人Tumstatin功能区基因原核表达载体的构建

【目的】构建人肿瘤抑素（Tumstatin）功能区Tum-5原核融合表达载体pET42a-Tum5。【方法】根据人Tumstatin基因序列以及大肠杆菌密码子的偏爱性设计合成多个寡核苷酸,经PCR拼接获得Tum-5基因;酶切目的基因与pET42a载体,回收纯化后做定向克隆连接,转化E.coliDH5α;重组质粒通过PCR、BglⅡ与XhoⅠ的双酶切、DNA测序加以鉴定。【结果】重组质粒PCR扩增出的产物与目的基因大小相同;重组质粒双酶切电泳分析,插入片段大小约320 bp,与预期结果一致;对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确,插入序列与载体读码框架相匹配。【结论】成功构建人Tum-5基因表达载体,该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础。     

重组人血管抑素基因克隆与表达

目的：构建人血管抑素原核分泌型融合表达载体pEZZ18-As，诱导表达融合蛋白。方法：从人肝组织中提取总RNA，用RT-PCR的方法获得血管抑素基因，克隆到pEZZ18载体中，在E.coli DH5α中诱导表达。结果：成功构建人血管抑素表达载体并表达出目的蛋白。结论：该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础。     

人血管抑素基因分泌型融合载体的构建与表达

【目的】构建人血管抑素(angiostatin,As)原核分泌型融合表达载体pEZZ18-As,诱导表达As融合蛋白。【方法】根据人AscDNA序列的开放读码框架设计上、下游引物,从人肝组织中提取总RNA后,利用RT-PCR技术扩增As基因;酶切目的基因与pEZZ18载体,回收纯化后做定向克隆连接,转化E.coliDH5α;XbaⅠ及EcoRⅠ双酶切电泳与测序鉴定pEZZ18-As;诱导培养重组菌,表达目的蛋白。【结果】酶切pEZZ18-As,电泳分析插入片段长度为1111bp,与预期结果一致,对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确;SDS-PAGE分析诱导培养重组菌,新出现的蛋白大小约61kD,与预期相符。【结论】成功构建人血管抑素表达载体并表达出目的蛋白,该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础。