2％、75．8％，在壮、汉两民族中比较差异均无显著性；与瑞典、韩国种族比较，PvuⅡ基因型分布及等位基因频率均存在显著差异。结论：雌激素受体-α基因PvuⅡ多态性与瑞典、韩国种族间分布有明显的差异。这种差异可能是导致一些疾病在不同种族、不同地区间的发生、转归和预后不同的遗传因素之一。     

广西壮族与汉族人群白细胞介素1β基因5号外显子＋3953C／T多态性的差异

背景：研究发现白细胞介素1β基因5号外显子＋3953C／T位点处存在多态性，这种基因多态性与胃癌、风湿病、关节炎等疾病有关，而白细胞介素1β基因型在中国壮族的分布特点又如何呢？ 目的：观察白细胞介素1β基因5号外显子＋3953C/T多态性在中国广西壮、汉两民族中的分布，并与高加索人和非洲白人进行比较。 设计：对比观察。 单位：右江民族医学院组织学与胚胎学教研室。 对象：观察对象为广西右江民族医学院附属医院健康体检者。壮族155名，男80名，女75名，平均年龄（37&;#177;9）岁；汉族195名，男100名，女95名，平均年龄（38&;#177;9）岁。相互间无血缘关系，且均对检测项目知情同意。 方法：实验于2003-06／2005—05在广西医科大学医学科学实验中心完成。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测155名壮族人和195名汉族人的白细胞介素1β基因5号外显子＋3953C／T多态性，用基因直接计数法计算健康人群白细胞介素1β的基因型及等位基因频率，并结合文献与高加索人、非洲白人进行了不同种族间的分析比较。 主要观察指标：不同种族人群白细胞介素1β（＋3953）位点基因型频率及等位基因携带频率比较。 结果：纳入壮族和汉族健康体检者分别155和195名，均进入结果分析。①广西壮、汉族人群白细胞介素1β基因＋3953C／T基因型和等位基因分布频率相近（壮族人群CC，CT，TT基因型和C，T等位基因分布频率：94．8％，5．2％，0，97．4％，2．6％；汉族分别为93.3％，6．7％，0，96．7％，3．3％，P〉0．05）。②高加索人、非洲白人与广西壮、汉两民族人群间白细胞介素1β基因型分布及等位基因携带频率差异明显（高加索人CC，CT，TT基因型和C，T等位基因分布频率：52．2％，43．9％，3．9％，74．1％，25．9％；非洲白人分别为60．4％，33.2％，6．4％，76．4％，23．6％，P〈0．01）。 结论：广西壮、汉族白细胞介素1β基因5号外显子＋3953C／T多态性分布相近．但与高加索人、非洲白人分布存在明显差异。     

血清培养基辅以碱性成纤维细胞生长因子培养扩增小鼠神经干细胞

背景：神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞，是研究神经系统的发生、发育、发展规律及其内在的分子生物学、细胞学调控机制的理想载体，在神经系统疾病及损伤的治疗中具有广阔的应用前景。探讨一套较为简便、有效和实用的神经干细胞体外培养体系是其应用的前提和基础。 目的：观察血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子对小鼠神经干细胞体外培养的影响。设计：单一样本观察。 单位：右江民族医学院组织学与胚胎学教研室。 材料：2个月龄昆明种小白鼠5只，雌雄不拘。方法：实验于2003-06／2005-05在广西医科大学组织学与胚胎学试验室完成。①采用贴壁培养法，从成年小鼠大脑皮层分离并体外培养成年小鼠大脑皮层细胞，制成细胞悬液后将其置人DMEM／T12（1：1）液（包括体积分数为0．15的胎牛血清，碱性成纤维细胞生长因子20帆，青霉素100u／mL和链霉素100u／mL）培养，获得细胞克隆。②应用免疫组织化学技术检测克隆细胞巢蛋白的表达。 主要观察指标：①培养细胞形态学观察。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果。㈣神经干细胞鉴定。 结果：④培养细胞形态学观察：细胞接种后，绝大多数细胞在12h内附壁，细胞变扁平，接种后第3天，细胞开始生长，细胞数量增多，接种后第5天时生长成为数10个细胞到数百个细胞克隆，到第七八天，细胞占据瓶底80％～90％。经传代后仍成黏附生长，细胞形态规则，边界清楚。②培养细胞苏木精-伊红染色观察结果：可见细胞圆形或椭圆形，胞质少呈嗜酸性，细胞核大而圆，单个居中，着色深。③神经干细胞鉴定：免疫荧光检测显示，细胞巢蛋白抗原呈阳性。 结论：分离的小鼠大脑皮层细胞在血清培养基并辅以碱性成纤维细胞生长因子的培养条件下，具有很强的增殖能力，传代后表达巢蛋白，依然具有神经干细胞的特征。     

体外分离骨髓间充质干细胞在诱导条件下的成骨能力特征

背景：利用骨髓间充质干细胞的多方向分化潜能，选择合适的生物材料和适当的生长因子联合应用，可达到修复组织缺损的目的。 目的：观察兔骨髓间充质干细胞的生长特点及其在诱导条件下的成骨能力。设计：单一样本实验。 单位：右江民族医学院组织胚胎学教研室、右江民族医学院附属医院。 材料：实验于2004—06在右江民族医学院组织胚胎学教研室完成。新西兰大白兔，雄性，体质量2．0-2．5kg。 方法：抽取兔骨髓组织，梯度离心后，保留贴壁细胞传代，稳定传代后改用诱导成骨培养液（50mL／L胎牛血清的Dulbecco改良培养基含10mmol／L β-甘油磷酸钠，10nmol／L地塞米松，50mg／L维生素C）进行培养，隔日换培养液1次。通过倒置显微镜观察、碱性磷酸酶染色、骨连接素、骨桥素免疫细胞化学染色等方法观测骨髓间充质干细胞的成骨特性。 主要观察指标：①骨髓间充质干细胞的形态学观察。②骨髓间充质干细胞的成骨特性。 结果：①骨髓间充质干细胞的形态学观察：原代兔骨髓间充质干细胞七八天即可长满，并可稳定传代，传代细胞五六天即可传代。②骨髓间充质干细胞的成骨特性：碱性磷酸酶免疫组化染色可见胞浆中出现大量棕褐色颗粒，对照染色细胞胞浆未见着色；骨连接素、骨桥素免疫组织化学检测可见胞核染成淡蓝色，胞浆内出现大量的棕黄色颗粒，呈明显强阳性，对照染色中胞浆内没有出现黄色颗粒。 结论：兔骨髓间充质干细胞用地塞米松．维生素C和β-甘油磷酸钠培养液联合诱导培养后，符合成骨细胞的形态特征和生物学特性，具有成骨活性，可在短期内为体外构建组织工程化骨提供白体种子细胞。     

山茶籽对去卵巢和非去卵巢雌性大鼠肝组织影响的实验研究

目的:通过观察山茶籽对去卵巢和非去卵巢雌性大鼠肝组织结构和功能的影响,为山茶籽在妇女疾病的防治和保健提供实验依据。方法:选取6月龄健康雌性大鼠80只,分成4组。对照组(Normal)、去卵巢模型组(OVX)、山茶籽+去卵巢组(Ts+OVX)和山茶籽+对照组(Ts+Normal)。Ts+OVX组和Ts+Normal组,用山茶籽醇提物水溶液灌胃,10 ml.kg-1.d-1(5 g生药/g),两个治疗组的连续用药12周。12周后,麻醉大鼠取左心血,处死后取肝脏。肝切片光镜观察肝组织形态结构,并对血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(A)和球蛋白(G);肝匀浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和超氧阴离子自由基(O2-.)清除率进行测定,数据进行统计学分析。结果:与Normal组比较,两个治疗组肝体质量比、血清AST、ALT和A/G及肝匀浆GSH-Px、MDA和清除率差异无统计学意义(P>0.05),肝组织切片没有肝组织损害病理改变。结论:山茶籽醇提物对去卵巢和非去卵巢雌性大鼠没有肝损害作用。