脱细胞气管基质及PGA膜细胞生物相容性比较研究

目的:采用体外细胞培养的方法,对自制的家兔、SD大鼠脱细胞气管基质材料、PGA膜的细胞生物相容性进行比较研究,探讨脱细胞基质用作组织工程化人工涎腺样组织体外构建研究所需支架材料的可能性。方法:取新生SD大鼠颌下腺细胞,经体外培养扩增后,将传代的颌下腺腺细胞接种在上述3种材料上进行体外培养,对材料上的细胞进行形态学、细胞增殖情况、材料/细胞培养上清液中α-淀粉酶含量进行观察或检测。结果:涎腺细胞均能在气管基质材料及PGA膜上黏附、生长。以天然气管衍生材料更佳。结论:脱细胞气管基质材料是一种细胞生物相容性良好的支架材料,可用于组织工程化涎腺样组织体外构建的实验研究。     

猕猴组织工程化骨构建及其修复异体骨缺损的放射学评估

目的 用生物衍生骨材料和同种异体骨髓基质干细胞( MSCs)构建组织工程化骨并从放射学评估其植入猕猴体内修复长骨大段骨缺损的效果. 方法 于猕猴胫骨结节抽取 MSCs并使诱导分化为成骨样细胞,培养后与人源生物衍生骨材料体外复合构成组织工程化骨,植入 15只异体猕猴桥接桡骨 2.5 cm节段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料桥接对侧同样大小骨缺损作为对照组 ;另取 2只猕猴双侧桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组.术后 3, 6, 12周时双侧前臂正侧位摄 X线片,空白组于术后 12, 24周摄 X线片,用放射影像学评分和图像分析 X线阻射影比较骨缺损的修复情况. 结果 实验组骨缺损放射影像学评分以及新生骨痂的密度在 3, 6, 12周均优于对照组.空白组术后 24周骨缺损均无愈合. 结论 生物衍生材料和同种异体 MSCs构建组织工程化骨植入猕猴桥接大段骨缺损可使骨缺损达较快修复.     

治疗同种免疫性血小板减少症患者时血小板交叉配合及HLA配型的成本

难治性同种免疫性血小板减少症患者常需要输注血小板,但随机输注血小板会导致发热,败血症,脾大,消耗性凝血和活动性出血,因此需输配型相合的血小板,即:1)交叉配合相容的随机供者的混合血小板;2)交叉配合相容的单个供者血小板;3)HLA相合的单个供者血小板;4)交叉配合相容及HLA相合的单个供者的血小板。为了权衡临床实践中血小板交叉配合及HLA配型的利弊,作者采用经济指标比较了几种血小板交叉配合及HLA配型的成本及效果。交叉配合法包括:依赖补体的淋巴细胞毒试验(LCT),抗生物素蛋白-生物素酶联免疫实验(ELISA),血小板悬浮免     

犬膀胱移行上皮细胞的体外连续培养及生物学特征观察

目的探讨犬膀胱移行上皮细胞体外连续培养和纯化方法,为进一步构建组织工程尿路上皮组织提供实验依据。方法无菌获取幼犬膀胱组织,0.125%胰蛋白酶消化获取单细胞悬液,于上皮细胞无血清培养基中培养。采用0.05%胰蛋白酶和0.02?TA消化、纯化细胞,动态观察细胞形态变化和增殖情况,MTT法绘制生长曲线;透射电镜观察细胞超微结构;SABC法对培养的细胞进行免疫组织化学鉴定;并采用流式细胞仪检测不同代次细胞的细胞周期和倍体水平。结果采用酶消化法能从4～6cm2的膀胱黏膜组织中分离获取(1～5)×106个细胞。原代培养接种24h后可见大量细胞贴壁,第7天细胞生长融合达80%～90%,细胞排列呈典型的铺路石样。MTT法测定第3代细胞在传代培养7d生长达高峰;传代并纯化的细胞纯度高,无成纤维细胞污染,至第4～6代细胞仍保持良好形态。透射电镜下,可见上皮细胞特征性张力微丝和细胞间桥粒连接。细胞角蛋白AE1/AE3免疫组织化学染色,胞浆呈棕黄色阳性反应。不同代次细胞均为二倍体细胞。结论酶消化法能从较少的膀胱组织中分离获取足量、较纯的膀胱移行上皮细胞,细胞在无血清培养基中能连续传代扩增,可以满足进一步构建组织工程尿路上皮组织的需要。     

人血清载脂蛋白AⅡ酶联免疫测定法研究

本文介绍测定人血清载脂蛋白ＡⅡ（ａｐｏＡⅡ）的酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）。特异抗人ａｐｏＡⅡ血清由免疫山羊获得，按过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶羊抗人ａｐｏＡⅡγ球蛋白交联物。用羊抗人ａｐｏＡⅡγ球蛋白（２０μｇ／ｍｌ）包被聚苯乙烯酶标板。结果表明：ａｐｏＡⅡ抗血清与ａｐｏＡⅠ、ａｐｏＣｓ，ａｎｏＢ１００（ＬＤＬ）以及人血清白蛋白无交叉反应，最小检测量为５０Ｏｎｇ，标准曲线工作范围为０．２５～８．００ｍｇ／ｄｌ，板内及板间变异系数分别为５．０％～９．２％及６．８％～１１．７％，回收率１０６．０±２．１％（ｎ＝４）。应用本法测得４１例血脂正常者ａｐｏＡⅡ含量为２４．４±５．９ｍｇ／ｄｌ，与用ＲＩＤ法测得的结果２６．７±４．６ｍｇ／ｄｌ相比（ｒ＝０．８０００，Ｐ＜０．００１），无显著性差异。本法特异性强，灵敏度高，简便快速。     

离心力在体外构建组织工程软骨中的作用

目的探讨离心力对软骨细胞功能表达和组织工程软骨结构的影响。方法采用组织化学和免疫组织化学观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原表达情况,应用DMMB分光法测定组织工程软骨硫酸化糖胺多糖(GAG)的含量。结果体外培养2、4、8周时,静态培养的组织较离心培养的组织Ⅱ胶原免疫组织化学染色弱;并且其GAG含量低于离心培养组织GAG含量,各组差异均有统计学意义(F分别为12.3、10.2、9.1,P<0.05)。离心培养的组织工程软骨GAG含量于第4周达到高峰,均值为(7.60±0.79)%。结论离心力刺激软骨细胞分泌GAG和Ⅱ型胶原,并且影响组织工程软骨结构的排列。     

以脱细胞牛软骨基质为支架体外构建组织工程软骨的实验研究

目的以脱细胞牛软骨基质（acellular cartilaginous matrix,ACM）作支架体外构建组织工程软骨,了解其作为软骨组织工程支架的可行性。方法 2003年1月-2005年12月联合应用冻干-反复冻融-酶消化法对牛软骨基质行脱细胞处理。将体外培养扩增的2～5代兔软骨细胞接种在材料上,体外培养3周,观察软骨细胞在支架材料上的生长分布情况。结果软骨细胞在制备的ACM上可较好地黏附生长,并且分泌大量Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖;但软骨细胞不能长入ACM内部,只能在表层生长,少量软骨细胞分布在ACM孔隙中。结论 ACM支架材料具有良好的细胞相容性和活性,并且能促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型。     

血小板交叉配合的理论和实践

在治疗白血病、癌症和再障的过程中,为骨髓衰竭的病人提供有效的血小板输注以预防或治疗血小板减少性出血已有很大的进展,并为骨髓移植创造了条件。然而,长期提供血液制品的一个仍未能解决的问题和重要障碍是输注血小板常常诱发同种免疫,导致输入的血小板被破坏(难治性血小板减少)。人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类抗原是同种免疫的最常见原因,输注从单一供体单采得到的HLA相合的血小板可以避免。这种血小板可从家系成员中选择,但通常是从HLA定型的随机供者中单采血小板获得。由于HLA抗原具有多态性,而要建立和保持2000～5000定型的供者登记队伍,这是一件繁杂而耗资的事情。而且HLA相合的输注中亦有20％～35％不成功,其重要原因是供者的HLA-A和-B位点与受者不完全相合,但与病人有相同的交叉反应,组内抗原(Cross-reacting group CREG),因而病人可产生组内抗体。20％～25％病人的抗体是针对血小板的非     

脱细胞羊膜预防生物衍生肌腱修复鸡屈趾肌腱Ⅱ区缺损修复后的粘连

背景:羊膜有预防肌腱修复后粘连的作用,但存在一定的免疫排斥反应。目的:探讨脱细胞羊膜对生物衍生肌腱修复鸡屈趾深肌腱Ⅱ区缺损修复后肌腱粘连的预防作用。方法:分别以罗曼鸡右爪的第2,3,4趾将实验分成生物衍生肌腱组,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组以及自体肌腱组,建立屈趾深肌腱Ⅱ区1cm缺损模型。以生物衍生肌腱桥接第2,3趾缺损,以自体肌腱桥接第4趾的肌腱缺损,在第3趾的生物衍生肌腱和上下吻合口周围包裹完整的脱细胞羊膜。结果与结论:生物衍生肌腱组与自体肌腱组移植物为外源性愈合,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组羊膜有效地防止了成纤维细胞向修复区域内浸润,形成内源性愈合。肌腱粘连程度生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组优于生物衍生肌腱组和自体肌腱组,生物衍生肌腱组和自体肌腱组相似,移植物周围的炎症反应生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组>生物衍生肌腱组>自体肌腱组。证实脱细胞羊膜能通过机械性阻挡周围肉芽组织向修复区域内生长而防止外源性愈合造成的肌腱粘连。