肿瘤患者尿液多胺检测结果分析

恶性肿瘤的发病率与死亡率已在我国疾病中占第二位。多年来,国内外许多学者对恶性肿瘤的早期诊断进行了多方面的探讨,近100多种肿瘤标志物相继应用于临床的诊治。为了探讨出一种更简便、灵敏度高、特异性强对肿瘤早期诊断能提供实用价值的检测方法。我们采用肿瘤患者尿液定性方     

人脐带源间充质干细胞体内外移植的免疫学特征

背景:部分体外实验证实人脐带源间充质干细胞具有同种异体的免疫耐受特性,然而对其体内研究尚处于异种异体之间,且结果及机制缺少统一性。目的:培养人脐带源间充质干细胞,通过体内外试验分析其移植免疫学特性。方法:应用组织块贴壁法提取人脐带源间充质干细胞,通过体外淋巴细胞混合反应检测其同种异体免疫耐受作用;应用流式细胞仪检测体内行人脐带源间充质干细胞移植前后患者血液中CD4、CD8浓度及比值变化,并通过ELISA方法对比体外淋巴细胞混合培养前后血液、培养上清及体内移植前后患者血液中白细胞介素2,10、γ-干扰素的浓度变化。结果与结论:体内外实验中,混合淋巴细胞反应前后血浆及细胞上清中的细胞因子浓度变化呈相似趋势:白细胞介素10较反应前上升(P<0.05),γ-干扰素较反应前下降(P<0.05)。人脐带源间充质干细胞移植后患者T细胞亚群中CD4+/CD8+比值较移植前轻度下降。说明人脐带源间充质干细胞具有同种异体免疫耐受及免疫调节作用。     

人脂肪间充质干细胞的分离培养与生物学特性

背景:脂肪来源间充质干细胞取材于吸脂手术所获得的脂肪抽吸物,可反复取材,原料来源充足。目的:建立一种体外分离培养人脂肪来源间充质干细胞的方法,并分析其生物学特性。方法:采用胶原酶消化法分离获取人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态;观察分析传代第3,7,10代细胞生长曲线;采用流式细胞仪检测传代第5代细胞表面标志表达。取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导,采用碱性磷酸酶染色及油红O染色鉴定。冻存传代细胞,分别于2,6个月后复苏,锥虫蓝染色计数复苏后细胞存活率。结果与结论:原代细胞3d贴壁,6d后开始快速增长并形成集落,11d左右达80%~90%融合,多呈纤维样;传代后细胞维持纤维样形态。传代细胞潜伏期24~48h,对数增殖期三四天,对数增殖期后第五六天进入平台期。间充质干细胞表面CD34、CD14、HLA-DR呈阴性表达,CD44、CD105、CD13呈阳性表达,HLA-ABC呈弱阳性表达。具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力,冻存复苏后细胞存活率达90%以上,且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性。     

富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白与肿瘤的关系

富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白(SPARC)是一种调节细胞外基质的糖蛋白,与某些基质成分、生长因子和细胞因子作用,参与组织重建、形态生成、细胞迁移和增殖,调节机体的生理和病理过程。现就其分子结构、生物学功能、相应机制、表达调节及与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移的关系等作一简述。     

不同方法对比检测脑脊液常规

脑脊液的检查对及时、准确的诊断和鉴别中枢神经系统感染性疾病具有重要意义.但目前多数医院仍在显微镜下用计数盘计数,这种方法不仅需要操作者有丰富的实践经验,而且费时,影响实验结果准确性因素比较多,难以满足急诊的需要.本文为探讨能否用UF-100尿沉渣分析仪检测脑脊液中的细胞数,采用UF-100尿沉渣分析仪对35例脑膜炎患者的脑脊液进行细胞数分析,并与显微镜下计数结果对比,现将结果报道如下.……     

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性

目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础。方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行。实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90。实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况。②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7d,绘制生长曲线。③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照)。④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率。将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存。30d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况。结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长。②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象。③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%。④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性。结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定。     

三种方法冻存间充质干细胞存活率的比较

近年来,掀起干细胞研究和应用的热潮,尤其是MSC已经广泛应用于临床各种疾病的治疗,因而,MSC的冷冻保存及其复苏后的存活对干细胞的临床应用尤为重要.本文对三种冻存方法进行了对比,以寻求MSC较佳的冻存方法.     

人脐带间充质干细胞体外成骨及其免疫学特征

背景：目前关于脐带源性干细胞的研究主要是针对其多向分化、组织修复方面,而对脐带干细胞的同种异体之间移植免疫学的报道较少。 目的：观察体外培养的人脐带间充质干细胞生物学特性、成骨分化潜能及移植免疫学特征。 设计、时间及地点：细胞学体外实验,于2008-11在吉林大学药学院病理学实验室完成。 材料：脐带来源于健康产妇足月剖腹产的胎儿,靠近胎儿侧5 cm,均征得孕妇同意。 方法：应用组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞,胰酶消化传代。取传至第5代细胞,加入含地塞米松、抗坏血酸、 β-甘油磷酸钠的α-MEM完全培养基进行成骨诱导。另取传至第5代细胞,分别进行正常培养及应用γ-干扰素刺激48 h。 主要观察指标：脐带间充质干细胞形态观察、生长曲线分析、免疫表型分析。碱性磷酸酶染色观察细胞成骨分化情况。流式细胞仪检测γ-干扰素刺激后细胞免疫表型变化。 结果：培养7 d倒置显微镜下可见组织块边缘出现呈长梭形、多角形或三角形的贴壁细胞,且随时间延长组织块周围细胞数量逐渐增多。第2,5,9代细胞之间的生长曲线无明显变化,培养20代内未见细胞衰老及增殖速度减慢等现象发生。第2代贴壁细胞CD44,CD105均呈阳性表达,CD34,CD45均呈阴性表达。成骨诱导14 d后,碱性磷酸酶染色可见胞核染成均一的淡蓝色。第5代脐带间充质干细胞HLA-ABC呈弱阳性(40.50%),HLA-DR,CD80,CD86呈阴性表达;γ-干扰素刺激48 h后,HLA-ABC阳性率增加至87.44%,HLA-DR,CD80,CD86仍呈阴性表达。 结论：人脐带间充质干细胞体外诱导成骨能力确切,具有类似骨髓间充质干细胞的特异性表面标记,且具有同种异体移植的低免疫原性。     

负载自体骨髓间充质干细胞人羊膜贴片移植对切除翼状胬肉患者损伤角膜的保护

背景：近年来国内外对单纯羊膜移植和羊膜负载细胞移植治疗角膜损伤的研究逐渐增多，在动物实验中已取得确切疗效，但临床应用报道甚少。 目的：拟制备人羊膜负载的自体骨髓间充质干细胞贴片，观察贴片移植后角膜损伤的改善。 设计、时间及地点：细胞组织工程学体内观察，于2008-02在四平市中心医院中心实验室完成。 对象：同期四平市中心医院收治的1例翼状胬肉患者。羊膜取自正常剖腹分娩产妇的胎盘。 方法：无菌条件下钝性分离人羊膜与绒毛膜，胰蛋白酶消化去除羊膜表面上皮细胞，将硝酸纤维素膜剪成适合眼部大小的圆形支架贴于基底面，将膜片浸泡在α-MEM培养基中，上皮面向上，4 ℃保存备用。采集翼状胬肉患者自体骨髓，Ficoll法密度梯度分离骨髓单个核细胞，于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中孵育扩增，将鉴定后的第3代骨髓间充质干细胞按2×105密度接种至羊膜上，加入含10%血清的α-MEM培养基，细胞长满后进行移植。洗涤负载骨髓间充质干细胞的人羊膜贴片至无橙红液体，通过眼科手术去除病变组织后，将羊膜贴片细胞面向上覆盖于翼状胬肉患者角膜病变表面，缝合固定后，另缝合一层单纯羊膜用于保护移植细胞。 主要观察指标：人羊膜负载的骨髓间充质干细胞鉴定结果，贴片移植效果。 结果：接种到人羊膜上4 h细胞开始贴壁，培养24 h细胞变为梭形且数量增多，48 h后细胞紧密排列，倒置显微镜下人羊膜上的骨髓间充质干细胞覆盖面积大于80%，锥虫蓝染色细胞存活率大于90%，免疫荧光染色细胞CD44和CD90阳性率均大于90%。人羊膜负载的骨髓间充质干细胞贴片移植后1周内，羊膜贴片无溶解和脱落，患者眼表透明，无水肿；移植后8个月内无新生血管生成。 结论：骨髓间充质干细胞接种到人羊膜上生长状态良好，将该贴片移植至切除翼状胬肉患者后短期内未发生溶解和脱落，患者视力得到改善。