安岳县艾滋病死亡1例分析

安岳县首例艾滋病病例于2002-10-25因治疗无效而死亡,现报告如下。1一般资料死者:杨某某,女性,29岁,初中文化,安岳县人,农村户口,一家3人,丈夫29岁,初中文化,1997年在云南务工,女儿7岁。2临床资料死者2002-10-1因反复腹泻4月余,在四川大学华西医院住院,入院查体生命体征平稳,营养中等,神萎、腹软、无压痛、心肺未见异常,入院后内镜及病理检查,初步诊断为浅表性胃窦炎,霉菌性食道炎,疑似艾滋病(AIDS)。经治疗病情未见好转,10月18日自动出院。出院后病情恶化,进行性消瘦,神志昏迷,全身浅表淋巴肿大,多个脏器损害、功能衰竭、2002-10-25因中…     

人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定

目的：高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法：人工合成经密码子优化的NGAL基因,构建原核表达重组质粒pW28-NGAL,IPTG诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的rhNGAL抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争ELISA法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE分析纯度;最后运用Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果：高效获得高纯度NGAL重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得6株高效价单克隆抗体;其中,25号单抗为IgG1亚型,余者均属IgG2a亚型,且19、35号单抗的亲和常数分别为3.06×109、2.14×109。SDS-PAGE分析表明纯度均大于90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论：本研究利用密码子优化技术高效表达制备了NGAL重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为NGAL的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。     

提高农村结核病发现率探讨

目的 探索农村结核病发现的方法，提高结核病的发现率。方法 搜集不同项目措施，对结核病的发现率和转诊率进行比较。结论 依靠政府、广泛宣传培训、树立法制观念、依法管理、落实激励政策是提高结核病发现率的重要保证．为全面完成《全国结核病防治规划(2001-2010年)》的目标打下基础。     

金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中SdrE蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现 SdrE蛋白质的表达几乎不受环境因素（包括温度、金属离子）的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现SdrE蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,SdrE蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现SdrE蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了SdrE蛋白质的生物学功能,为基于SdrE蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。     

2019-nCoV入胞机制及其抑制剂的研究进展

新型冠状病毒（2019 novel coronavirus,2019-nCoV）与急性呼吸综合征冠状病毒（severe acute respiratory syndromes coro－navirus,SARS-CoV）的核酸和编码的病毒蛋白高度同源,预示其生物学功能也可能非常相似。2019-nCoV利用其刺突蛋白（spike protein,S）的S1亚基与宿主细胞表面的血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2,ACE2）受体结合,同时利用宿主蛋白酶切割S蛋白促进发生膜融合,进而内吞入胞。阻断2019-nCoV入胞过程的抑制剂主要可分为中和抗体/受体抑制剂、蛋白酶抑制剂和内吞调节因子抑制剂。目前,对2019-nCoV的认识仍然非常有限。相信随着研究的不断推进,能够更加深刻地认识病毒的致病机制,开发出更高效的抗病毒药物。     

重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性.方法:利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达;对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性.结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36000;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104 IU/mg.结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当.为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长

目的：对金黄色葡萄球菌表面蛋白质（serine-aspartate repeat,SdrE）进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法：利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果：（1）构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。（2） 获得了纯度较高（85%）的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。（3）培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论：利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。     

肺炎链球菌热休克蛋白GrpE的表达、纯化及热稳定性研究

1. 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室,重庆　400016;2. 成都中医药大学附属医院检验科,成都　610072;3. 感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆　400016;4. 重庆市渝北区人民医院医学检验科,重庆　402220     

人α1微球蛋白质的克隆、表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:构建人α1微球蛋白质(α1-microglobulin,α1M)基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达α1M蛋白质,纯化并初步鉴定其生物学活性。方法:PCR扩增α1M基因序列,然后转化入大肠杆菌B834中进行表达,利用镍离子亲和层析、离子交换层析及分子筛纯化,ABTS法鉴定其生物学活性。结果:正确构建了α1M的表达质粒,α1M在大肠杆菌B834中为可溶性上清表达,纯化获得了纯度高达95%的α1M蛋白质,分子筛结果显示其在溶液中呈现单体和二聚体2种聚集状态,ABTS法结果显示了重组获得的α1M具有抗氧化活性。结论:α1M能在大肠杆菌B834菌中大量上清表达,且易于纯化,初步鉴定具有抗氧化活性,为下一步进行α1M蛋白质的晶体结构解析和相关功能研究奠定了基础。     

人α1微球蛋白质的克隆、表达、纯化及生物学活性鉴定

目的：构建人α1微球蛋白质（α1-microglobulin, α1M）基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达α1M蛋白质,纯化并初步鉴定其生物学活性。方法：PCR扩增α1M基因序列,然后转化入大肠杆菌B834中进行表达,利用镍离子亲和层析、离子交换层析及分子筛纯化,ABTS法鉴定其生物学活性。结果：正确构建了α1M的表达质粒,α1M在大肠杆菌B834中为可溶性上清表达,纯化获得了纯度高达95%的α1M蛋白质,分子筛结果显示其在溶液中呈现单体和二聚体2种聚集状态,ABTS法结果显示了重组获得的α1M具有抗氧化活性。结论：α1M能在大肠杆菌B834菌中大量上清表达,且易于纯化,初步鉴定具有抗氧化活性,为下一步进行α1M蛋白质的晶体结构解析和相关功能研究奠定了基础。