piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建*○

背景：外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。 目的：探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。 方法：采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。 结果与结论：考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。关键词：piggyBac转座子;SO-RB50细胞;转染;Rb基因;基因治疗 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.033     

散瞳对Lenstar和A超测量白内障患者眼生物学参数的影响

目的　探讨散瞳对Ｌｅｎｓｔａｒ和Ａ超两种仪器测量白内障患者眼球生物学参数的影响,并评估散瞳前、后两者检测一致性的变化。方法　对３０例（３２眼）年龄相关性白内障患者分别应用Ｌｅｎｓｔａｒ和Ａ超测量散瞳前和散瞳后眼轴长度（ａｘｉａｌｌｅｎｇｔｈ,ＡＬ）、前房深度（ａｎｔｅｒｉｏｒｃｈａｍｂｅｒｄｅｐｔｈ,ＡＣＤ）及晶状体厚度（ｌｅｎｓｔｈｉｃｋｎｅｓｓ,ＬＴ）值,两种仪器测量顺序随机,每一种仪器散瞳前、后测量ＡＬ、ＡＣＤ及ＬＴ结果的差异采用配对ｔ检验分析,两种仪器散瞳前、后测量的一致性采用Ｂｌａｎｄ-Ａｌｔｍａｎ分析。结果　散瞳前、后Ｌｅｎｓｔａｒ测量的ＡＣＤ值分别为（２．３３±０．３８）ｍｍ和（２．３６±０．４０）ｍｍ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．００１）;散瞳前、后Ａ超测量的ＡＣＤ值分别为（２．８５±０．４０）ｍｍ和（２．９５±０．３９）ｍｍ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．００１）。散瞳前、后两种仪器各自测量的ＡＬ和ＬＴ值差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。两种仪器测量的９５％一致性界限:ＡＬ:散瞳前为－０．４１～０．２６ｍｍ,散瞳后为－０．３９～０．２７ｍｍ;ＡＣＤ:散瞳前为０．２９～０．７６ｍｍ,散瞳后为０．３８～０．７９ｍｍ;ＬＴ:散瞳前为－０．３９～０．５２ｍｍ,散瞳后为－０．３１～０．４３ｍｍ。两种仪器测量ＡＬ、ＡＣＤ及ＬＴ的一致性界限内最大差值（绝对值）:散瞳前分别为０．２９ｍｍ、０．７１ｍｍ和０．３９ｍｍ;散瞳后分别为０．２７ｍｍ、０．７４ｍｍ和０．３７ｍｍ。结论　散瞳后Ｌｅｎｓｔａｒ或Ａ超测量白内障患者的ＡＣＤ值均较散瞳前增大,但散瞳不影响ＡＬ和ＬＴ值的测量。两种仪器在白内障患者眼生物学参数测量的一致性不受散瞳影响。     

基于MR图像纹理特征的阿尔茨海默病分类模型

目的基于MR图像,提取脑部海马区域纹理特征参数建立阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的早期分类预测模型。方法研究数据来源于美国国立老年研究所ADNI数据库,收集研究对象的磁共振(magnetic resonance,MR)脑图像,分别基于左、右和双侧海马图像,通过区域增长法和Contourlet变换提取纹理特征参数,结合研究对象的基本信息作为特征变量采用高斯过程分类方法建立AD患者和健康对照的诊断模型以及轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)患者转变为AD的预测模型,并评价模型的灵敏度、特异度以及ROC曲线下面积。结果研究共纳入420例研究对象。基于AD和健康对照两组构建的分类模型,双侧海马区的灵敏度、特异度以及ROC曲线下面积分别为92.7%、87.1%和0.922,均大于基于左侧或右侧海马区图像建立的模型。基于MCI数据建立的AD早期预测模型中,灵敏度最高为82.4%,ROC曲线下面积最高为0.836。结论基于脑部海马区的Contourlet纹理特征构建预测模型,可以识别AD早期的病变情况,这将有助于早期监测MCI进展为AD,为减缓和治疗AD发病提供依据。     

miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用

目的　探讨miR-181a对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人小梁网细胞（HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法　HTMCs随机分为空白组（0 μmol·L^-1 H₂O₂）、200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组,分别使用相应浓度H₂O₂处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）蛋白表达。根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针检测各组细胞内活性氧（ROS）含量,使用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果　与空白组比较,200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组细胞存活率均降低（均为P<0.05）。细胞miR-181a mRNA的表达随着H₂O₂浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H₂O₂浓度的增加而降低（均为P<0.05）。与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高（均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达。与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低（均为P<0.05）。结论　miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H₂O₂诱导的HTMCs氧化应激作用。     

piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建

背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。     

2015年北京市小汤山医院体检人群糖尿病视网膜病变影响因素研究

目的 探讨糖尿病视网膜病变发生的影响因素,为预防糖尿病视网膜病变提供科学依据。方法 选取北京市小汤山医院2015年1 - 12月功能社区单位体检人群共555人为研究对象,应用多因素条件Logistic回归对影响糖尿病视网膜病变的生活习惯和行为因素进行分析。结果 多因素条件Logistic回归分析表明,学历、睡眠、以及高血压家族史与糖尿病视网膜病变独立相关。其中,和初中及以下学历的人相比,具有大学学历是糖尿病视网膜病变的保护因素(OR = 0.278,95%CI = 0.088～0.877),研究生学历同样也是糖尿病视网膜病变的保护因素（OR = 0.200,95%CI = 0.056～0.718）;同睡眠时长小于6 h相比,睡眠时长大于8 h为保护因素（OR = 0.516,95%CI = 0.316～0.854）;此外,高血压家族史也是糖尿病视网膜病变的保护因素（OR = 0.548,95%CI = 0.351～0.857）。结论 高学历、适当的睡眠时间均可预防糖尿病视网膜病变的发生。     

哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征的研究进展

正2014年支气管哮喘全球创议(GINA)与慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)全球创议(GOLD)科学委员会联合提出了哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征(ACOS)的相关概念~([1])。大量的相关文献指出:与慢阻肺患者相比,ACOS患者经历更频繁的急性加重~([2-3]),呼吸系统症状较严重,例如呼吸困难、喘息(但无明显加重的咳嗽、咳痰)和活动耐力下降~([2]);与单纯的慢阻肺、哮喘患者相比较,ACOS患