细胞凋亡在脓毒症免疫紊乱中作用及其调控途径的思考

严重创伤、烧伤、休克及外科大手术应激后常常并发脓毒症,进一步发展可导致脓毒性休克甚至MODS,是临床危重症最主要的死亡原因之一.严重脓毒症和MODS病情进展迅速、临床处理棘手、患者预后不良,已成为现代创伤外科及危重病医学面临的突出难题.近年来的资料提示,创伤后脓毒症的发生与机体免疫功能紊乱密切相关,突出表现为细胞免疫功能受抑,其中大量免疫细胞特别是淋巴细胞凋亡进而诱发免疫功能失调被认为是脓毒症发生的重要机制.因此,深入了解细胞凋亡在脓毒症发病中的确切作用与地位,探讨其关键作用环节并寻求新的防治途径无疑具有极其重要的临床意义.     

内毒素刺激诱导人外周血细胞促炎细胞因子的释放

目的：探讨内毒素（LPS）体外刺激对人外周血细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6和IL-10分泌的影响.方法：采集20例健康志愿者外周血,与培养基等体积混合后体外培养,给予不同浓度LPS（100 ng/ml,500 ng/ml）刺激,分别于刺激后0、2、6、12、24 h收集细胞培养上清液,ELISA法检测其HMGB1和TNF-α、IL-6、IL-10的含量.结果：体外LPS刺激诱导外周血细胞分泌HMGB1增加,12 h后表达持续升高（P〈0.01）,分泌水平呈明显时间依赖性;TNF-α、IL-6产生亦呈时间、剂量依赖性,分别于24 h和6～12 h达分泌高峰（P〈0.01）;IL-10表达量均较低.结论：TNF-α、IL-6为早期炎症介质,HMGB1为介导内毒素所致迟发死亡的重要晚期炎症介质,它们在脓毒症的发生、发展中可能扮演重要角色.     

X盒结合蛋白1在高迁移率族蛋白B1诱导树突状细胞成熟分化中的作用

目的 X盒结合蛋白1(XBP-1)是内质网应激(ERS)的关键调节分子,本研究探讨XBP-1活化在高迁移率族蛋白BI(HMGB1)诱导树突状细胞(DC)成熟分化中的作用.方法 分离正常BALB/c小鼠脾脏DC进行体外培养,给予HMGB1刺激后检测细胞XBP-1活化情况;应用RNAi技术诱导XBP-1基因沉默后检测DC功能状态.结果 HMGB1刺激后,XBP-1表达特别是活化水平明显升高(P<0.05);XBP-1基因沉默DC给予HMGB1刺激不能有效诱导其成熟分化,表面标志物CD80、CD86及主要组织相容性复合体Ⅱ分子表达上调受抑,分泌白细胞介素-12、肿瘤坏死因子-α功能增强不明显.结论 XBP-1活化对HMGB1诱导DC成熟分化至关重要.     

血必净注射液对系统性红斑狼疮小鼠树突状细胞免疫效应的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）在系统性红斑狼疮（SLE）发病机制中的作用以及血必净注射液对SLE 小鼠DC免疫效应的影响.方法：30只SLE模型小鼠（清洁级EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠）,均为雌性,体重30~40 g.分为模型组（随机选择8周龄5只和10周龄5只）、8周龄给药组（10只）、10周龄给药组（10只）.雌性昆明种小鼠10只作为正常对照组.两给药组连续14 d腹腔内注射血必净注射液6.4 ml/kg后处死,分离脾脏,提取DC和T淋巴细胞,流式细胞术检测DC细胞免疫表型,MTT法检测脾T淋巴细胞增殖活性,并与模型组和正常对照组比较.结果：血必净注射液治疗可以显著升高SLE小鼠脾脏DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC结Ⅱ的表达（P〈0.05或P〈0.01）,提高脾脏组织和DC培养上清中IL-12水平,并明显减轻SLE小鼠T淋巴细胞增殖的抑制效应（P〈0.05或P〈0.01）.8周龄和10周龄给药组间差异无显著性（P〉0.05）.结论：血必净注射液治疗SLE可以改善DC的功能障碍,促进淋巴细胞的增殖和发育.     

钙网蛋白参与缺氧预处理对氧化应激损伤大鼠成心肌H9c2细胞的保护作用

目的： 观察缺氧预处理(HPC)对氧化应激诱导大鼠成心肌H9c2细胞损伤的保护作用，探讨钙网蛋白(CRT)是否参与其保护效应及p38 MAPK是否参与其信号转导过程。方法: H9c2细胞随机分为8组：氧化应激(H₂O₂)组、短暂缺氧(HPC)组、HPC+H₂O₂组、SB203580+HPC + H₂O₂组、反义干扰(AS)组、AS+H₂O₂组、AS+HPC+H₂O₂组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶 (LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况；采用RT-PCR和Western blotting分别检测CRT表达和p38 MAPK磷酸化水平。结果: (1)HPC可减轻氧化应激损伤，与H₂O₂组比较，HPC+ H₂O₂组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低13.4%和44.0%，存活率增高12.7%(均P<0.05)；HPC前以特异性p38 MAPK抑制剂 SB203580预孵育消除HPC的保护作用，与HPC+H₂O₂组相比，细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和45.0%，存活率降低5.0%(均P<0.05)；(2)氧化应激明显上调CRT表达(较对照组高3.6倍)(P<0.05)；单纯短暂缺氧可诱导CRT表达(较对照组高1.4倍,P<0.05)，但上调程度较H₂O₂组低48%(P<0.05)；HPC可降低CRT过表达程度(降低26%) (P<0.05)；(3)反义寡核苷酸干扰CRT表达后HPC对氧化应激的保护作用降低，相关分析显示HPC诱导的CRT适度表达与细胞存活率正相关(r=0.8573,P<0.05)；(4) HPC前应用p38 MAPK抑制剂，抑制CRT表达上调(分别较HPC+H₂O₂组和HPC组低38%和23%) (均P<0.05)。结论: HPC可通过p38 MAPK信号途径诱导CRT表达上调，减轻大鼠成心肌H9c2细胞氧化应激损伤。     

内质网应激对树突状细胞表面晚期糖基化终产物受体表达的影响

目的:晚期糖基化终产物受体(RAGE)与其配体结合在炎症及免疫反应中具有重要作用.本研究探讨内质网应激(ERS)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导树突状细胞(DC)表面RAGE上调中的作用及意义.方法:分离正常BALB/c小鼠脾脏DC进行体外培养,给予HMGB1刺激后检测DC表面RAGE表达水平及细胞ERS相关分子...     

提高内质网应激在脓毒症中作用和意义的认识

严重烧伤、创伤及外科大手术等急性损伤后常伴有炎症反应及并发感染,进一步发展可导致脓毒症(sepsis)、脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS),是临床危重患者最主要的死亡原因之一.机体免疫功能紊乱在脓毒症及MODS发生发展及转归中的作用已受到国内外学者的广泛关注,是目前研究的热点问题之一.